GC法测定人参有机氯农药残留物的含量

关泽明，郭晓玲，陆子钊

（1.广东药学院 中心实验室，广东 广州 510006；2.广东永康药业有限公司，广东 云浮 527100）

人参为五加科植物人参（Panax ginseng C.A.Mey.）的干燥根及根茎。具有提高免疫力、抗癌、抗疲劳、抗缺氧、抗辐射、抗衰老、滋阴壮阳、增强记忆力、消炎等多种功能。有机氯农药是一类广谱杀虫剂，属于神经毒物，可致癌的有机氯农药以六六六和滴滴涕等为代表，在我国曾广泛适用于农业和中药人工栽培生产中。虽然禁用多年，但是由于它们的半衰期长，至今在中药材中的检出率仍相当高［1－3］。本实验建立了用毛细管柱气相色谱外标法对人参中有机氯农药残留量进行测定的方法，为人参的安全使用提供科学的质量控制依据。

1 仪器与试剂

美国 Varian CP－3800气相色谱仪，配有Combi Pal自动进样器、CP－SIL24CB弹性石英毛细管柱（30m×0.32mm×0.25mm）、63Ni电子捕获检测器（ECD）、Galaxie色谱工作站；RE－52C型旋转蒸发仪；BP210D型电子天平（十万分之一）。

二氯甲烷、丙酮 、石油醚（60℃～90℃）均重蒸，实验用水为双蒸水，浓硫酸等所用化学试剂均为分析纯。

农药对照品溶液包括六六六的四种异构体及滴滴涕的四种异构体均由中国计量科学研究所提供，其质量浓度分别为：甲体六六六（α－BHC51.8μg／mL）、乙体六六六（β－BHC）、丙体六六六（γ－BHC）均为50.0μg／mL、丁体六六六（δ－BHC53.3μg／mL），p，p’－DDT（49.3μg／mL）、p，p’－DDD（49.7μg／mL）、p，p’－DDE、o，p’－DDT 均为50.1μg／mL；五氯硝基苯（PCNB质量浓度为100μg／mL，由农业部环境保护科研监测所提供）。

12批人参样品产自吉林，均由广东永康药业有限公司陈继慈副主任药师提供并鉴定为人参五加科植物人参（Panax ginseng C.A.Mey.）的干燥根及根茎。

2 实验方法

2.1 样品溶液的制备

先将人参粉（过80目筛）样品于60℃干燥4h取本品约2g，精密称定，置于100mL具塞锥形瓶中，加水20mL浸泡过夜。准确加丙酮40mL，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用丙酮补足减失的重量。再加氯化钠约6g，准确加二氯甲烷30mL，称定重量，超声处理15min，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，静置使分层。将有机相迅速移入装有5g无水硫酸钠的100mL具塞锥形瓶中，放置4h。准确量取35mL，于40℃水浴上减压浓缩至近干，加5mL石油醚如前法反复操作三次至二氯甲烷及丙酮除净，溶解并转移至10mL具塞刻度离心管中，加石油醚准确稀释至5mL，小心加入浓硫酸1mL，振摇1min，离心（3000r·min－1）10min，准确量取上清液2mL，置具刻度的试管中，40℃下用氮气吹，将溶液浓缩至约0.5mL，加石油醚准确稀释至1mL，作为样品溶液备用。

2.2 色谱条件与系统适应性试验

色谱柱：CP－SIL 24CB（30m×0.25mm×0.25um，美国Varian公司）弹性石英毛细管柱；进样口温度260℃，检测器温度300℃，柱升温程序为初始温度120℃，保持2min，以5℃／min升至200℃保持10min，以2℃／min升至220℃保持2min，以8℃／min升至250℃保持19min；载气为高纯氮气（质量分数≥99.999%），2μL分流进样、分流比（1：1）；外标法定量。将单一农药对照品液依法进样，各农药组分的出峰顺序依次为 α－BHC、PCNB、γ－BHC、β－BHC、δ－BHC、pp’－DDE、o，p’－DDT、pp－DDD、pp’－DDT。取样品溶液2μL，依法测定，理论塔板数按α－BHC对照品色谱峰计算不低于1×105，各农药组分色谱峰与其相邻色谱峰之间分离度均大于1.5。

