结肠癌组织和转移灶中KRAS基因突变的临床意义

伍洁

[摘要] 目的 研究晚期结肠癌组织与转移灶中KRAS基因突变对临床治疗和用药的意义。方法 整群收集该院 2014年1-12月手术的68例原发晚期结肠癌组织和转移灶。用直接测序法检测KRAS基因突变情况。结果 ①癌组织中KRAS基因突变率60.29%（41/68），转移灶为55.88%（38/68），癌组织的突变率高，二者差异无统计学意义（P>0.05）。②肝转移KRAS基因突变率58.62%（34/58）较肺转移26.67%（4/15）患者高，差异有统计学意义（P<0.05）；③癌组织与转移灶的KRAS基因突变同时存在的有36例，一致率为89.71%（61/68），一致性较高（Kappa=0.89）。结论 结直肠癌患者中，癌组织KRAS基因突变率高于转移灶，一致率为89.71%。KRAS基因突变提示侵袭转移风险高，易耐药复发预后不良。建议原发灶和转移灶同时检测。

[Abstract] Objective To research the significance of KRAS mutation in the colon cancer tissue and metastasis in late stage for the clinical treatment and mediation. Methods 68 cases of primary colon cancer tissues and metastases receiving operation in our hospital from January 2014 to December 2014 were collected and the KRAS mutation condition was detected by direct sequencing method. Results ①The KRAS mutation rate in the cancer tissues was higher than that in the metastases， 60.29%[41/68 vs 55.88%（38/68）]， the difference was not statistically significance （P>0.05）.②the KRAS mutation rate in the liver metastasis was higher than that in the pulmonary metastasis， the difference was statistically significant （P<0.05）.③The KRAS mutation in the cancer tissues and the KRAS mutation in the metastases coexisted in 36 cases， the consistency rate was 89.71%（61/68）， and the consistency was high （Kappa=0.89）. Conclusion The KRAS mutation rate in the cancer tissues is higher than that in the metastases for patients with colon cancer， the consistency rate is 89.71%， the KRAS mutation reminds that the risk of invasion and metastasis is high， and it is prone to drug resistant and recurrence and the prognosis is not good， it is suggested that the primary lesion and metastasis are detected at the same time.

[Key words] Colon cancer； KRAS mutation； Metastasis

随着对CRC发病分子机制和信号传导通路的深入研究，证明RAS信号通路激活与恶性肿瘤的发病、进展和恶性程度密切相关[1]。野生型KRAS基因可抑制癌细胞生长，一旦突变就会持续刺激细胞生长导致肿瘤发生。KRAS检测是目前筛选抗EGFR靶向药物治疗最有效直接的方法[2]。靶向药物耐药是恶性肿瘤存在的普遍现象，其耐药机制复杂为多种基因共同参与的结果。相关临床试验证实KRAS、BRAF突变型的患者出现耐药不能从抗EGFR治疗中获益预后生存差[3]。目前有研究认为，mCRC原发灶或转移灶均可作为基因突变检测的靶标组织，但有研究证明转移灶基因突变具有高度异质性，根据治疗需要实时检测[4]。该研究分析该院 2014年1—12月收治的68例结肠癌患者癌组织和转移灶基因KRAS突变情况，探讨癌组织与转移灶KRAS突变的差异及其对临床治疗和用药的意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

整群收集该院68例经病理科诊断外科手术原发结肠癌患者癌组织和转移灶标本。男性36例，女性32例；年龄43～69岁，平均（54.6±9.1）岁。根据UJCC标准临床分期为Ⅳ期，其中有58例伴有肝转移、15例肺转移（5例肝肺转移）。入选患者术前均未行任何治疗。

1.2 实验方法

采用DNA分子直接测序法，用上海碧云天生物有限公司的DNA提取试剂盒提取DNA。利用软件Premier5.0设计PCR引物序列，用纯化试剂盒将PCR产物纯化，取5 μL PCR产物2%琼脂糖凝胶电泳经溴化乙啶染色，紫外灯下照相存盘，紫外凝胶分析成像系统观察电泳结果并打印。将检测有单一条带的样本送公司测序，经人工校对记录后用DNAMAN6.0软件与基因库BRAF基因序列比较结果。

