简析农药残留快速检测的必要性

胡世玮

（杨凌质量技术检测检验所，陕西 杨凌 712100）

0 前言

现代人们的生活水平日益提高，农产品质量安全逐渐成为社会关注的热点问题，怎样快速安全的买到放心可食用的农产品成为民众关心的热门，借此农产品质量安全检测被进一步推向公众眼前。但是采用传统的实验室定量检测价格昂贵、检测成本高、样品预处理繁琐，不能达到及时监测目的。因此，发展高效、快速、准确的农药残留检测技术是解决这个问题的最好途径。建立一种有效、准确的可应用农残检测方法势在必行。在各种农残检查方法中，农药残留的酶抑制分光光度计方优点是：检测快速便捷，经济，低成本，对于有机磷以及氨基甲酸酯类的果蔬农药残留检测迅速准确，很多部门选择这一方法对农残进行有效的检测监督。

1 检测原理

酶抑制分光光度法利用逆向思维，采取GB／T5009．199-2003 的检测标准进行检测，该方法的原理是：在特定条件下，有机磷以及氨基甲酸酯类两种农药可以抑制胆碱酯酶的正常运作，农药的浓度以及抑制率为正比关系。这种方法可以提取乙酰胆碱酯酶（ACHE），从家蝇以及其他动物的组织中获取,再与蔬菜样本的提取液充分混合，检测的底物成分包含碘化乙酰硫代胆碱（ATCHI），显色剂的成分包含二硫双硝基苯甲酸（DTNB），对试剂进行比色检测，通过一段时间的检测，得到吸光值的准确数值，乙酰胆碱酯酶的受抑制情况由吸光值分析进行计算。乙酰胆碱酯酶的活性与残留农药有关，农药会抑制其活性，随着农药的浓度提高，对酶的活性的抑制率随之升高。检验中通过仪器对酶、底物以及显色剂发生显色反应时的变色速率进行检测，将其与空白样本进行对比，计算并得出酶的抑制率，根据这一结果得出农药残留量，检测其是否超标。

经过检测，农药残留溶液的最大吸收峰处于412nm 处。使用波长为412nm 的单色光源投射样品以及参照溶液。将待测溶液以及参照溶液进行吸光度对比，根据2 种溶液不同的吸光度变化进行计算，得出对酶活性的抑制率，经过计算结果可判定：当抑制率低于50%时，样品合格；当抑制率大于等于50%时，样品不合格，所测定样品的农药残留高于标准线。当所测样品不合格，抑制率大于等于50%时，必须将样品重复检测，检测数大于三次，当检验结果难以确认，可利用色谱仪以及质谱仪结合以上方法进行进一步检测。

2 酶抑制分光光度法的优缺点

1）酶抑制分光光度法优势：一是简便快捷，该方法样品前处理极为简单，一个熟练的检测人员40分钟可检测14-16 个样本，非常适合蔬菜品种多，批量大的蔬果生产基地。二是进行蔬果农药残留检测不需要专门的化验室，只需占据房间一角，有两张桌子大小的台子即可，非常适合农业生产基地。且每份样品进行检测的成本低廉，在人民币1 到2元的范围内。三是该方法对操作人员的要求不是很高，具有初、高中文化程度的人员，经过一定短期培训即可胜任，容易得到普及和推广。四是农药残留快速检测法是专门针对有机磷以及氨基甲酸酯两类农药的测定法，这种方法对有机磷高毒农药（甲胺磷、甲拌磷、氧乐果等）以及氨基甲酸酯类（克百威等）两大类农药灵敏度较高，而这些农药正是我国在蔬果上发现违法使用的主要农药品种，因此该方法对蔬果农药残留的检测具有很强的针对性。适合对果蔬农残定性定量检测的初级筛选，这种方法使得实验室内仪器的分析工作量大大降低。

2）酶抑制分光光度法不足：一是酶试剂容易失去活性，导致反应状态不稳定，检测结果存在较大误差，重复性低，在现实应用时确认率处于60%到70%之间。二是检测农残的品种单一，这种方法的检测种类只有有机磷以及氨基甲酸酯2 种，对于剧毒农药例如有机氯和菊酯等其他类别无法检测。对于农药最低检测浓度（处于1 到20mg/kg 之间）高于国内外的限定残留标准量。所以不能利用这种酶抑制法进行结果判定并将其结果用于法律仲裁的凭证，此种方法仅仅可利用其进行初步筛选。三是此种方法对葱、蒜、花椒、香菜、蘑菇、韭菜、番茄、茭白、胡萝卜等可能呈现假阳性的14 种蔬菜不适用。这类农产品进行检测时，可以对整株、整块的蔬菜进行浸泡，提取农残。对一些含叶绿素较高的蔬菜，可以利用活性炭以及藻土对其进行颜色的吸附，这样可以减少颜色对检测的结果产生不良影响。四是进行检测时需要专门培训检验员，检验员必须进行正规培训，这样可以对检测时出现的问题进行正确的判断与处理，避免产生错误的检测结果。

3 检测试剂的配置、保存、使用

在配置检测试剂方面，必须使用去离子水或者蒸馏水对缓冲液进行配置，确保检测结果的准确性。

保存检测试剂时，必须处于0 到5℃对乙酰胆碱酯酶、显色剂以及底物这3 种液体进行保存（缓冲液除外）。其中最重要的是乙酰胆碱酯酶的保存。长时间的室温放置或者经过反复的冻化，会使酶的活性受到影响，检测结果也会因此不准确。综上所述，检测时应结合实际检测量进行配置，做到随用随配，小支分装进行储存，不能出现反复冻化的现象。

试剂的使用方面，首先将酶从冰箱拿出，静置于室温状态15 分钟左右，充分发挥酶的活性，使其达到最佳值。检测农残时，将底物加入至待测样品中立即摇匀，然后将试剂放进比色池进行比色，保证检测结果的准确性。

4 仪器设备的要求

环境温度对检测结果会有一定的影响，为了避免这种影响，检测仪器应进行30 分钟的预热，从而进行正式的检测。开机预热以及正式检测的中间，应当对试剂进行“空白测试”，根据测试结果对试剂以及检测时间充分调整，确保试剂的有效性以及使用性。

检测时必须保证比色皿具有良好的透光度。试验后要定期用酒精对比色皿进行清洗，在使用前应使用擦镜纸对透光面进行擦拭。使用时轻拿轻放不可拿捏透光面。检测完成后，应立即将其用清水冲洗，接着使用去离子水对其进行润洗。且冲洗后需倒置于滤纸上晾干在使用，不可马上使用。

检测时所用到的移液枪（移液管），必须贴上专用标签，防止因为交叉使用从而造成检测污染；试剂一旦吸出就不能再放回试剂瓶中，这样会造成试剂受到污染。

5 结束语

综上所述，酶抑制分光光度法与传统仪器分析方法相比，存在以下缺点：检测精度相对较低，仅能检测单一项目，只有有机磷以及氨基甲酸酯两类农药可进行检测。但这种方法操作简便、检测快速、成本低廉，并且可以对大规模的样品进行初步筛选，并在特定环境下对农产品的质量安全进行有效的监督管理。所以，具体的实践操作时，应最大可能地减少外部因素对其产生的影响，以保证检测结果的准确率。因此，将农药残留检测的酶抑制分光光度法进行推广，并将其作为市场准入门槛有一定的意义。