三种不同血清学方法对梅毒螺旋体抗体的检测效果比较

时间：2024-07-28

高洪元

（泰安市中医二院山东泰安 271000）

1 前言

血清学诊断方法是当前诊断梅毒螺旋体感染的主要方法。常用的血清学诊断方法包括甲钴胺红不加热血清试验（TRUST）、快速血浆反应素试验（RPR）、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）以及酶联免疫吸附试验（ELISA）等[1]。前两者是我国血站长期以来应用的梅毒筛查方法，但其抗原均为牛心磷脂，实际是对抗心磷脂抗体进行检测，存在一定假阳性发生的可能，且属于凝集反应，因此，判断结果不够客观，灵敏度也较低。后两者的螺旋体抗原成分包被固相或明胶颗粒，其特异性良好，在筛查阳性样本的确认中应用较多[2，3]。当前TPPA被公认为是梅毒抗体测定的金标准，本研究以TPPA为金标准，比较了ELISA、TRUST以及RPR应用于梅毒螺旋体抗体的测定效果。

2 资料与方法

2.1 材料与仪器

标本:选取2018年1月—2020年1月泰安市中医二院收治的500例疑似梅毒患者，其中男女比例为224∶276，年龄为0～80岁。标本来源于门诊、分娩前、输血前以及术前。

仪器:梅毒抗体室内质控品（卫生部临检中心）；ELISA试剂盒（北京华大吉比爱公司）；RPR试剂（上海科华公司）；TRUST试剂（上海荣升公司）；TPPA试剂盒（日本富士株式会社）。

2.2 方法

采集研究对象血液标本约5 mL，乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，加盖后混合均匀。将标本置于离心机中，在1 800 r/min转速下离心10 min，离心处理后采用RPR法、ELISA法以及TRUST进行检验。采用FAME24/20全自动酶联免疫分析仪进行检测，严格按照说明书进行操作[4，5]。

2.3 观察指标

当前公认TPPA是梅毒抗体检测的良好检测方法，将TPPA检查结果作为金标准，比较3种血清学方法对梅毒螺旋体抗体检测的灵敏度、特异度以及准确率。

2.4 统计学处理

采用SPSS22.0处理研究数据，采用Kappa检验检测TRUST、ELISA以及RPR法与TPPA法检测结果的一致性。Kappa值＜0.4表示一致性差；0.41＜Kappa值≤0.60表示一致性中等；0.61＜Kappa值≤0.80表示高度一致；0.81＜Kappa值≤1表示几乎完全一致。

3 结果

TPPA检测发现阳性317例、阴性183例。RPR检测的灵敏度为89.21%（281/317）、特异度为83.61%（153/183）、准确率为 86.80%（434/500），与金标准的Kappa系数分别为0.744、0.772、0.788，高度一致；TRUST检测的灵敏度为89.91%（285/317）、特异度为90.71%（166/183）、准确率为 90.20%（451/500），与金标准的Kappa系数分别为 0.757、0.762、0.779，高度一致；ELISA法检测的灵敏度为99.05%（314/317）、特异度为98.36%（180/183）、准确率为 98.80%（494/500），与金标准的Kappa系数分别为0.902、0.931、0.937，几乎完全一致，详见表 1～表3。

表1 RPR检测与金标准的对照结果（单位：例）

表2 TRUST检测与金标准的对照结果（单位：例）

表3 ELISA检测与金标准的对照结果（单位：例）

4 讨论

4.1 梅毒概述

梅毒也被称为梅毒螺旋体，是一种对人类健康造成较大威胁的疾病，主要传播方式为性传播，流行病学数据显示，当前我国梅毒发病率逐年增加。

人体感染梅毒螺旋体后，会产生特异性抗体和非特异性抗体。前者主要包括免疫球蛋白G（IgG）抗体和免疫球蛋白M（IgM）抗体，IgM抗体不会存在过长时间，IgG抗体可持续相当长时间甚至终身存在，但IgG抗体浓度不高，预防再次感染的能力较弱。后者也被称为反应素，指机体受梅毒螺旋体的脂蛋白、类脂以及被梅毒螺旋体破坏的组织细胞释放的类脂物质刺激而产生的IgG以及IgM抗体[6，7]。与非特异性抗体相比，特异性抗体药品更早出现，但经治疗后，抗梅毒螺旋体抗体不会消失，终身存在。

