高效液相色谱法测定辣椒油中的苏丹红染料

王 坤,赵浩军,张 燕(云南大理州质量技术监督综合检测中心，云南 大理 671000)



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高效液相色谱法测定辣椒油中的苏丹红染料

王 坤,赵浩军,张 燕
(云南大理州质量技术监督综合检测中心，云南 大理 671000)

建立了高效液相色谱法测定辣椒油中苏丹红染料的方法。用自制中性氧化铝固相萃取小柱吸附辣椒油中的苏丹红染料，丙酮洗脱，高效液相色谱-紫外检测器测定。在0.5 ～8 mg/L范围内，苏丹红溶液的浓度与峰面积呈良好的线性关系，相关系数为 0.999 8～0.999 9，苏丹红的回收率为97.28%～101.38%，相对标准偏差为0.74%～1.01%，方法检出限为0.13 mg/kg。用所建立方法对市售10个辣椒油样品进行了检测。

苏丹红；辣椒油；高效液相色谱；中性氧化铝

苏丹红是一类人工合成的偶氮染料，主要包括苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ4种类型。一般用于纺织品、化妆品的着色。研究表明，苏丹红具有潜在的致癌性、遗传毒性及致敏性,这与其代谢产物为胺类及萘酚类物质有关。[1-2]

目前，苏丹红的检测以HPLC[3-4]、HPLC-MS/MS[5]和GC-MS/MS[6]为主。质谱法仪器设备较昂贵，并且对操作人员的技术水平要求较高，难以普及。高效液相色谱仪器价格相对便宜，操作简单，对一般的检测机构来说都可以承担。国家标准GB/T 19681-2005[7]中规定了食品中苏丹红染料的高效液相色谱测定方法，但是通过大量的实验证明，该方法的回收率较低，并且洗脱效率较低。本实验通过对国标的部分改进，旨在提高方法的洗脱效率和回收率。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

超高效液相色谱仪(Waters ACQUITY UPLC H-class ，带PDA检测器，Waters科技有限公司)；超声波清洗器(AS20500BDT，中国天津Autoscience仪器有限公司)；Millipore超纯水设备(Direct-Q5，美国Millipore公司)；氮吹仪(MTN-2800DW，中国天津Autoscience仪器有限公司)；涡旋振荡器(美国热电公司)；电热鼓风干燥箱(北京永光明医疗仪器有限公司)；电子天平(梅特勒-托利多公司)；0.22 μm有机滤膜

乙腈(色谱纯，德国Merck公司)；丙酮(色谱纯，美国TEDIA公司)；正己烷(分析纯，利安隆博华(天津)医药化学有限公司)；丙酮(分析纯，上海申博化工有限公司)；甲酸(美国BE公司)苏丹红标准溶液(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，100 mg/L，北京海岸鸿蒙标准物质技术有限责任公司)；无水硫酸钠(上海试四赫维化工有限公司)；中性氧化铝(100-200目，上海五四化学试剂有限公司)。

1.2 苏丹红标准溶液的配制(混合标准溶液)

分别取100 μL苏丹红标准溶液Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ于2 mL液相用样品瓶中，加入900 μL丙酮，涡旋混匀30 s。

1.3 氧化铝的活化

取0.150～0.075 mm(100～200目)的中性氧化铝适量于电热鼓风干燥箱中130℃活化2 h，取出置于干燥器中冷至室温，待用。

1.4 中性氧化铝层析小柱的装填

在5 mL注射器的底部垫上一层脱脂棉，干法装入活化过的中性氧化铝3 cm，轻轻敲实，上部再装入3 mm的无水硫酸钠，敲实，备用。

1.5 样品的前处理

1.5.1 提取

辣椒油：准确称取辣椒油0.5 g(精确到 0.000 1 g)于三角瓶中，加入5 mL正己烷，超声10 min，待净化。

1.5.2 净化

先用10 mL正己烷淋洗中性氧化铝层析柱，待柱中正己烷剩余2 mm时，加入提取液，再用20 mL正己烷淋洗。然后在层析柱中加入50 μL超纯水，用丙酮洗脱至洗出液无色。洗脱液经氮吹仪吹干，用2 mL丙酮定容，过0.22 μm有机滤膜，上机测定。

1.6 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX RX-C8(4.6×150 mm,3.5 μm)；流动相A：0.1%甲酸的水溶液：乙腈=85∶15；流动相B：0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80∶20；梯度洗脱，洗脱条件见表1；柱温：30℃；检测波长：478 nm和520 nm，波长梯度条件见表2；进样量：10 μL。梯度洗脱条件及波长梯度条件见表1、表2。

