牛初乳类产品的安全性毒理学评价

时间：2024-07-28

文/刘影郝岩

（哈尔滨医科大学）

牛初乳通常是指母牛分娩后7 d内所分泌的乳汁[1]。牛初乳富含多种免疫因子，但主要是含量很高、具有抗原结合特性的IgG[2]，因此，牛初乳具有丰富的营养价值，富含具有调节机体生理功能的活性成分。初乳中常规营养成分（蛋白质、脂肪、维生素、矿物质）以及生物活性物质（免疫因子、激素、生长因子等）含量比常乳高数倍，具有很高的开发利用价值[3]。目前，牛初乳类产品的安全性评价方面鲜有文献报道。本文依据《保健食品检验与评价技术规范》的要求，对以牛初乳为原料生产的完达山牌乳珍产品开展安全性毒理学评价试验，包括急性毒性试验、遗传毒性试验（Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验）和30 d喂养试验，验证完达山牌乳珍产品的安全性。

1 材料与方法

1.1 样品

完达山牌乳珍产品，由黑龙江省完达山乳业股份有限公司提供，其免疫球蛋白IgG含量为2.26%，样品为乳黄色粉末，感官检查未见异常。

1.2 试验动物

昆明种小白鼠和Wistar品系大白鼠，均由黑龙江省肿瘤研究所实验动物中心提供。

1.3 大、小鼠急性毒性试验

选用Wistar大鼠和昆明种小白鼠，体重分别为180～220 g和18.0～22.0 g，按性别各随机分成4 组，按霍恩氏法进行剂量设计，即4 个剂量，分别为2.15、4.64、10.00、21.50 g/kg·bw。样品以蒸馏水为溶剂，灌胃容积为20 mL/kg·bw，其中高剂量组在24 h内分2 次进行灌胃。大、小鼠禁食16 h后，经口灌胃。观察各组大、小鼠的中毒表现和死亡时间，观察时间为14 d。

1.4 遗传毒性试验

1.4.1 Ames试验

采用平板掺入法，进行2 次平行试验。TA97、TA98、TA100和TA102 4 种菌株均由美国加州大学Ames实验室提供，经菌株特性鉴定均符合试验要求。剂量设计为5.000、1.000、0.200、0.040、0.008 mg/0.1 mL。

1.4.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验

昆明种小白鼠，体重25.0～30.0 g，随机分成5 组。设3个剂量组，分别为高剂量组（5.00 g/kg·bw）、中剂量组（2.50 g/kg·bw）、低剂量组（1.25 g/kg·bw）；阴性对照组经口灌胃蒸馏水；阳性对照组经口灌胃环磷酰胺，剂量为60.0 mg/kg·bw。各组均按20 mL/kg·bw容积灌胃。计算微核细胞率。

表1 完达山牌乳珍产品大鼠急性毒性试验结果

表2 完达山牌乳珍产品小鼠急性毒性试验结果

1.4.3 小鼠精子畸形试验

昆明种雄性小白鼠，体重25.0～30.0 g，随机分成5 组。设3 个剂量组，剂量设计同小鼠骨髓微核试验，即高剂量组（5.0 g/kg·bw）、中剂量组（2.5 g/kg·bw）、低剂量组（1.25 g/kg·bw）。阴性对照组经口灌胃蒸馏水；阳性对照组经口灌胃环磷酰酸，剂量为60 mg/kg·bw。各组均按20 mL/kg·bw容积灌胃。计算畸形率。

1.5 30 d喂养试验

刚断乳的Wistar大鼠，体重60～80 g，随机分成4 组，其中3组为试验组，1 组为阴性对照组。试验组剂量设计为：高剂量组3 g/kg·bw，此剂量相当于人体推荐用量的100 倍；中剂量组1.65 g/kg·bw，此剂量相当于人体推荐用量的50 倍；低剂量组0.83 g/kg·bw，此剂量相当于人体推荐用量的25 倍。按上述剂量将受试样品加入基础饲料中，动物进食量按体重10%计，阴性对照组喂养基础饲料30 d，每天观察并记录动物的一般状况、中毒症状及死亡情况。每天记录给食量和撒食量，每周计算摄食量，每周称1 次体重。根据30 d增重和摄食量，计算食物利用率。试验结束时，采血检测血液学指标，并检测生化指标，同时剖开大鼠腹部，取出肝、肾、脾、睾丸、卵巢称重，计算脏器/体重值，并进行病理学检查。

