MRI增强扫描联合血清CRNDE、NRSN2在鼻咽癌分期诊断及疗效评估中的应用*

郑树成,张德江,陈頔,王龙,李玉柱

唐山市人民医院 1医学影像科,2放疗科(河北唐山 063000)

鼻咽癌是恶性肿瘤的一种,其分布特征具有明显的区域性[1]。鼻咽癌患者早期症状不太明显,因其症状较复杂、位置隐蔽而容易出现误诊和漏诊,发现时已经是中晚期,会导致鼻咽腔出现狭窄闭塞,影响患者呼吸和吞咽,还易对周围组织进行侵袭,严重影响患者预后[2]。因此对患者进行早期诊断尤为关键。鼻咽癌患者多采用放化疗的方法进行治疗,MRI增强扫描可以对鼻咽癌患者病灶和疗效进行检查,通过对病灶的大小诊断,有利于医师对肿瘤进行分期和分级[3]。结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)是LncRNA家族成员,是一种促癌基因,其在多种肿瘤组织中呈现过表达。有研究[4-5]发现CRNDE参与鼻咽癌的发生、发展。神经膜蛋白2(NRSN2)是一种小分子膜蛋白,可以调节神经,还在不同癌症中发挥着重要作用,有研究[6-7]发现NRSN2参与鼻咽癌的生物学发展。目前关于MRI增强扫描联合血清CRNDE、NRSN2在鼻咽癌中的研究鲜有报道,因此本研究主要探讨MRI增强扫描联合血清CRNDE、NRSN2对鼻咽癌分期诊断及疗效评估的应用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019年10月至2021年10月我院收治并经病理检测证实为鼻咽癌的患者110例作为研究对象,男68例,女42例,年龄30～78岁,平均(59.20±12.75)岁,肿瘤直径1.3～4.9 cm,平均(3.01±0.64)cm。根据《鼻咽癌分期2017版》进行临床分期[8],Ⅱ期为早期组46例,Ⅲ期和Ⅳ期为中晚期组64例。所有患者进行放化疗治疗。

纳入标准:(1)符合鼻咽癌的诊断标准[9],根据临床检查确诊为鼻咽癌;(2)所有患者均进行MRI增强扫描;(3)患者入组前未接受放疗或化疗;(4)患者知情并签署承诺书。

排除标准:(1)合并其他恶性肿瘤者;(2)伴有心肝肾等重要内脏功能障碍患者;(3)合并鼻窦炎等鼻咽疾病;(4)有MRI检查禁忌者。本研究经医院伦理委员会批准(编号:RMYY-LLKS-2023-031)。

1.2 方法

1.2.1 MRI增强扫描检查方法 所有患者在入院后均使用美国3.0T MRI扫描仪(购自美国,型号GESignaHDX3.0T)对鼻咽部横轴面、冠状面和矢状面进行常规序列扫描,主要参数:T1FLAIR:TR为2 500 ms,TE为25 ms,TI为850 ms,NEX为1,矩阵为320×256;FSE/T2WI:TR=5 700 ms,TE=120 ms,NEX=2,矩阵为384×256;T2FLAIR:TR为8 600 ms,TE为180 ms,TI为2 200 ms,NEX为=2,矩阵为320×256,所有序列的层厚为6 mm、层间距为1.5 mm、FOV为24 cm,扫描层数为18层。先进行平扫,待平扫完成后注入造影剂Gd-DTPA试剂进行增强扫描,图像数据分析:采用GE Omni Kinetic软件处理MRI增强扫描中的数据,计算最大上升斜率、达峰时间。

1.2.2 qRT-PCR检测血清CRNDE、NRSN2表达 采集患者入组第2天及放化疗后6个月空腹外周静脉血5 mL,3 000 r/min 10 min离心,抽取上清液之后迅速转移至-80℃冰箱保存待测。使用Trizol试剂提取血清中总RNA(北京凯诗源公司,货号:SH-2366),使用NanoDrop ND-12000分光光度计评估总RNA浓度和纯度(美国Thermo公司),使用M-MLV反转录试剂盒(北京凯诗源公司,货号:SOS-1046)反转录成cDNA,以cDNA为模板,采用qRT-PCR仪(美国Bio-Rad公司,型号:CFX384)检测样本中CRNDE、NRSN2表达水平,内参均为GADPH,引物序列见表1。qRT-PCR反应体系共20 μL:cDNA(50 ng/μL)2 μL,SYBR Green Master Mix(2×)(上海北诺公司,货号为K0253)10 μL,PCR上下游引物(10 μmol/L)各0.5 μL,加ddH2O至20 μL。条件为95℃预变性15 min,1个循环,然后在95℃变性15 s,65℃退火延伸45 s,共40个循环。为减小实验误差,各样品重复3次,使用2-ΔΔCt方法计算CRNDE、NRSN2相对表达量。

