高纯度番泻苷A和高纯度番泻苷B的制备研究

谭琪明 李满香 杨广安 高煜翔

(1.铜仁职业技术学院，贵州 铜仁 554300；2.贵州农业职业学院，贵州 清镇 551400)

番泻属于豆科类植物，主要是矮小的灌木，大概是一米左右，其主要产于印度、埃及，我国的广西省、云南省、海南省等地也有引种。番泻中有效成分有多种，其中，主要有效成分是蒽醌类化合物，此外，还有黄酮、多糖等其他类化合物，所以，番泻有很多种药理作用：包括泻下、还可以进行止血、也可以起到抗菌的作用。但是，从目前情况来看，相关文献对于番泻苷的研究还是比较少的。因此，查到相关的资料可以得知，现在市场中高达百分之九十多的番泻药材主要都是以进口为主的，进口的国家多数为印度，虽然说进口的药材比较多，但是和人们的具体使用情况来对比，还是远远不够的。因此，通过对高纯度番泻苷A和番泻苷B制备的研究，为市场上研究和开发含番泻苷类有效成分的药物提供物质选择，同时弥补番泻供给量的不足。

1 材料

1.1 仪器与设备

使用到的仪器主要包括超声波清洗器、恒温水浴锅、电子天平、不锈钢电热蒸馏水器以及旋转蒸发器、循环水式多用真空泵、LC-2040C 3D型号的色谱仪，产地是日本；还有TQ-144色谱仪，(天津天光光学仪器)；BCD-205型冰箱(TCL集团股份有限公司)；其他为一般常规仪器。

1.2 药物的试用

对番泻苷A和番泻苷B进行提取，番泻苷的含量是百分之十二点六和百分之十四；使用到的硅胶薄层板，主要是由青岛海洋化工厂所产；主要使用到的试剂是甲醇和乙腈，碳酸氢钠，乙酸乙醇，矿泉水以及自制的蒸馏水。

2 方法和结果

2.1 色谱的条件

使用到的色谱柱是Supersil-T C18的分析柱；零下零点四的流酸水；检测的波长是三百四十纳米，柱温设置在二十五摄氏度，需要的样品量为μL。

2.2 对薄层色谱进行分析

可以选用薄层色谱的相关方法。主要是使用精密称对番泻苷A和番泻苷B进行提取，并且要对适用量进行分析，主要是使用碳酸钠百分之零点一、甲醇百分之三十进行溶液的配置，可将其用作对照溶液。然而，对于照薄层色谱法进行试验，可以使用精密仪器对番泻苷A和B进行提取，选取试剂10μL、选取番泻苷A和B的对照品溶液10μL，将其都放置于薄层板上，然后再选取四比四比三的正丙醇、乙酸乙酯和水，放入到开缸中，时间可以选取十五分钟，进而取出再对其进行晾晒，最后需要放置到二百五十四纳米的紫外灯下进行检验。从本次研究中可以得出，在对番泻苷A和番泻苷B对照品色谱相应位置中，提取物薄层色谱的颜色出现了荧光斑点。番泻苷A的射频值为零点四三、B则为零点二五。所以说，在这样的条件下，可以对番泻苷A和B进行有效的分离。

图1 薄层层析图谱

2.3 硅胶柱层析方法分离番泻苷A和番泻苷B

经薄层色谱分析确定展开剂后，将含量为百分之十二点六的番泻苷A和含量为百分之十四点五的番泻苷B提取物进行分离，可以使用水、乙酸乙酯和正丙醇进行溶解，它们的选取比例为一比一比一，然后按照固液比进行溶解，可以使用超声波进行，固定相为柱层析硅胶，其体积为七百毫升，选取的径高比是一比十，选取正丙醇、乙酸乙酯和水的比例为四比四比三，各选取五十毫升，可以分别将洗脱液进行收集，再放置大约时间为一周。再结晶析出后，需要过滤，再使用洗脱机洗结晶，这样的操作可以反复两到三次，再对其进行阴干，继而再测定相应的含量。如果没有析出结晶，就需要选择溶剂将其挥发干，然后在对番泻苷A和番泻苷B进行浓缩性的蒸干，才可以对其含量进行测定，如果含量小于百分之九十五，就要对其进行二次的分离。选取的洗脱剂也是同之前一样，从研究的结果可以看出，分离的第一次结果可以参考表一，第二次结果可以参考表二。试验得出的高效液相色谱图可以参考图二。

表1 第1次硅胶柱分离

表2 第2次硅胶柱分离结果

图2 混合对照品

3 结论

综上，可以得出，采用硅胶柱层析的方法进行分离，试验主要是得到了亮黄色针状物的结晶，番泻苷含量是九十七点四；另外一次分离，主要是得到了橙黄的粉末状，番泻苷B含量为百分之七十一点九。随后可以再对橙黄色的粉末进行分离，得出的结果为百分之九十五点四，两者含量均大于95%。高纯度番泻苷A、高纯度番泻苷B的制备研究，为市场上研究和开发含番泻苷类有效成分的药物提供物质选择，同时又可以弥补番泻供给量的不足。