1.6 数据处理

对试验数据选用泊松分布、方差分析、χ2检验和均数t检验等方法进行统计学分析。

2 结果

2.1 急性毒性试验

大鼠和小鼠的急性毒性试验结果分别见表1和表2。在14 d的观察期间内，大、小鼠均未出现任何中毒症状，无动物死亡，大、小鼠状态良好。根据观察到的结果及大、小鼠急性毒性判定标准，可以认为完达山牌乳珍产品属实际无毒物质。

2.2 遗传毒性试验

2.2.1 Ames试验

完达山牌乳珍产品2 次Ames试验结果分别见表3和表4，结果表明，受检样品对Ames试验菌株均呈阴性结果，即为致突变阴性。

表3 完达山牌乳珍产品第一次Ames试验结果

表4 完达山牌乳珍产品第二次Ames试验结果

2.2.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验

完达山牌乳珍产品的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果见表5。对试验结果进行泊松分布检验，结果显示，雄、雌小鼠各剂量组的微核细胞率与阴性对照组相比，均无显著差异（p＞0.05），说明完达山牌乳珍产品的小鼠骨髓嗜多染微核试验结果为阴性。

2.2.3 小鼠精子畸形试验

从表6可知，各组小鼠均可见到一定数量的畸形精子，除阳性对照组外，各试验组小鼠的精子畸形率与阴性对照组相比，均没有超过2倍，且无剂量效应关系，变化无统计学意义，说明完达山牌乳珍产品对小鼠精子畸形发生率没有影响。

表5 完达山牌乳珍产品对小鼠骨髓微核发生率的影响

表6 完达山牌乳珍产品对小鼠精子畸形发生率的影响

2.3 30 d喂养试验

在整个试验过程中，各组动物一般状况良好，未见受试动物有任何不良反应，亦无中毒或死亡。

2.3.1 对大鼠体重的影响

在30 d喂养过程中，完达山牌乳珍产品对大鼠体重增长的影响见表7。对大鼠体重进行方差分析处理，结果显示各组间均无显著性差异（p＞0.05），说明完达山牌乳珍产品对大鼠体重的增长无显著影响。

2.3.2 对大鼠总食物利用率的影响

在30 d喂养过程中，完达山牌乳珍产品对大鼠总食物利用率的影响见表8。对大鼠的食物利用率进行方差分析，结果表明各组间无显著性差异（p＞0.05），说明完达山牌乳珍产品对大鼠的总食物利用率无显著影响。

2.3.3 对大鼠血红蛋白和白细胞总数的影响

大鼠的血液学指标检测结果见表9。血红蛋白含量和白细胞计数均在正常值范围内。各剂量组与阴性对照组相比，均无显著性差异（p＞0.05），说明完达山牌乳珍产品对大鼠血红蛋白含量和白细胞总数无显著影响。

表8 完达山牌乳珍产品对大鼠总食物利用率的影响

表9 完达山牌乳珍产品30 d喂养试验的血液学检查结果

表10 完达山牌乳珍产品对大鼠白细胞分类的影响

2.3.4 对大鼠白细胞分类的影响

完达山牌乳珍产品对大鼠白细胞分类的影响检测结果见表10。从表10可见，雄性、雌性大鼠的嗜酸性、中性、淋巴、单核等细胞均在正常值范围之内，且各剂量组与阴性对照组相比，均无显著性差异（p＞0.05），说明完达山牌乳珍产品对各型白细胞均无显著影响。

2.3.5 对大鼠末期生化指标的影响

30 d喂养试验结束后处死动物，分离大鼠血清，检测血清谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、血糖（GLu）、血清尿素氮（BUN）、总蛋白（TP）、血清白蛋白（ALb）、球蛋白（GLO）、总胆固醇（TCH）、肌酐（Cr）等指标，结果见表11。结果表明，各项指标均在正常值范围内，且与阴性对照组相比，无显著性差异，说明完达山牌乳珍产品对大鼠生化指标无明显的影响。

表11 末期生化检验结果

表12 完达山牌乳珍产品对大鼠脏器/体重值的影响

2.3.6 对大鼠脏器/体重值的影响

完达山牌乳珍产品对大鼠脏器/体重值的影响见表12。试验组与阴性对照组相比，各脏器/体重值均无显著差异（p＞0.05）。

各组大鼠主要脏器的病理组织学检查结果显示，均未见到明显病理组织学改变。各组动物肝脏被膜完整，呈小叶结构，无坏死、出血及炎细胞浸润等改变；肾脏皮质与髓质结构清楚，肾小球与肾小管结构正常，未见坏死、出血及炎性改变；其它脏器亦均未见病理改变。说明完达山牌乳珍产品对大鼠肝、脾、肾、睾丸等主要脏器无损害作用。