4.2 不同梅毒病原体检测方法的应用效果

早诊断、早治疗是控制梅毒流行的关键，应采用具有较高特异性与灵敏度的检测方法进行梅毒诊断。

TRUST法与RPR法都是非特异性的梅毒筛查方法，其假阳性发生率较高。在检查治疗后、梅毒Ⅰ期以及梅毒Ⅲ期时存在发生假阴性的可能性。本次研究中，TURST法假阴性32例、假阳性30例，RPR法假阴性36例、假阳性17例，2种方法均有假阳性和假阴性存在。对筛查试验而言，假阳性可以接受，但是假阴性应尽可能避免出现，但在本次研究中，TURST法、RPR法都有一定假阳性率、假阴性率，这对筛查与确诊都非常不利。

RRP法的优势在于容易操作、判定结果容易、无须显微镜观察、无须灭活、无须新鲜配置抗原，因此，这一方法在大批量检测中应用广泛，是我国血站长期以来的主要梅毒筛查方法。但其缺陷在于，当抗体含量较高时，容易出现假阳性反应与假阴性反应，且这一方法对神经梅毒、潜伏期梅毒的检测灵敏度较差。

TRUST法容易操作，结果易判定，稳定性好，其缺陷在于在非淋菌性尿道炎患者的检测中容易出现生物学假阳性，且抗心磷脂抗体阳性血清以及高脂血症等都会引起假阳性发生[8]。

TPPA法采用明胶颗粒包裹特异性梅毒螺旋体抗原，无须吸收剂，避免了生物因素对检测结果造成的影响，结合梅毒螺旋体的特异性抗体从而形成明显的凝聚反应。TPPA法的灵敏度、特异度都很高，对血浆、血清都可进行检测，因此，被认为是梅毒螺旋体抗体检测的“金标准”。TPPA法的结果容易判断，操作简单，但试剂价格较高，且反应时间至少需要1.5 h，难以对结果进行自动化判定，仅可用于确证，并不适用于筛查[9]。

梅毒螺旋体基因工程抗原的成功研制，使梅毒螺旋体的ELISA法得以发展。该方法是在微孔板上包被经过基因重组表达的TmpA、TP47等梅毒螺旋体抗原，采用双抗原夹心法对梅毒螺旋体特异性抗体进行测定。ELISA法采用容易纯化的基因重组抗原进行测定，这使ELISA测定的特异度、灵敏度都得到了明显提高。相关研究证实，用ELISA法对梅毒螺旋体抗体的IgM抗体以及IgG抗体进行测定，其灵敏度、特异度在99%左右[10]。本研究中，ELISA法检仅出现3例假阳性，未见假阴性，其灵敏度为99.05%（314/317）、特异度为 98.36%（180/183）、准确率为98.80%（494/500），测定结果与金标准的测定结果几乎一致。由此可见，ELISA法的假阴性、假阳性发生率都要低于TURST法与RPR法。

从实际应用以及自动化角度看来，ELISA法取样量少，操作简便，测定结果不会受到溶血以及纤维蛋白等因素的影响，且自动化程度高，采用全自动酶联免疫分析仪以及全自动加样器可实现整个检验过程的自动化，可在同一时间内完成多个样本的测定，采用酶标仪判读测定结果，能尽可能减小人为干扰引起的测定结果偏差，这为测定结果的准确性、客观性都提供了保障，测定结果采用电脑进行保存，方便实现标准化管理。

与ELISA法相比，TPPA法以及RPR法需要手工操作，过程比较烦琐，存在发生差错的可能性。尽管RPR法可以通过全自动加样器实现自动化加样，但整个检验过程的自动化程度仍较低；肉眼判读结果受主观影响较大，易出现错判、漏判等现象；缺乏原始检验结果，不便查阅与保存；TPPA法需要多次吸液操作，消耗时间较多，存在发生操作失误的风险，需要肉眼判读结果。ELISA法的灵敏度、特异度以及准确率与TPPA几乎完全一致，且弥补了TPPA难以实现自动化操作、试剂价格高昂等缺陷，因此，ELISA法是公认的梅毒螺旋体抗体检测的首选血清学测定方法[12]。