A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗在广东省2～6岁儿童的免疫原性和免疫持久性研究*

范仁锋， 汤妍， 苏家立， 夏艳辉， 黄竹航， 李苑， 曾培宇， 张吉凯△

1广东省生物制品与药物研究所(广东广州 510440)； 2高州市疾病预防控制中心(广东茂名 525000)

流行性脑脊髓膜炎(epidemic cerebrospinal meningitis)简称流脑，是由脑膜炎奈瑟菌引起的经呼吸道传播的一种化脓性脑膜炎[1]。流脑的发病率有明显的年龄分布特征，一般易发于低年龄段儿童。15岁以下的少年儿童发病占75%以上，主要以5岁以下儿童高发。流脑迄今仍是全世界一个主要的公共卫生问题，其病死率高达10%～15%，且有高达20%的治愈患者会出现长期的后遗症[2-3]。接种疫苗是控制流脑的有效手段。我国既往流行的流脑菌株以A群为主，近年来，C群流脑发病率逐步上升，在局部地区流行或爆发[4]。因此加强2-6岁儿童A群、C群的流脑预防很有必要。广东省疾病预防控制中心和广东省生物制品与药物研究所于2013年9月至2016年6月在广东省高州市对2～6岁儿童进行了A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗(MPV-AC)免疫原性和免疫持久性研究，为疫苗的使用，预防流脑流行提供参考，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选择广东省高州市作为研究现场。以研究对象监护人知情同意、自愿参与为原则。研究对象为2～6岁的健康儿童，符合临床研究入选和排除标准。入选标准：(1)2～6岁健康儿童；(2)经查问病史、体检和临床判定无接种禁忌证者；(3)受试者监护人能遵守临床试验方案的要求；(4)腋下体温≤37.0 ℃。排除标准：(1)对疫苗的成分过敏者；(2)癫痫、脑部疾患及有过敏史者、肾脏病、心脏病、活动性结核患者及HIV感染者；(3)急性传染病及发热者；(4)在入选前7 d内接受过免疫球蛋白注射者。

该项目通过广东省疾病预防控制中心疫苗临床研究伦理审查委员会审查批准，获得伦理批件(批件号：2013V002-F01)。

1.2 疫苗及免疫程序 本研究用疫苗为某制药公司生产的MPV-AC，经中国食品药品检定研究院检定符合要求并获得批签发(批签中检20131402)。该疫苗为冻干剂型，规格为100 μg/瓶，含A群、C群脑膜炎球菌多糖各50 μg，批号：201212023，有效期至2014.12.23。符合条件的对象于上臂外侧三角肌附着处皮下注射1剂疫苗，剂量为0.5 mL/剂。

1.3 血清采集及检测 分别于免疫前、免疫后1个月、免疫后2年各采集静脉血3.0 mL，分离血清置-20 ℃以下保存；采用世界卫生组织推荐的脑膜炎球菌抗体血清杀菌力试验测定免疫前后血清抗体效价，A群、C群脑膜炎球菌血清杀菌力抗体检测由中国食品药品检定研究院负责；血清起始稀释度为1∶2。

1.4 结果判断 抗体滴度为阴性或未检出的即<1∶2按1∶1计算，血清抗体滴度<1∶8为阴性，血清抗体滴度≥1∶8为阳性。免疫前抗体阴性，免疫后抗体阳性，或免疫前抗体阳性，免疫后抗体滴度≥4倍增长为抗体阳转。计算各个采样时间受试者血清抗体的滴度频数分布、免疫前后抗体几何平均滴度(GMT)和免疫后阳性率/阳转率。

1.5 统计学方法 用EpiData3.1软件建立数据库并录入，采用SPSS 13统计软件进行统计分析。抗体滴度经对数转换后用配对t检验。检验水准α=0.05(双侧)，P≤0.05被认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 研究对象的基本情况 本研究共有578例受试者签署了知情同意书并接种疫苗，其中529例受试者依从性良好，并于免疫前、免疫后1个月采集了血清，男269人，女260人，男女性别比例为1.04∶1，受试者平均年龄为(3.342±1.241)岁，受试者人口学基线数据均符合方案的要求。404例受试者采集了免疫后2年血清，共计125人脱落，脱落率为21.63%(125/578)。

2.2 受试者血清抗体滴度分布情况分析 受试者免疫前血清经2倍稀释后，A群、C群抗体滴度分布范围均为1∶1～1∶512，A群、C群抗体阴性的受试者分别占84.31%(446/529)和94.51%(500/529)。

受试者免疫后1个月，A群、C群抗体滴度分布范围为1∶1～1∶4096，A群、C群抗体阴性的受试者A群、C群分别占9.64%(51/529)和7.75%(41/529)。

受试者免疫后2年，A群、C群抗体滴度分布范围为1∶1～1∶2 048，A群、C群抗体阴性的受试者A群、C群分别占80.44%(325/404)和79.46%(321/404)。详见表1。