表1 qRT-PCR引物序列

1.2.3 放化疗效果评估[10]患者在放化疗后6个月进行疗效评估,放化疗效果根据WHO实体肿瘤疗效评价标准进行,完全缓解:肿瘤完全消失;部分缓解:肿瘤体积缩小>50%,且再无新病灶出现;病情稳定:肿瘤体积缩小<50%,且再无新病灶出现;进展:肿瘤体积增大>25%,出现新的病灶。将完全缓解和部分缓解分为疗效良好组,其余为疗效不佳组。

2 结果

2.1 不同分期MRI增强扫描参数及血清CRNDE、NRSN2的比较 中晚期组最大上升斜率、达峰时间、CRNDE以及NRSN2水平均显著高于早期组(P<0.05)。见表2。

表2 不同分期MRI增强扫描参数及血清CRNDE、NRSN2的比较

2.2 血清CRNDE、NRSN2与MRI增强扫描参数的相关性分析 根据Pearson相关性分析得知,血清CRNDE、NRSN2水平呈正相关(P<0.05),二者与最大上升斜率、达峰时间均呈正相关(P<0.05)。见表3。

表3 血清CRNDE、NRSN2与MRI增强扫描参数的相关性分析

2.3 MRI增强扫描参数对鼻咽癌分期的诊断 根据ROC曲线得知,最大上升斜率诊断鼻咽癌分期的曲线下面积(AUC)为0.798(95%CI:0.715～0.881),截断值为10.257%,敏感度为76.26%,特异度为80.25%,达峰时间诊断鼻咽癌分期的AUC为0.854(95%CI:0.783～0.926),截断值为65.315 s,敏感度为77.26%,特异度为82.30%,二者联合诊断鼻咽癌分期的AUC为0.918(95%CI:0.865～0.972),敏感度为75.64%,特异度为88.67%。二者联合的AUC优于各自单独诊断(Z联合 vs.最大上升斜率=2.628、Z联合 vs.达峰时间=2.731,P均<0.05),见图1。

图1 MRI增强扫描参数对鼻咽癌分期的诊断

2.4 MRI增强扫描联合血清CRNDE、NRSN2对鼻咽癌分期的诊断 根据ROC曲线得知,CRNDE诊断鼻咽癌分期的AUC为0.841(95%CI:0.766～0.916),截断值为4.382,敏感度为78.26%,特异度为81.25%,NRSN2诊断鼻咽癌分期的AUC为0.864(95%CI:0.792～0.936),截断值为7.624,敏感度为80.00%,特异度为81.28%,MRI增强扫描诊断鼻咽癌分期的AUC为0.918(95%CI:0.865～0.972),敏感度为75.64%,特异度为88.67%。三者联合诊断鼻咽癌分期的AUC为0.984(95%CI:0.966～1.000),敏感度为75.64%,特异度为88.67%。三者联合的AUC优于各自单独诊断(Z联合 vs. CRNDE=2.510、Z联合 vs. NRSN2=2.685,Z联合 vs. MRI增强扫描=2.821,P均<0.05),见图2。

图2 MRI增强扫描联合血清CRNDE、NRSN2对鼻咽癌分期的诊断

2.5 不同疗效MRI增强扫描参数和血清CRNDE、NRSN2水平的比较 疗效不佳组最大上升斜率、达峰时间、CRNDE以及NRSN2水平均显著高于疗效良好组(P<0.05)。见表4。

表4 不同疗效MRI增强扫描参数和血清CRNDE、NRSN2水平的比较

3 讨论

鼻咽癌是一种比较常见的头颈部恶性肿瘤,由于发病部位比较隐蔽,所以早期无典型症状,鼻咽癌患者预后与分期有关。早期患者,在治疗后可明显改善患者的生活质量,中晚期肿瘤易对周围淋巴结和组织进行侵袭,预后较差[11]。近年来,我国鼻咽癌的发病率一直处于上升趋势,因其病死率高,严重威胁人类生命健康,其手术治疗效果不理想,多采用放化疗进行治疗[12],因此,选取生物标志物配合影像学进行检查对于提高患者分期的诊断以及评估疗效具有重要的意义。

