恶性疟原虫/间日疟原虫抗原检测试剂盒的临床研究

柯天霖

（厦门国贸健康科技有限公司，福建厦门 361000）

疟疾（Malaria），是一种由寄生虫引起的威胁生命的疾病，通过受感染的雌蚊叮咬传至人类，其病原体为疟原虫。临床表现为间歇性、定时性、发作性的寒战、高热和大汗，以及贫血和脾肿大[1]。感染人类的疟原虫种类主要有五种，包括：恶性疟原虫（Plasmodium Falciparum，Pf）、间日疟原 虫（Plasmodium Vivax，Pv）、三日疟原虫（Plasmodium Malariae，Pm）、卵形疟原 虫（Plasmodium Ovale，Po）以及诺氏疟原虫（Plasmodium Knowlesi，Pk）。其中间日疟分布最广，遍及热带、亚热带、温带的国家和地区，以中美和东南亚地区为多见；恶性疟最为严重，主要在非洲流行[2]。中国以间日疟与恶性疟最为常见，三日疟少见，卵形疟和诺氏疟极少发生。

疟疾的临床诊断方法主要有：病原学诊断（如薄厚膜染色镜检、荧光染色镜检）[3]，病原学诊断作为疟疾诊断的金标准；分子生物学诊断，主要扩增疟原虫特异性片段RNA，其灵敏度高；免疫学诊断，主要检测疟原虫特异性抗原，该方法操作简单、快捷，不需特殊仪器设备，适合基层医院早期诊断，对于疟疾感染的早发现、早治疗和及时防控具有重要意义[4]。

英科新创研制的恶性疟原虫/间日疟原虫抗原检测试剂盒（胶体金法）采用夹心法原理，检测全血中恶性疟原虫（Pf）特异性的富组氨酸蛋白Ⅱ（Pf HRP-Ⅱ）和间日疟原虫（Pv）的特异性疟原虫乳酸脱氢酶（Pv LDH），加样后15~20min即可观察结果，可用于疟疾疑似患者的辅助诊断或疟区病例的筛选检查。

1 研究目的

对英科新创（厦门）科技股份有限公司的恶性疟原虫/间日疟原虫抗原检测试剂盒（胶体金法）进行临床评估，主要考察该产品与已批准上市对照试剂之间的差异，评价该试剂的应用意义。

2 试验管理

2.1 试验监查

由申办者的监查员，定期检查试验进展、试验记录与报告的数据准确、完整无误，保证试验遵循拟定的临床试验方案实施。

2.2 试验人员培训

试验前各试验单位对所属参加人员实施培训，要求熟知方案内容，明确方案要求，熟悉检测试剂的使用方法，知道如何处理试验中出现的常见问题。

2.3 试验过程中的质量控制

严格按照产品说明书进行操作；试验结果2人复核；对结果出现不同的标本留存、登记，并根据方案要求进行复检；试验数据输入后双人核对确保无误。统计方法正确。

3 试验设计

3.1 试验用试剂

3.1.1 考核试剂

名称：名称：恶性疟原虫/间日疟原虫抗原检测试剂盒（胶体金法）。

生产厂家：英科新创（厦门）科技股份有限公司。

3.1.2 对照试剂

名称：恶性疟原虫/间日疟原虫抗原检测试剂（胶体金法）。

生产厂家：南通市伊士生物技术有限责任公司。

注册证号：国食药监械（准）字2014第3400109号。

3.1.3 第三方方法

薄厚膜染色镜检。

3.2 考核用样本

试验共考核1 100例全血样本，并对其中50例样本分别采集了静脉全血与指尖血，含有恶性疟原虫抗原或间日疟原虫抗原阳性样本数量均具有统计学意义，均为在临床单位试验期间收集，置于2~8℃保存，7d之内进行临床试验，或之前收集的冷冻样本，不低于-20℃保存。

3.3 检测与分析方法

所有检测试剂的使用，均严格按照产品使用说明书要求操作。

对临床试验所有标本，平行使用英科新创（厦门）科技股份有限公司的考核试剂与对照试剂进行检测。考核试剂与对照试剂检测不符的样本，可进行复试，复试后仍不一致的样本则采用第三方试剂进行检测。统计考核试剂与对照试剂的阳性和阴性符合率，比较考核试剂与国家已批准上市的同品种之间的差异，如表1所示。