1.3 统计方法

应用SPSS 17.0软件对数据进行分析，计数资料采用（n，%）表示，采用χ2检验，应用Kapparel统计方法统计一致性。

2 结果

2.1 KRAS基因突变情况

癌组织中KRAS基因突变率60.29%（41/68），转移灶为55.88%（38/68），癌组织比转移灶高，二者差异无统计学意义（χ2=4.79，P>0.05）。

2.2 肝肺转移突变比较

有肝转移患者癌组织KRAS基因突变58.62%（34/58）明显高于肺转移患者26.67%（4/15），二者差异有统计学意义（χ2=4.94，P<0.05）。

2.3 癌组织与转移灶KRAS基因表达结果比较

癌组织与转移灶的KRAS基因突变同时存在的有36例，以癌组织中检测的KRAS突变为准一致率87.80%（36/41），整体的一致率为89.71%（61/68），一致性较高（Kappa=0.89）。

3 讨论

肿瘤形成和发展的不同阶段不但具有不同的基因突变表达谱，而且肿瘤组织的异质性存在异克隆生长的现象，因此转移灶和原发灶之间可能具有不同的生物学特性和特异性基因型[5]。按照目前临床常规诊疗的流程，因为检测位点和治疗位点的偏移，会导致患者在用药选择方面缺乏科学性和严谨性。该研究结肠癌患者中癌组织KRAS突变率比转移灶高。虽然原发灶与转移灶中基因表达并不完全一致，但是两者差异无统计学意义（P>0.05）。谭聪等[6]研究76例结直肠癌原发灶与转移灶基因突变状态并不完全一致，存在19.7%的表达差异率。提示通过检测原发灶基因表达状态来确定针对转移灶靶向治疗药物存在不严谨，需要进一步完善。冼海兵等[7]对75例原发灶和对应肝转移灶KRAS基因突变的对比研究一致率93.1%（k=0.842）。提示对于无法取得原发灶组织，用转移灶替代检测对治疗也具有重要意义[8]。建议对基因表达不一致患者进行实时检测，提供用药依据增加获益人群。

综上所述， 该研究对癌组织与转移灶中KRAS突变情况进行了初步研究，癌组织与转移灶的KRAS突变有差异。目前检测中大部分转移性结肠癌患者是提供原发灶的样本，靶向治疗的靶点是转移病灶，有可能与原发灶不一致情况，二者同时检测非常必要。KRAS与癌组织的耐药和复发转移具有相关性，对于治疗方案选择依据和逆转措施的实施具有重要指导意义，为临床治疗提供准确理论依据。

[参考文献]

[1] 陆万青，张思维，曾红梅.中国2010年恶性肿瘤发病与死亡[J].中国肿瘤，2014，23（1）：1-10.

[2] Baas JM， Krens LL， Guchelaar HJ. Concordance of predictive markers for EGFR inhibitors in primary tumors and metastases in colorectal cancer： a review[J].Oncologist. 2011， 16（9）：1239-1249.

[3] 涂金花，余英豪.基因突变与结直肠癌靶向治疗新进展[J].世界华人消化杂志，2012，20（16）：1447-1452.

[4] 李凡，韩琤波，马洁韬.结直肠癌原发灶和转移灶 KRAS 基因状态比较的 Meta 分析[J].中华临床医师杂志， 2011， 5（13）：3834-3838.

[5] 王理伟.临床肿瘤基因组学与肿瘤个体化治疗[J].临床肿瘤学杂志，2010，15（6）：483-486.

[6] 谭聪，倪淑娟，翁微微，等.结直肠癌原发灶与转移灶K-ras基因突变的比较分析[J].中国癌症杂志，2013，23（10）：829-833.

[7] 冼海兵，于洪波，张积仁.结直肠癌原发灶和对应肝转移灶K-ras基因突变的对比研究[J].中华肿瘤防治杂志，2010， 17（12）：926-929.

[8] 王慧，徐韫健，林云恩，等. 结直肠癌KRAS 基因突变状态的检测分析[J].实用医学杂志，2013，29（17）：2890-2893， 3994.