分光光度法测定饲料总磷含量的探讨

黄勇虾

(漳州市产品质量检验所， 福建　漳州　363000)



分光光度法测定饲料总磷含量的探讨

黄勇虾

(漳州市产品质量检验所， 福建漳州363000)

采用钒钼酸铵分光光度法对饲料总磷含量的测定进行探讨。将试样中游离出来的磷在酸性溶液中与显色剂钒钼酸铵作用，生成黄色的络合物，在特定波长下进行比色测定。考察了吸收波长、显色剂用量、静置时间对实验结果的影响。实验结果表明，除静置时间外，吸收波长和显色剂用量对实验结果均有较大的影响。最佳实验条件为：吸收波长400 nm，显色剂10 mL,在该条件下，总磷的测定结果重现性好、准确度高。

钒钼酸铵；分光光度法；总磷；饲料

在饲料的矿物质元素中，磷的含量是饲料的基本营养学指标[1]。磷是畜禽生长发育必不可少的营养成分，直接影响到畜禽的生长发育和生产性能[2]。磷元素在动物体内含量不足将导致动物易发生疾病，如食欲不振、心跳减弱、皮肤感觉丧失、全身虚弱等，但如果用之过量，可能又会破坏畜禽生长的正常代谢过程及必要的生产过程[3]。因此，快速而准确地测定饲料中总磷的含量具有重大意义。

到目前为止，有很多文献报导了有关磷的测定方法，如流动注射分析法[4]、气相色谱法、原子吸收法[5]、导数极谱法、荧光光谱法[6]、电位滴定法、等离子发射光谱法[7]等，但上述方法对仪器设备的要求较高，且测定方法较为繁琐，尚未得到广泛的应用。分光光度法作为一种简便快捷的分析方法[8-9]，被广泛应用于饲料中磷含量的测定。本文采用钒钼酸铵分光光度法，探讨了吸收波长、显色剂用量、静置时间等实验参数对饲料总磷测定结果的影响，优化了实验条件，并对方法的精密度及准确度进行了验证。

1　实　验

1.1仪器和设备

实验室用样品粉碎机或研钵；分样筛，孔径0.45 mm(40目)；AE200电子天平(感量 0.0001 g)，梅特勒-托利多(上海)有限公司；760 CRT双光速紫外可见分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；SX2-6-13箱式电阻炉，上海跃进医疗器械厂；双联可调电炉，金坛市岸头良友实验仪器厂。

1.2试剂及显色剂的制备

(1)盐酸(化学纯)：1:1(V:V)水溶液。

(2)浓硝酸(化学纯)。

(3)钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵1.25 g，加硝酸250 mL；另称取钼酸铵25 g，加蒸馏水400 mL溶解。在冷却的条件，将后者倒入前面的溶液，使两种溶液混合，加水定容至1000 mL。避光保存，若生成沉淀，则不能继续使用。

(4)磷标准液：将磷酸二氢钾在105 ℃干燥1 h，在干燥器中冷却后称取0.2195 g溶于蒸馏水，定量转入1000 mL容量瓶中，加硝酸3 mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即为50 μg/mL的磷标准溶液。

1.3实验方法

样品处理：称样4～5 g左右，置于30 mL坩埚中，电炉上低温炭化至无烟后，(550±20) ℃灼烧灰化3 h。取出冷却，加入10 mL 盐酸(1+1)和浓硝酸数滴，小心煮沸约10 min。冷却后转移到100 mL容量瓶，定容，摇匀，即为试样分解液。

试样的测定：取试样分解液1.0 mL于50 mL容量瓶中；另取0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 mL 磷标液(相当于0、100、200、300、400、500、600 μg 含磷量)，分别置于50 mL容量瓶中，试样和标准管各加入钒钼酸铵显色剂，定容并摇匀，空白调零，测定吸光度。以磷含量未横坐标，吸光度为纵坐标，绘制工作曲线并计算试样的磷含量。

2　结果与讨论

2.1测定波长的选择

在两只50 mL容量瓶中分别加入0.0、6.0 mL磷标准溶液，再分别加入钒钼酸铵显色剂10.0 mL，定容摇匀。以试剂空白为参比，在330～500 nm之间进行测定，绘制吸收曲线如图1所示。图1表明，该溶液在360 nm处有最大吸收。

图1　吸收曲线

分别选择在340、360、380、400、420 nm处测定该标准管的吸光度并绘制相应的标准曲线，得出不同波长下测得的标准曲线线性参数，结果如表1所示。由表1可知，测定时选择吸收波长400 nm，标准曲线的线性相关性最好且吸光度值较大，灵敏度高。