2.3 方法学考察

2.3.1 标准曲线

精密移取α－BHC、β－BHC、γ－BHC、δ－BHC、p，p’－DDT、p，p’－DDE、p，p’－DDD、o，p’－DDT 对照液各1.0mL，PCNB对照液0.5mL，分别置于10mL量瓶中，加石油醚配成5.0μg／mL的对照品储备液（按标准值分别准确计算，以下同）。精密移取5.0μg／mL对照品储备液各适量，用石油醚配制成1、5、10、25、50、100μg／L的混合对照品溶液。分别取上述混合对照品溶液各2μL进样，以峰高为纵坐标，质量浓度（μg／L）为横坐标，计算回归方程（见表1）。结果表明，各被测组分在1～100μg／L浓度范围内与峰高均呈良好的线性关系。

2.3.2 方法的最低检测限试验

配制质量浓度为0.5μg／L和1.0μg／L的混合对照品溶液进样，以3倍的噪声作为方法的最低检出量，测得α－BHC、β－BHC、γ－BHC、δ－BHC、p，p’－DDT、p，p’－DDE、p，p’－DDD、o，p’－DDT、PCNB的最低检测浓度均为50ng／L；p.p’－DDT的最低检测浓度为100ng／L。

2.3.3 精密度试验

精密吸取浓度为50μg／L的9种混合对照品溶液2μL，按“2.2”项下的色谱条件操作，重复进样6次，以峰高计算，结果 α－BHC、β－BHC、γ－BHC、δ－BHC、p，p’－DDT、p，p’－DDE、p，p’－DDD、o，p’－DDT、PCNB 的RSD值分别为1.15%、1.30%、1.46%、1.06%、2.84%、1.58%、0.67%、1.63%、1.96%，表明仪器精密度良好。

表1 9种有机氯农药回归方程

2.3.4 重复性试验

精密称取同一批人参粉样品（批号为101206）5份，按照“2.1”项下制备样品，依法测定，按外标法以峰高计算含量，测得α－BHC、β－BHC、γ－BHC、δ－BHC和PCNB的平均质量分数（RSD 值）分别为56.51ng／g（1.99%）、77.35ng／g（2.65%）、46.20ng／g（1.84%）、119.09ng／g（2.00%）和169.24ng／g（2.77%），表明方法的重复性良好。

2.3.5 稳定性试验

取同一份人参粉样品 （1号样）溶液2μL，分别于0、4、8、12h依法连续进样4次进行测定，以峰高计算α－BHC、β－BHC、γ－BHC、δ－BHC和 PCNB 的 RSD 值分别为3.34%、2.61%、3.47%、2.87%、3.31%，表明样品溶液在12h内测定稳定性良好。

2.3.6 加样回收率试验

取同一批人参粉样品（批号为101206）6份，每份取约1g，精密称定。分别准确加入质量浓度为100μg／L混合对照品溶液1.0mL，混合后挥干溶剂。按“2.1”项下制备供试样品溶液，依法测定，计算回收率，结果见表2。

2.3.7 样品含量测定

准确称取各批次人参样品，按“2.1”项下制备样品溶液，依法进行测定，按外标法以峰高计算含量，结果见表3、图2。

3 讨论

由图1及图2实验结果表明，对照品滴滴涕四种异构体出峰的保留时间处人参样品色谱图中并未出峰，12批人参样品均是此现象，表明实验所提供的人参中均未检出滴滴涕。

2010年版《中国药典》未对人参［1］8的农药残留量进行限量，参考同版药典中黄芪［1］283和甘草［1］80农药残留量限度规定（总六六六和总DDT均不得过千万分之二、五氯硝基苯不得过千万分之一，由表3的数据可以看出，本文所检测的人参样品中六六六、五氯硝基苯在人参药材中均有检出，其中101206批号人参样品的总六六六残留总量为298.81ng／g、五氯硝基苯残留总量为118.86ng／g，均高于药典中有机氯农药残留量的规定；其它11个批号样品均未超出药典规定，故建议在人参药材标准中增加有机氯农药残留量限度的检查项目。

表2 人参粉样品的加样回收率

表3 人参中有机氯农药测定结果

图1 人参中有机氯农药色谱

图2 混合对照溶液中9种有机氯农药色谱

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.一部.北京：中国医药科技出版社，2010.

［2］成启刚，寇登民，张静，等.气相色谱法测定人参、黄芪中有机氯农药残留［J］.南开大学学报：自然科学版，2004，37（2）：125－128.