HPLC法同时测定藿香正气水中五种标志成分

时间：2024-06-19

何祥伟

（瑞昌市中医院，江西瑞昌 332200）

藿香正气水是夏季常用解暑药物，主要由藿香、苍术、陈皮、厚朴、白芷、茯苓、大腹皮、半夏、甘草、紫苏等中药组成，具有散寒化湿、和中祛暑的作用，常用来治疗脘腹胀痛、呕吐腹泻以及胃肠型感冒［1］。厚朴、白芷和甘草是藿香正气水中重要的组成药物，分别具有影响胃肠活动、抗菌、抗病毒等作用；有解热、镇痛、抗菌消炎和解痉作用；有抗炎、抗病毒、抗变态反应、保肝、提高机体免疫力等作用［2－4］。厚朴主要化学成分为厚朴酚与和厚朴酚［5］。白芷的主要活性成分为香豆素类成分和挥发油类成分，如欧前胡素、异欧前胡素。甘草主要成分有甘草酸、甘草次酸等。因此，为其主要有效成分制定质量控制指标，对保证藿香正气水质量有重要意义。

1 仪器与试药

Waters2695高效液相色谱仪（美国，Waters公司），包括四元泵，PAD二极管阵列检测器，自动进样器，Waters Empower 3工作站；KQ－500E台式超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；SartoriusBP211D型十万分之一电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）；乙腈为色谱纯（德国MERCK公司），水为娃哈哈高纯水，其余试剂均为分析纯。

对照品甘草酸（批号：110731－200907，GCS）、欧前胡素（批号：110826－200904，OQHS）、异欧前胡素（批号：110827－201007，YOQHS）、厚朴酚（批号：110756－200911，HPF）与和厚朴酚（批号：110730－2009061，HHPF）均购自中国药品生物制品检定所，纯度经HPLC（面积归一法）检测大于99.0%。藿香正气水购自四川德元药业集团有限公司（批号：090306）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Waters Symmetry C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为0.05%甲酸水溶液（A）－乙腈（B）；梯度洗脱：0～10min，40%B；10～25min，40%～45%B；25～30min，45%～50%B；30～60min，50%～55%B；流速1.0mL／min，柱温40℃，检测波长254nm，进样量10μL。对照品及样品色谱图见图1。在此色谱条件下，5个目标成分能够很好地分离，峰形尖锐，无明显的杂质峰影响。5个目标成分的保留时间分别为12.8（GCS）、37.1（OQHS ）、40.2（HHPF ）、46.1（YOQHS）和50.3min（HPF）。

2.2 对照品溶液的制备

取上述5个成分的对照品适量，精密称定，用乙腈溶解，分别配制成1.0μg／mL贮备母液；精密量取各成分母液适量，按比例配成含5个成分的混标溶液，其中5个成分的含量分别为93.50（GCS）、41.30（OQHS ）、18.15（YOQHS ）、311.0（HHPF）和235.0μg／mL（HPF），保存于4℃冰箱中，备用。

2.3 供试品溶液的制备

取藿香正气水适量，直接经0.45μm滤膜过滤即得供试品溶液。

2.4 标准曲线和线性范围

上述混标溶液用乙腈依次稀释成系列浓度，进样分析。每个浓度进样3次，取平均值。以浓度对成分峰峰面积进行线性回归。甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素、厚朴酚、和厚朴酚的标准曲线分别为：y＝4.106x－11.09；y＝17.97x－8.436；y＝16.03x－5.807；y＝6.854x－6.512；y＝12.02x－235.4。线性范围分别为93.50～467.5、41.30～206.5、18.15～90.75、235.0～1175和311.0～1555μg／mL，各成分标准曲线在线性范围内线性关系良好（r＞0.9999）

图1 典型色谱图对照品色谱图（上）对照品（下）样品

2.5 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液，一天内连续进样分析，计算日内精密度；连续三天进样分析，计算日间精密度。结果表明，各成分色谱峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致，日间精密度和日内精密度数据（RSD%）在0.20%～0.22%之间，说明仪器的精密度良好。

2.6 重复性试验

同一批号的5份样品按样品含量测定方法进行测定，结果表明，各成分色谱峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致，甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素、厚朴酚、和厚朴酚含量的RSD值分别为1.34%，1.67%，0.80%，1.18%和1.23%。说明此方法的重复性好。

2.7 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，按样品含量测定方法分别放置（贮存于4℃冰箱）在0，4，8，12，24h后，进样分析。结果表明，各成分色谱峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致，甘草酸，欧前胡素、异欧前胡素、厚朴酚、和厚朴酚含量的 RSD 值分别为 0.39%，0.31%，0.34%，0.31% 和0.37%，结果表明供试品溶液在24h内稳定。

2.8 回收率试验

分别精密吸取已知含量的藿香正气水溶液（55.7、26.4、12.6、106、103.5μg／mL）5份，稀释为原浓度的1／4，分别精密加入上述对照品混标适量，分别进样分析，结果甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素、厚朴酚、和厚朴酚的平均回收率分别为99.31%，99.50%，99.53%，99.08%，99.17%。各成分平均加样回收率均大于95.0%，符合定量要求。