2.3 受试者免疫前后抗体GMT评价 受试者免疫前、免疫后1个月、免疫后2年的A群抗体GMT分别为1∶1.691、1∶103.249和1∶2.149；免疫后1个月抗体GMT与免疫前比差异有统计学意义(t=43.583，P<0.001)，免疫后2年抗体GMT与免疫后1个月、免疫前比均差异有统计学意义(t=34.445，P<0.001；t=2.470，P=0.014)。

受试者免疫前、免疫后1个月、免疫后2年的C群抗体GMT分别为1∶1.241、1∶122.905和1:2.366，免疫后1个月抗体GMT与免疫前比差异有统计学意义(t=52.732，P<0.001)，免疫后2年抗体GMT与免疫后1个月、免疫前比均差异有统计学意义(t=34.786，P<0.001；t=7.126，P<0.001)。详见表2、表3。

表1 受试者免疫前后抗体滴度频数分布

注：*抗体滴度<1∶2以1∶1计算

表2 受试者免疫前后抗体GMT变化情况

2.4 受试者免疫前后抗体阳性率/阳转率分析 受试者免疫前、免疫后1个月、免疫后2年A群抗体阳性率分别为15.69%(83/529)、90.36%(478/529)和19.55%(79/404)，免疫后1个月抗体阳性率与免疫前比差异有统计学意义(P<0.001)，免疫后2年抗体阳性率与免疫后1个月比差异有统计学意义(P<0.001)，与免疫前比差异无统计学意义(P=0.123)。受试者免疫前、免疫后1个月、免疫后2年C群抗体阳性率分别为5.48%(29/529)、92.25%(488/529)、20.54%(83/404)，免疫后1个月抗体阳性率与免疫前比差异有统计学意义(P<0.001)，免疫后2年抗体阳性率与免疫后1个月比差异有统计学意义(P<0.001)，与免疫前比差异有统计学意义(P<0.001)。受试者免疫后1个月A群、C群抗体阳转率分别为89.60%(474/529)和90.93%(481/529)。详见表4、表5。

表3 受试者免疫前后抗体GMT组间比较结果

注：行经对数变换后的成组t检验

表4 免疫前后A群、C群抗体阳性率/阳转率

3 讨论

2008年，我国将MPV-A及MPV-AC纳入国家免疫规划，对适龄儿童进行常规免疫接种[5-6]。随着大规模的接种MPV-A及MPV-AC，流脑的发病率逐年下降，但流脑流行的威胁仍存在。本研究通过对MPV-AC免疫原性和免疫持久性研究可以了解疫苗免疫原性和人群免疫状况，有利于预防流脑的流行及为采取防治措施提供依据。

表5 免疫前后A群、C群抗体阳性率组间比较结果

本研究结果显示，接种MPV-AC后1个月，受试者的A群和C群流脑抗体GMT和阳性率显著高于免疫前，A群和C群抗体阳转率分别为89.60%和90.93%，说明该年龄段儿童接种疫苗后抗体阳转率较高，形成了免疫屏障，儿童接种疫苗后有较好的免疫效果。闫绍宏等[7]选取扎鲁特旗5个乡镇不同年龄组人群接种1剂MPV-AC，免疫后4周采用流脑血清抗体杀菌试验测定疫苗免疫后血清抗体，其中2～5岁组接种MPV-AC后1个月A群和C群抗体阳转率分别为100%和98.4%；郑佳等[2]、何莉等[8]、陶红等[9]、徐鹭等[10]也研究发现2～17岁儿童和青少年接种1剂MPV-AC，免疫后1个月A群和C群的阳转率分别为91%～100%和77%～98%，这与本研究的结果相近。

在免疫持久性方面，本研究受试者免疫后2年A群、C群的抗体阳性率分别为19.55%和20.54%。免疫2年后抗体GMT和抗体阳性率比免疫后1个月明显下降，接近免疫前水平，但A群和C群免疫后2年抗体GMT与免疫前比仍差异有统计学意义(P<0.05)。何莉等[7]的研究显示6～24岁月龄婴幼儿接种1剂国产MPV-AC后1年A群和C群阳性率分别为24%和20%，5～13岁儿童接种1剂国产MPV-AC后1年A群和C群阳性率分别91%和90%，结果表明MPV-AC对5岁以上人群有良好的免疫原性和免疫持久性，且2岁以下幼儿在免疫后杀菌抗体GMT、4倍增长、免疫持久性均比5～13岁组低。张春晓等[11]也发现流脑疫苗抗体反应与年龄大小有一定的关系，大年龄组的免疫反应明显比小年龄组的好。流脑多糖疫苗是非依赖性胸腺抗原，不会产生免疫记忆，其产生的抗体持续时间不长[11]。本研究免疫后2年A群和C群的抗体较低的原因可能是因为研究人群的平均年龄年龄偏小，接种MPV-AC后，免疫保护时间较短。

此外，本研究受试者的脱落率为21.63%，脱落的原因主要是受试者外出失访，脱落人数对数据结果可能会造成一定偏倚。

综上所述，MPV-AC在广东省2～6岁儿童中免疫后在短期可以有良好的免疫应答，可以预防流脑的发生。免疫后2年A群、C群抗体接近免疫前，建议在流脑流行季加强免疫。