表1　不同波长的参数测定

2.2显色剂用量的选择

表2　不同量显色剂的测定

对标准管(300 μg含磷量)分别加入不同量的显色剂，测定其吸光度，同时绘制不同显色剂用量下的标准曲线，结果如表2所示。由表2可知，随着显色剂用量的增加，吸光度值也变大。当显色剂用量为10 mL，标准曲线的相关性最好，灵敏度高，且显色剂用量与20 mL相比较少，因而为最优条件。

2.3静置时间的选择

在400 nm吸收波长下，选择标准管(300 μg含磷量)，在0～120 min之间进行时间扫描实验，绘制时间-吸光度曲线，结果如图2所示。图2表明，随着静置时间的延长，吸光度值变化较小，基本维持稳定，表明显色反应所生成的络合物较为稳定。

图2　时间-吸光度曲线

表3　静置时间的测定

对标准管(300 μg含磷量)分别静置不同时间，测定其吸光度，同时绘制不同静置时间下的标准曲线，结果如表3所示。由表3可知，不同静置时间所得标准曲线的线性相关性都符合要求，可见，静置时间对测定结果基本没有影响。为保证显色反应足够充分，以下实验选择静置10 min作为参数。

2.4精密度实验结果

取3份不同的饲料按上述实验结果所得的最优参数(波长400 nm，显色剂10 mL,静置10 min)分别测定5次，相对标准偏差在0.63%～0.93%之间，可见该方法的精密度高，符合卫生检验对精密度的要求，测定结果见表4。

表4　方法的精密度实验(n=5)

2.5回收率实验结果

表5　样品加标回收率实验

在上述3份样品的分解液中分别加入磷标准溶液，进行加标回收实验，结果见表5。由表5可知，不同饲料测得的回收率都在98.56%～101.62%之间，表明该方法准确度高，符合检验要求。

3　结　论

将饲料试样中的有机物破坏，使磷元素游离出来，在酸性溶液中，选择钒钼酸铵作为显色剂，采用分光光度法探讨了影响总磷含量测定的主要实验条件。分别对吸收波长、显色剂用量及静置时间等实验参数进行了优化，得出最佳的实验参数为：波长400 nm，显色剂10 mL，在该条件下，总磷的测定结果重现性好、准确度高。此外，该方法所以的试剂少，仪器简单，测定速度快，因而是一种简便快速测定饲料总磷含量的方法。

[1]刘艳妮,程开敏.对虾钙磷营养与生理研究进展[J].中国饲料, 2006(4):31-33.

[2]张永刚,李铁军,伍国耀,等.磷的吸收转运机制研究进展[J].广西农业生物科学, 2006,25(4):64-65.

[3]谷文英.配合饲料工艺学[M].北京:中国轻工业出版社,1999:11-12.

[4]王芹,尤小娟. 流动注射方法在线测定总磷[J].仪器仪表与分析监测, 2004(2):28-29.

[5]肖绪化,金峰,贾海宁.原子吸收法测定有机化合物中的硫和磷[J].光谱学与光谱分析, 1986(9):49.

[6]陈锁志,刘云岚.薄样x-射线荧光光谱法测定润滑油中锌磷含量[J].分析实验室, 1989(05):40-42.

[7]周史强. ICP光谱法和FIA光度法测定水中总磷的比较[J].广东水利水电, 2009(2):44-46.

[8]周婷.HACH DR/2500分光光度法测定水样中总磷的可行性研究[J].环境科学与管理,2009(8):125-127 .

[9]孙墨杰,靳世久.总磷快速分析方法研究[J].环境工程,2003(1):62-64.

Research on Determination of Total Phosphorus in Feed by Spectrophotometer Method

HUANGYong-xia

(Zhangzhou Product Quality Inspection Institute, Fujian Zhangzhou 363000, China)

The ammonium vanadate molybdate spectrophotometer method was used to explore the determination of the total phosphorus content in feed. The phosphorus was freed out of the sample. In the acidic solution, the phosphorus reacted with the chromogenic agent of vanadium ammonium molybdate to generate yellow complex, which was determined in a specific absorption wavelength. The effects of the absorption wavelength, the chromogenic agent, and the holding time on the experimental results were explored. The experimental results showed that in addition to the holding time, the absorption wavelength and the chromogenic agent had a great influence on the results of the experiments. The best experimental conditions were as follows: the absorption wavelength at 400 nm and 10 mL chromogenic agent, which resulted in a more reproducible and reliable determination result of the total phosphorus.

ammonium vanadate molybdate; spectrophotometer method; total phosphorus; feed

黄勇虾(1984-)，女，硕士，主要从事食品安全检验工作。

O652.1

A

1001-9677(2016)05-0162-03