表1 梯度洗脱条件Tab.1 Gradient elution conditions

表2 波长梯度条件Tab.2 Wavelength gradient conditions

2 结果与讨论

2.1 标准曲线及检出限

用10 mg/L的混合标准溶液配制成质量浓度为0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mg/L的标准系列， 在1.6所示条件下进行测定，以标准系列的质量浓度对应峰面积制作标准曲线，在配制的质量浓度范围内，苏丹红标准溶液的质量浓度(x)与峰面积(y)呈现良好的线性关系。线性关系及检出限见表3 ， 色谱图见图1。

图1 苏丹红混合标准溶液色谱图Fig.1 Sudan mixed standard solution chromatogram

2.2 精密度实验

精密度实验结果见表4。

表3 苏丹红样品的线性关系及检出限Tab.3 Linear relationship between the sample and the detection limit of Sudan

表4 精密度实验结果Tab.4 Precision results

2.3 回收率

称取0.5 g(精确到 0.000 1 g)辣椒油样品150 mL三角瓶中，加入100 μL的苏丹红混合标准溶液(10 mg/L)，超声10 min，按1.5所述步骤进行净化浓缩，并上机检测。加标回收实验结果见表5。

表5 加标回收实验结果Tab.5 Spike recovery experiments

2.4 对比检测

用国标方法和本方法对加标样品各进行5次平行测定，检验可疑值后，用SPSS进行数据分析，并进行F检验和T检验,结果表明，两种测定方法之间无显著性差异，结论的置信度为95%。结果见表6。

表6 对照测定结果Tab.6 Control assay results

2.5 样品测定

用该方法和国标方法对市售的8个辣椒油样品进行分析测定，均未检出苏丹红Ⅰ，苏丹红Ⅱ，苏丹红Ⅲ和苏丹红Ⅳ。

3 结论

国家标准GB/T 19681-2005规定的检测过程中，中性氧化铝活化后，要加水使活度控制在一定的范围内，这个范围很难控制。本方法将中性氧化铝活化后，直接填充色谱柱，加水灭活洗脱定容测定。在保证中性氧化铝活性的条件下将苏丹红完全吸附，加水灭活后用丙酮将苏丹红完全洗脱，检测结果与国标方法没有显著性差异。该方法回收率高，稳定性好，适用于辣椒油中苏丹红的测定。

[1] 宋雁,李宁.食品中苏丹红的危险性评估[J].国外医学卫生册,2005,32(3):129-132.

[2] XU Hai -yan,HEINZEM,CHE N Si-wei,et al.An aerobic metabolism of l-am i no-2-n aphth ol -based azodyes(Sudan dyes) by human intestinal microf lora[J].Applied and Environmental Microb iolog y,2007,73(23):7759-7762.

[3] 喻凌寒,牟德海,李光宪,等.HPLC -DAD 法测定红辣椒及其制品中苏丹 红Ⅰ的含量[J].光谱实验室,2004,21(6):1131～1133.

[4] 张玉黔,栾燕,王新丽,等.反相高效液相色谱法测定食品中苏丹红1、 2、 3、 4 的方法研究[J].中国卫生检验杂志,2005,15(7):807～808.

[5] Calbiani F,Car eri M,Elvir i L,et al.Developmentand In-H ouse Validat ion o f a Liquid Chr omato gr aphyElect rospary Tandem Mass Spect rometr y Method forthe Simultaneous Determination of Sudan Ⅰ,SudanⅡ,Sudan Ⅲ and Sudan Ⅳ in H ot Chilli Products[J].J chromat og r A,2004,1042(1/2):123～128.

[6] 苏小川,黄梅,甘宾宾,等.调味品辣椒粉和腌料中苏丹红I染料的GC-MS分析[J].中国卫生检验杂志,2005,15(9):1073～1074.

[7] GB/T 19681-2005食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法[S].

Determination of Sudan Dyes in Capsicol by High Performance Liquid Chromatograph

WANG kun,ZHAO Hao-jun,ZHANG Yan
(Dali Quality and Technical Supervision Comprehensive Inspection Center,Dali 671000,China)

A method is established to determine Sudan dyes in capsicol.Self made neutral alumina has been used to adsorb Sudan dyes in capsicol.Acetone has been used to delute Sudan dyes,and HPLC with UV detector has been used to determine Sudan dyes.In the range of 0.5 mg/L to 8 mg/L,it shows a good linear relationship,correlation coefficient is in the range of 0.999 8 to 0.999 9,the recovery is from 97.28% to 101.38%,the relative standard deviation is from 0.74% to 1.01%,the detection limit is 0.13 mg/kg.The method has been used to detect ten samples,the results show that the method is suitable for detection of Sudan dyes in capsicol with high selectivity and sensitivity.

Sudan dyes;capsicol;HPLC;neutral alumina

王坤 (1983-)，河南南阳人，硕士，工程师,研究方向：重金属及非法添加物检测。

12.3969/j.issn.1004-275X.2015.01.010

O657

A

1004-275X(2015)01-0038-04

收稿：2014-10-23