不同加工方法对骨碎补质量影响研究

杨 润，王 亮，谢 宇，罗 君，薛鑫宇，张丽艳*

(1.贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025；2.贵州广济堂药业有限公司，贵州 贵阳 550014；3.贵州中医药大学第一附属医院，贵州 贵阳 550001)

骨碎补为水龙骨科植物槲蕨Drynariafortunei(Kunze)J.Sm.的干燥根茎，味苦性温，归肝、肾经，具有内服疗伤止痛、补肾强骨，外用消风祛斑的功效[1]，化学成分为黄酮类、苯丙素类、木脂素、三萜类等，其主要活性成分为黄酮类中柚皮苷[2-4]。由于骨碎补生品药材表面密被鳞片和绒毛，这不利于煎煮或粉碎以及有效成分溶出，目前临床上常采用砂烫法炮制骨碎补后入药。对于骨碎补砂烫炮制后的含量有无影响，近年来，大量研究学者对骨碎补药材炮制前后进行了有效成分溶出以及含量对比研究，证实了骨碎补炮制后可提高其总黄酮中柚皮苷的含量[5-9]。由于骨碎补在存放过程中会产生一定的杂质，这可能会影响其有效成分的溶出和含量的变化。为进一步探究骨碎补生品与炮制品中杂质对有效成分溶出和含量的影响，本研究通过测量不同产地骨碎补未去毛生品、去毛生品、未去毛炮制品、去毛炮制品的水分、总灰分、醇溶性浸出物、柚皮苷的含量，并对其进行对比分析研究，从而保证骨碎补质量的提升，为临床选择性用药提供参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

蒸发皿、具塞锥形瓶、坩埚、干燥器、SX-4-10型箱式电阻炉控制箱(天津市泰斯特仪器有限公司)；ABZ04-S型电子天平(上海梅特勒有限公司)；DK-98-I型数显恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司)；电热恒温鼓风干燥箱(上海贺德实验设备有限公司)；粉碎机(武义海纳电器有限公司)；电热炉(方科仪器有限公司)等。

1.2 试药

柚皮苷对照品(中国食品药品检定研究院，含量：93.4%，批号：110722-200309)；骨碎补药材自采于贵州省惠水县、长顺县、平坝县、纳雍县、三都县、荔波县、独山县、凯里市、望谟县、册亨县，经贵州中医药大学魏升华教授鉴定，骨碎补为水龙骨科植物槲蕨Drynariafortunei(Kunze)J.Sm.的干燥根茎。

2 方法与结果

2.1 水分及总灰分测定

取各产地骨碎补生品及炮制品，对其进行去除磷毛、绒毛处理，并将其分为去毛、未去毛生品和去毛、未去毛炮制品各四组，各组取粉末2.0 g(过二号筛)，精密称定，按2015版《中国药典》四部通则0832水分测定法项下烘干法和通则2302进行测定。每个产地平行测定2份，结果见表1、表2、表3、表4。对比分析结果见图1、图2。

表1 不同产地未去毛生品水分、总灰分和醇溶性浸出物测定 (n=2，%)

表2 不同产地去毛生品水分、总灰分和醇溶性浸出物测定 (n=2，%)

表3 不同产地未去毛炮制品水分、总灰分和醇溶性浸出物测定 (n=2，%)

表4 不同产地去毛炮制品水分、总灰分和醇溶性浸出物测定 (n=2，%)

图1 各组水分测量结果对比分析

图2 各组总灰分测量结果对比分析

2.2 浸出物测定

按照“2.1”项下进行处理分组，各组取骨碎补粉末2.0 g(过二号筛)，精密称定，按2015版《中国药典》四部通则2201醇溶性浸出物测定法中热浸法(稀乙醇作为溶剂)进行测定。每组平行测定2份，结果见表1、表2、表3、表4。对比分析见图3。

图3 各组醇溶性浸出物测量结果对比分析

2.3 柚皮苷含量测定

按照“2.1”项下进行分组处理骨碎补，参照2015年版《中国药典》一部项下“骨碎补”中柚皮苷的含量测定方法，采用高效液相色谱法测定药材中柚皮苷含量。

2.3.1 色谱条件和系统适应性条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-醋酸-水(35∶4 ∶65)为流动相，检测波长为283 nm，进样量为10 μL，柱温为30 ℃，流速为1.0 mL·min-1。理论板数按柚皮苷峰计算应不低于3 000。空白溶剂、对照品和供试品溶液的HPLC色谱见图4(选取贵州贵阳产地)，测量结果见表5，对比分析见图5。

图4 空白溶剂(A)、对照品溶液(B)及未去毛生品供试品溶液(C)、去毛生品供试品溶液(D)、未去毛炮制品供试品溶液(E)、去毛炮制品供试品溶液(F)HPLC(1为柚皮苷)

2.3.2 对照品溶液制备 取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含柚皮苷60 μg的溶液，即得。

2.3.3 供试品溶液制备 每组精密称取各产地药材粉末0.25 g，置于锥形瓶中，加甲醇30 mL，加热回流3 h，放冷，滤过，滤液置50 mL量瓶中，用少量甲醇分次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

表5 各组橙皮苷测量结果 (%)

图5 各组柚皮苷含量测量结果对比分析

3 讨论

不同加工方法处理后，骨碎补的水分、总灰分、醇溶性浸出物、柚皮苷的测定结果均符合药典标准规定[1]。

由于骨碎补生品上密被的鳞片和附着的绒毛吸水性较强，未去毛生品水分均高于去毛生品；与此同时骨碎补砂烫撞去毛后，饮片处于膨胀状态，外层无保护作用，比较容易吸潮，这才使得未去毛炮制品的水分均低于去毛炮制品。此外，未去毛样品的总灰分含量均高于去毛样品，这可能是由于骨碎补表面密被的鳞片和绒毛易吸附沙粒、泥土等杂质所导致的。

在醇溶性浸出物测量时，对乙醇的浓度进行了考察。考察了95%、80%、70%和60%乙醇作为提取溶剂来测浸出物的含量，结果以70%乙醇作为提取溶剂时，醇溶性浸出物的含量最高，因此选70%乙醇作为提取溶剂。此外四组药材醇溶性浸出物测量结果显示，各组去毛药材均高于未去毛药材。

在供试品溶液制备中考察了甲醇的浓度，考察了70%、60%甲醇和稀甲醇进行回流提取，以出峰量为指标，结果以70%甲醇提取时，出峰量最多，故选70%甲醇为提取溶剂。同时四组药材的柚皮苷含量测定结果表明，各组未去毛药材均低于去毛药材。

综上所述，可确定骨碎补表面密被的鳞片和绒毛易吸附杂质。在临床用药时，应选择砂烫撞去毛的骨碎补入药。