食用亚麻籽油中9种抗氧化剂的测定

◎ 赵俊美，崔瑞霞，谢珊珊

（河南中测技术检测服务有限公司，河南 郑州 450000）

亚麻籽油分为工业亚麻籽油和食用亚麻籽油，在我国西北地区，人们食用麻籽油已有悠久历史。亚麻籽油是从胡科植物脂麻种子中榨取的脂肪油。根据胡麻的生长特性，适合在西部、北部高寒干旱地区生长。

食用亚麻籽油中营养成分丰富[1-4]，尤其是其中的反式脂肪酸含量、微量元素含量较高，有较高的推广价值。作为食用油，如何更好地保存其中的有益物质成为近年来研究的重点和热点[5-8]。抗氧化剂[9]可有效阻止食用亚麻籽油中的营养成分被氧化，目前常用在食用油中的氧化剂有9种，但是针对亚麻籽油中含有的抗氧化剂含量测定研究较少[10-12]。基于此，本文主要利用固相萃取结合高效液相色谱串联二极管检测器的方法，对亚麻籽油中9种抗氧化剂含量进行测定，以供参考。

1 材料与方法

1.1 材料和试剂

甲酸、甲醇、乙腈和正己烷（色谱级，Fisher公司）；

0.22 μm PTFE Hydrohpilic滤膜（默克公司）；PuriTest C18固相萃取柱（500 mg/6 mL，默克公司）；Robussil C18-L色谱柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm）。

样品为购于山西省晋城市各农贸市场和超市不同生产批号的亚麻籽油，共33批。

1.2 仪器

LC-Waters E2695-2996高效液相色谱仪（沃特世公司）；氮吹仪（日本Eyela公司）；高速离心机SIGMA1-15K（德国SIGMA希格玛离心机公司）；MS205DU型电子天平（瑞典METTLER TOLEDO）；涡旋振荡器（德国伊卡公司）；Milli-QDirect-Q10超纯水机（美国默克密理博公司）。

9种抗氧化剂标准溶液信息如表1所示，浓度为1 000 mg·L-1，购自坛墨质检，货号80861JH，溶剂是乙腈，冷藏保存。

表1 乙腈中9种抗氧化剂标准溶液信息表

1.3 实验方法

1.3.1 提取

准确称取已混合均匀的食用亚麻籽油1.00 g，置于50 mL离心管中，加入10 mL乙腈，涡旋振荡2 min，超声10 min，3 000 r·min-1离心5 min，收集上清液于另一离心管中，离心管中油样用10 mL乙腈重复提取1次，涡旋振荡2 min，超声10 min，3 000 r·min-1离心5 min，合并上清液，待净化。

1.3.2 净化

先将小柱依次用5 mL甲醇，再用5 mL乙腈活化平衡，然后将待净化液倾入柱中，收集流出液，再用10 mL乙腈∶甲醇=2∶1（V/V）进行洗脱，并收集洗脱液，30 ℃水浴氮吹蒸发至干，用2 mL乙腈溶解定容，过0.22 µm PTFE Hydrohpilic滤膜后待测。

1.3.3 标准曲线绘制

把标准溶液用乙腈逐级稀释成浓度分别为5 mg·L-1、10 mg·L-1、20 mg·L-1、50 mg·L-1、100 mg·L-1、200 mg·L-1、300 mg·L-1、400 mg·L-1和500 mg·L-1的混合标准溶液，绘制标准曲线。

1.3.4 高效液相色谱条件

色谱柱：Robussil C18-L，4.6 mm×250 mm，5 µm；流动相A：0.5%（V/V）甲酸水；流动相B：甲醇；柱温：35 ℃；波长：280 nm；进样量：10 µL；流速：1.0 mL·min-1；梯度洗脱见表2。

表2 梯度洗脱程序表

1.3.5 外标法计算结果含量

峰面积外标法计算食用亚麻籽油中抗氧化剂各组分含量。检测结果保留3位有效数字。

2 结果与分析

2.1 加标实验结果

设 置 添 加 水 平1、2、3分 别 为20.0 mg·kg-1、50.0 mg·kg-1、100.0 mg·kg-1，由表3可知，采取固相萃取结合液相色谱法检测9种抗氧化剂，其加标回收率为91.8%～102.1%，RSD均小于6.7%，能够满足标准《实验室质量控制规范 食品理化检测》（GB/T 27404—2008）[13]中相关内容要求。实验过程中发现TBHQ易降解，建议标准品现用现配，实验样品处理完及时上机检测。

表3 9种抗氧化剂的加标回收率及RSD表

2.2 方法稳定性

以亚麻籽油为基质连续4 d做加标回收，以验证本方法稳定性，结果如表3所示。结果表明，本方法在不同时内实验方法相关系数在0.998以上，回收率、精密度均满足要求，相对目前已有的检测方法，该方法定性定量准确、重复性好、检测结果可信、前处理快速，适合亚麻籽油中抗氧化剂含量的测定。

2.3 实际样品的测定

2021年11月运用本研究方法对山西省33批次食用亚麻籽油进行检测。通过对实际样品的检测结果分析，其中5批亚麻籽油检出TBHQ，检出浓度在12～116 mg·kg-1范围内；有2批检出BHA，在一定程度上抗氧化剂在食用亚麻籽油中存在添加。

3 结论

本实验建立了食用亚麻籽油中9种抗氧化剂的前处理方法，并结合高效液相色谱对食用亚麻籽油中9种抗氧化剂的含量进行了测定。对于加标量分别为20.0 mg·kg-1、50.0 mg·kg-1、100.0 mg·kg-1的食用亚麻籽油样品，回收率为91.8%～102.1%，RSD均小于6.7%，符合实验要求，且方法稳定。