高效液相色谱法同时测定腌渍蔬菜中5种食品添加剂的含量

◎ 牛 芳

（盘锦检验检测中心，辽宁 盘锦 124000）

近年来层出不穷的食品安全事件提高了人们对食品安全问题的关注度，食品添加剂的安全性成为热点话题，对于常用的食品添加剂更是人们关注的重点。

苯甲酸易穿透细胞膜进入细胞体内，干扰细胞的通透性，抑制细胞膜对氨基酸的吸收，并抑制细胞的呼吸酶活性，从而达到防腐目的，最佳防腐pH为2.5～4.0。过量食用苯甲酸会引起流口水、腹泻、腹痛和心跳加快等，长期食用会导致过敏及累积中毒。山梨酸为酸性防腐剂，具有较高的抗菌性能，抑制霉菌的生长繁殖，主要是通过抑制微生物体内的脱氢酶系统，从而达到抑制微生物生长的作用，对细菌、霉菌、酵母菌均有抑制作用，是一种相对安全的食品防腐剂。脱氢乙酸利用离子破壁原理，离子有效渗透到细胞体内，抑制微生物呼吸，在酸性或碱性条件下有效，对光和热比较稳定，在水中煮沸、加热烘烤食品时不破坏、不变质、不挥发，在水溶液中逐渐降解为醋酸，对人体无毒，为广谱防腐剂，对酵母菌、霉菌和细菌发育有很强的抑制作用，尤其是对常易引起食品腐败的酵母菌、霉菌的抑制作用最强。糖精钠作为食品甜味剂，对人体健康有害无益，在食品中的应用有明显的超范围、超量添加现象。安赛蜜作为食品甜味剂，经常食用安赛蜜添加超标的食品会对人体的肝脏和神经系统造成危害，特别是对老人、孕妇、小孩危害更为严重，如果短时间内大量食用，会引起血小板减少导致急性大出血[1]。因此，必须按限值控制用量。

腌渍蔬菜可以调节胃口、增强食欲、补充膳食纤维。食品腌渍方法有提高酸度腌渍法、糖腌渍法和盐腌渍法3种。酸腌渍法有两种，利用食用酸腌渍，常用于蔬菜类，如酸黄瓜、糖醋蒜；以及酸发酵腌渍法，主要有泡菜、酸菜。盐腌渍法常用于鱼、肉、虾、蛋和蔬菜。糖腌渍法是用高浓度的糖腌渍食品，可以看出腌渍蔬菜涉及各种口味蔬菜食品，广泛存在于人们的餐桌。食品添加剂具有增强食品贮存和转运效果、改良和增进食品多种感官指标、保持且增强食品的营养功能、增强经济和社会效益等多种功能。同时也带来违法使用非食品添加剂，超限量、超范围使用食品添加剂等现象[2]。生产厂家为达到更好的效果，往往会加入多种食品添加剂，现行国家标准中采用多个方法检测，如果可以同时检测多种食品添加剂，则可以提高工作效率，节约成本。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、糖精钠和安赛蜜质量浓度均为1.00 g·L-1（纯度均≥99.0%），配制成浓度为0 mg·L-1、5 mg·L-1、10 mg·L-1、50 mg·L-1、100 mg·L-1和200 mg·L-1的混合标准工作液；甲醇、乙酸铵，色谱级；冰乙酸、氨水、亚铁氰化钾、乙酸锌和无水乙醇，优级纯；实验室用水。

Agilent 1260高效液相色谱仪（配二极管阵列检测器、柱温箱）；pH计；电子天平；离心机和超声机；色谱柱为Agilent Ecilpse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）。

1.2 实验方法

1.2.1 样品制备样品为东北酸菜，购于盘锦本地市场，将整份试样用匀浆机打碎，再搅拌均匀。

1.2.2 样品前处理方法

准确称取约2.00 g试样于50 mL具塞离心管中，加亚铁氰化钾溶液2 mL和乙酸锌溶液2 mL，混匀，于8 000 r·min-1离心10 min，水相转移至50 mL容量瓶中，残渣样品再提取1次后定容[3]。取适量上清液过0.22 μm滤膜，待液相色谱上机测定[4]。

1.2.3 仪器条件

色 谱 柱 为Agilent Ecilpse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：A-甲醇，B-0.02 mol·L-1乙酸铵-冰乙酸溶液（pH=5.3），梯度洗脱（见表1）；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：230 nm（苯甲酸、山梨酸、糖精钠）、293 nm（脱氢乙酸）、214 nm（安赛蜜）；柱温：35 ℃。

表1 梯度洗脱条件表

2 结果与分析

2.1 线性关系、相关系数、检出限和定量限测定结果

安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸依次出峰，出峰时间依次为3.55 min、5.46 min、8.17 min、10.89 min和13.55 min。测定一系列不同质量浓度的混合标准溶液，以各化合物的质量浓度为横坐标，以相对应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，以信噪比为3倍（3S/N）相对应的质量浓度为检出限，以信噪比为10倍（10S/N）相对应的质量浓度为定量限，得到各化合物的线性关系、相关系数、检出限和定量限，见表2。苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、糖精钠和安赛蜜的线性关系、相关系数、检出限和定量限均满足检测要求。

表2 线性关系、相关系数、检出限和定量限表

2.2 精密度和准确度考察结果

取一定量的混合标准溶液做低、中、高3个水平加标回收试验，每个样品平行测定7次，计算5种化合物的回收率和精密度，结果见表3。苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、糖精钠和安赛蜜的回收率分别在93.78%～99.75%、94.29%～100.06%、91.26%～99.72%、96.61%～99.97%和90.78%～99.74%，精密度分别在0.26%～1.82%、0.31%～1.64%、0.42%～2.62%、0.56%～2.09%和0.52%～3.13%，这表明所建立的分析方法的精密度和准确度均满足检测要求[5]。

表3 回收率和精密度表

3 结论

本文采用二极管阵列检测器高效液相色谱法，同时测定腌渍蔬菜中的3种防腐剂和2种甜味剂，试验得知本方法操作简单，色谱分离效果和稳定性好，并可获得较高的精密度和准确度，大大节约了试剂的消耗和缩短了分析时间，适合大批量样品的快速测定，同时为其他酱腌菜样品的快速测定提供了参考[6]。

快速检测一直是食品检测行业不断探索的领域，既简化了实验准备过程，减少了试剂使用，又节省了样品，缩短了检测时间。复合防腐剂和复合甜味剂的使用是食品行业的现状，不但提高了食品添加剂的使用效果，也降低了单一剂量的用量，但也为检测行业带来了新的挑战。用一种简单的处理方法同时处理几个常用参数在实际工作中越来越受到欢迎。同时，检测行业也希望出台相应标准适应时下检测需求，给检测工作带来更多的便利条件[7]。