MRI在诊断鼻咽癌时获得较好的效果,可对患者病灶大小,以及坏死情况进行判断,还能诊断患者临床分期,评估病情有无改善,对软组织分辨率较高,可以清晰的将病灶范围显示出来[13],MRI增强扫描可通过造影剂来反应组织间的血流动力学差异,可检测放化疗治疗效果[14]。有研究发现MRI增强扫描可真实反映鼻咽癌患者在放射性治疗后的病情变化情况[15]。还有研究发现MRI增强扫描与临床分期有关,可作为临床治疗的依据[16]。本研究发现中晚期组最大上升斜率、达峰时间均显著高于早期组,且疗效不佳组最大上升斜率、达峰时间显著高于疗效良好组,说明MRI增强扫描可通过判断肿瘤内的变化,明确肿瘤侵犯范围和边界情况,从而诊断临床分期和疗效评估,最大上升斜率诊断鼻咽癌分期的AUC为0.798,敏感度为76.26%,特异度为80.25%,达峰时间诊断鼻咽癌分期的AUC为0.854,敏感度为77.26%,特异度为82.30%,说明MRI增强扫描可以比较准确地诊断鼻咽癌分期,但也会因为样本数据和个体差异性,其诊断符合率会有所差异。

CRNDE是在结直肠癌组织中发现的一种LncRNA,之后在多种癌组织中也发现呈现异常表达,CRNDE在膀胱癌组织中异常升高,表达水平还与TNM分期有关,会促进膀胱癌细胞的侵袭和迁移[17]。CRNDE还在鼻咽癌中过表达,还与鼻咽癌患者淋巴结转移有关[18]。CRNDE水平升高与肿瘤分期、肿瘤体积大小以及远处转移密切相关,其降低会抑制鼻咽癌细胞增殖和迁移能力,说明CRNDE是治疗鼻咽癌的潜在靶向指标[19]。NRSN2主要存在于神经元囊泡中,是表达于脊椎动物中枢神经细胞中的一种膜蛋白,主要由202个氨基酸组成,参与机体神经系统轴突末端分化生长,还在多种肿瘤细胞中起作用,调节肿瘤细胞的侵袭增殖等[20]。有研究发现NRSN2在鼻咽癌中显著增加,与TNM分期等密切相关[7],还有研究发现NRSN2在鼻咽癌患者血清中显著升高,可为鼻咽癌的诊断和治疗提供参考[20]。本研究发现中晚期组CRNDE和NRSN2水平均显著高于早期组,疗效不佳组CRNDE和NRSN2水平均显著高于疗效良好组,说明二者参与鼻咽癌的发生、发展,会促进其转移,还与疗效密切相关。根据Pearson相关性分析得知,血清CRNDE、NRSN2与最大上升斜率、达峰时间呈正相关,说明CRNDE、NRSN2水平升高会促进鼻咽癌的进展,也会影响MRI参数产生波动,会随着血清水平影响MRI参数使其逐渐升高,为临床诊治提供新的参考。根据ROC曲线得知,CRNDE诊断鼻咽癌分期的AUC为0.841,敏感度为78.26%,特异度为81.25%,NRSN2诊断鼻咽癌分期的AUC为0.864,敏感度为80.00%,特异度为81.28%,说明二者可以诊断鼻咽癌分期。四者联合诊断鼻咽癌分期的AUC为0.985,敏感度为75.64%,特异度为88.67%,而且四者联合的AUC及敏感度明显优于各自单独诊断。

综上所述,MRI增强扫描联合血清CRNDE、NRSN2在鼻咽癌的分期诊断中具有较高的临床价值,还与患者放化疗疗效密切相关。本研究选取的样本量较少,可能导致研究结果出现一定偏倚,后续会扩大样本量,对其进一步验证。

利益相关声明:所有作者均声明无利益冲突。

作者贡献说明:郑树成:研究方案设计、实验操作、论文撰写;张德江:研究方案可行性分析、修订论文;陈頔、王龙:指标检测、原始结果的整理与分析;李玉柱:研究指导、论文修改、经费支持。