表1 恶性疟原虫抗原静脉全血试验结果统计

4 临床研究结果综合分析与评价

4.1 临床结果综合分析（静脉全血样本1100例）

4.1.1 恶性疟原虫抗原项

恶性疟原虫抗原静脉全血的临床试验结果统计如表1所示，综合分析如下。

（1）阳性符合率：322/322=100%

（2）阴性符合率：768/778=98.71%

（4）Pa=（322+768）/1 100=0.9909

（5）Pe=｛（322+0）（322+10）+（768+0）（768+ 10）｝/1 1002=0.5821

（6）Kappa=（Pa-Pe）/（1-Pe）=（0.9909- 0.582 1）/（1-0.582 1）=0.98＞0.75，两者检测结果有高度一致性。

5.1.2 间日疟原虫抗原项

间日疟原虫抗原静脉全血的临床试验结果统计如表2所示，综合分析如下。

表2 间日疟原虫抗原静脉全血试验结果统计

（1）阳性符合率：180/180=100%（2）阴性符合率：885/920=96.20%

（3）样本总符合率：（180+885）/1 100=96.82%（4）Pa=（180+885）/1 100=0.9682

因此，选择适合香菇优良品种，综合考虑品种特性、市场需求和当地气候特点[7]，结合区域气候、地形、人力等基本情况，加强并提高技术管理形成规范化的模式和技术规程，对于引进菌类品种的栽培成功非常重要。跟进当地气候变化情况，因地制宜及时进行技术、管理调整，多参考前人成功事例，总结失败与成功的经验，是产业落地稳定可持续发展的重要步骤。

（5）Pe=｛（180+0）（180+35）+（885+0）（885+ 35）｝/1 1002=0.7049

（6）Kappa=（Pa-Pe）/（1-Pe）=（0.9682- 0.7049）/（1-0.7049）=0.89＞0.75，两者检测结果有高度一致性。

4.1.3 考核与对照不符样本的第三方试剂确认结果

临床考核试剂与对照试剂对静脉全血样本检测结果共有45例不相符样本。其中，有10样本为考核试剂检测结果为恶性疟原虫抗原阳性、对照试剂检测结果为阴性，经第三方镜检确认结果与考核试剂结果一致，均为恶性疟原虫抗原阳性样本；另外35例样本考核试剂检测结果为间日疟原虫抗原阳性、对照试剂检测结果为阴性，经第三方镜检确认结果与考核试剂结果一致，均为间日疟原虫抗原阳性样本。

4.2 静脉全血与指尖血比对试验结果统计（50例）

4.2.1 恶性疟原虫抗原项

恶性疟原虫抗原静脉全血与指尖血的比对试验结果统计如表3所示。

表3 恶性疟原虫抗原静脉全血与指尖血比对试验结果统计

4.2.2 间日疟原虫抗原项

间日疟原虫抗原静脉全血与指尖血的比对试验结果统计如表4所示。

表4 间日疟原虫抗原静脉全血与指尖血比对试验结果统计

结果表明：考核试剂对恶性疟原虫抗原或间日疟原虫抗原在静脉全血与指尖血两种样本类型检测结果均一致，不存在差异。

5.3 相关疾病干扰情况统计

本次临床试验中有艾滋病（80例）、乙肝（25例）、结核（20例）、肺炎（19例）、登革热（7例）、新型隐球菌脑膜炎（4例）、恙虫病（1例）、破伤风（1例）和卵形疟（1例）等引起相似症状疾病的标本对考核试剂检测结果不产生干扰作用，间日疟原虫抗原与恶性疟原虫抗原的检测不产生相互干扰作用。

6 讨论与结论

本次试验共考察临床样本1 100例，其中，考核试剂共检出恶性疟原虫抗原阳性样本322例，间日疟原虫抗原阳性样本180例；与对照试剂检测结果作对比，考核试剂对恶性疟原虫抗原检测结果的阳性符合率为100%，阴性符合率为98.71%，总体符合率为99.09%，kappa值为0.98；对间日疟原虫抗原检测结果的阳性符合率为100%，阴性符合率为96.2%，总体样本符合率为96.82%，kappa值为0.89。考核试剂对50例静脉全血与指尖血样本比对试验，检测结果完全一致。

试验结果出现45例不符合样本，即考核试剂检出10例恶性疟、35例间日疟阳性而对照试剂均显示阴性结果，经镜检确认，考核试剂检出阳性是正确的。经分析，其原因应为考核试剂比对照试剂的样本裂解液对新鲜样本红细胞的裂解更充分，从而确保待测抗原的释放。试验中引起相似症状疾病的标本对考核试剂检测结果不产生干扰作用，间日疟原虫抗原与恶性疟原虫抗原的检测不产生相互干扰作用。

由英科新创（厦门）科技股份有限公司研制的恶性疟原虫/间日疟原虫抗原检测试剂盒（胶体金法）试剂背景干净，条带清晰，结果显示快速、操作简便等特点，适用于人体静脉全血或指尖血样本中恶性疟原虫抗原或间日疟原虫抗原的检测。