LST发酵法与TSI生化检验法检测大肠菌群灵敏度比较研究

吕伟

（德州职业技术学院 山东德州 253000）

1 前言

自然界中含有丰富的微生物，其中，大肠菌群可发酵多种糖类并产酸、产气，是人和动物肠道中的栖居菌[1]。大肠杆菌在相当长的一段时间内被当作是正常肠道菌群的组成部分、非致病菌。直到20世纪中期，人们才认识到部分特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜幼禽，会引起严重腹泻和败血症[2]。具有病原性的大肠杆菌包括肠致病性大肠杆菌、肠产毒性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌等[3]。国家标准要求每1 000 mL饮水中不得超过3个大肠菌群；瓶装汽水、果汁等每100 mL中大肠菌群不得超过5个[4]。

2 材料与方法

2.1 材料与仪器

材料:食品加工实训室制作的果汁（已开封24h）；月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）；三糖铁（TSI）；无菌水。

仪器与设备:超净工作台；高压蒸汽灭菌锅；电炉；烧杯；天平；玻璃棒；锥形瓶；试管；小导管；接种环；生化培养箱。

2.2 实验方法

2.2.1 准备工作

配制LST培养基分装至试管，加入小导管，包扎；配制TSI琼脂培养基分装至试管中，每支试管加入培养基至试管的1/5，包扎；准备1支10%mL移液管、4支1 mL移液管包扎；3支试管中加入9 mL生理盐水包扎；准备带塞的取样器皿包扎；将上述物品在121℃，15 min条件下灭菌。

2.2.2 取样

取样人员双手消毒，使用75%酒精对样品外包装口部进行消毒。用备好的无菌取样器皿取样约100mL。

2.2.3 样品处理

对双手和工作台进行消毒，使用10 mL无菌移液管移取25 mL样品至225 mL无菌缓冲液中摇匀，制成浓度10-1的待测液。用1 mL无菌移液管在10-1待测液中移取1 mL溶液加入9 mL无菌水中摇匀制成浓度为10-2的待测液，同理制成10-3的待测液。将样品原液、10-1待测液、10-2待测液、10-3待测液、空白作标记备用[5]。

2.2.4 接种

LST接种:LST试管标记，无菌操作分别取空白、原液、10-1、10-2、10-31 mL，加入对应无菌 LST 试管，混匀。 空白、原液、10-1、10-2、10-3各 3 支试管。

TSI接种:灭菌后将试管中的TSI摆斜面，充分凝固后，在试管上做标记。利用划线法完成对样品原液、10-1、10-2、10-3样品稀释液的无菌操作接种。

2.2.5 培养

将上述接种完成的检测液与空白试管放入37℃培养箱中培养48 h。

3 结果与讨论

3.1 结果分析

通过培养观察，得到LST培养基发酵检测法与TSI培养基生化反应检测结果（表1～表4）。

表1 LST发酵、TSI生化检测原液结果

表2 LST发酵、TSI生化检测10-1检测结果

表3 LST发酵、TSI生化检测10-2检测结果

表4 LST发酵、TSI生化检测10-3检测结果

对相同样品进行检测，利用灵敏度=真阳性数/（真阳性数+假阴性数）×100%计算，LST发酵法的检测灵敏度平均值63.9%，TSI生化反应法的检测灵敏度平均值97.2%，详见表5。

表5 LST发酵、TSI生化检测大肠菌群灵敏度检测结果

3.2 实验结论

利用LST发酵法和TSI生化反应法检测样品大肠菌群，LST发酵法的检测灵敏度平均值为63.9%，TSI生化反应法的检测灵敏度平均值为97.2%。结果表明，检测相同浓度样品，TSI生化反应法的灵敏度高于LST发酵法。

随着微生物检测技术的发展，越来越多高灵敏度的检测方法涌现，但传统方法仍有不可替代的优势。通过对比传统LST发酵法与TSI生化法检验大肠杆菌的灵敏度，可知TSI生化法的灵敏度更高，具有一定的推广价值。