2015年我国部分省（区）规模化牧场牛副结核病的流行病学调查

崔金磊，赵永春 ，吴 彤，申之义

（1.内蒙古农业大学兽医学院，内蒙古 呼和浩特 010018；2.内蒙古包头市农牧业局，内蒙古 包头 014010）

2015年我国部分省（区）规模化牧场牛副结核病的流行病学调查

崔金磊1，赵永春2，吴 彤1，申之义1

（1.内蒙古农业大学兽医学院，内蒙古 呼和浩特 010018；2.内蒙古包头市农牧业局，内蒙古 包头 014010）

为了解我国部分省（区）规模化牧场中牛副结核病的流行情况，对2015年采集自内蒙古自治区、黑龙江省、湖北省、四川省、安徽省、江苏省6个省（区）规模化牧场的16 172份奶牛血清样品进行了副结核分枝杆菌抗体检测。结果显示，检测样品的副结核分枝杆菌抗体总阳性率为2.59%，6个省（区）的抗体阳性率分别为：内蒙古自治区2.09%、黑龙江省3.90%、湖北省2.05%、四川省5.23%、安徽省8.00%、江苏省1.22%；不同饲养规模牧场的阳性率分别为：大型牧场2.42%、中型牧场2.01%、小型牧场4.32%，小型牧场的阳性率极显著高于中型牧场（P<0.01），显著高于大型牧场（P<0.05）。综上提示，我国安徽省、四川省、黑龙江省等地规模化牧场奶牛的副结核分枝杆菌感染率较高，大型牧场和中型牧场的阳性率低于小型牧场。该次流行病学调查结果可为我国牛副结核病的预防和控制提供参考数据。

牛副结核病；流行病学调查；规模化牧场

牛副结核病（bovine paratuberculosis）是由副结核分枝杆菌（Mycobacterium paratuberculosis）感染引起的一种人畜共患慢性感染性疾病，该病不仅在世界范围内给奶牛养殖业带来严重的经济损失，同时也对公共卫生安全造成威胁。牛副结核病的主要临床症状表现为顽固性腹泻和渐进性消瘦，主要病理变化包括慢性肉芽肿性回肠炎、肠黏膜增厚并形成皱褶等。人类的副结核病又称为克罗恩病（Crohn′s disease），是由于食用被副结核分枝杆菌污染的牛奶或奶制品而引起的过敏性肠道炎症［1］。 世界动物卫生组织（OIE）将牛副结核病列为必须通报的动物疫病 （listed animal diseases）［2］，我国农业部将其列为二类动物疫病。近年来，我国对牛副结核病防控工作的重视程度不断提高，但缺乏该病的流行病学数据以及有效的疫苗是我国控制牛副结核病的最大障碍［3］。ELISA技术是一种开展牛副结核病实验室诊断的有效手段［4］。该研究采用ELISA方法对内蒙古自治区、黑龙江省、安徽省等6个省（区）的规模化牧场进行牛副结核病的血清抗体检测，以期为了解并分析我国规模化牧场牛副结核病的流行病学特征提供参考数据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 样本来源：于2015年从内蒙古自治区、黑龙江省、湖北省、四川省、安徽省、江苏省共6个省（区）的规模化牧场采集奶牛血清样品16 172份。其中内蒙古自治区3 208份，黑龙江省1 281份，湖北省6 933份，四川省2 121份，安徽省250份，江苏省2 379份。

1.1.2 检测试剂盒：副结核病抗体检测ELISA试剂盒，Prionics公司生产。

1.1.3 主要仪器设备：酶标仪、离心机、96孔洗板机、移液枪等均由内蒙古自治区动物疫病预防与控制中心实验室提供。

1.2 试验方法

1.2.1 试剂保存及使用：酶标结合物浓缩液（100×）于（5±3）℃条件下保存，其他试剂均平衡至室温使用。

1.2.2 副结核病ELISA抗体检测试验：具体操作步骤如下。在预稀释板中用绿色样品稀释液进行样品稀释，血清样品按照1∶20稀释；吸取100 μL混合好的样品和阴、阳性对照液加入酶标板的对应孔中，盖酶标板并在室温孵育（30±3）min；弃去孔内液体，用300 μL洗液洗涤3次，每孔加入100 μL新鲜配制的酶标结合物工作液，盖酶标板并在室温孵育（30±3）min；弃去孔内液体，用 300 μL 洗液洗涤 3次，每孔加入100 μL底物液，盖好并轻敲酶标板，室温孵育15～20 min；每孔加入50 μL终止液，轻微振荡混匀，在30 min内测定各孔的OD450nm。当阳性对照 OD450nm平均值大于 0.5（ODpc＞0.5），且阳性对照及阴性对照的OD450nm平均值的比值大于5（ODPC/ODNC＞5）时，方可利用如下公式计算样品判定值 （PP）。 PP=（OD样品-ODNC）/（ODPC-ODNC）×100。PP≥15时判定为阳性，PP＜15时判定为阴性。

1.3 数据处理 利用SPSS软件，采用卡方检验法比较不同饲养规模牧场抗体阳性率之间的差异，P＜0.05时认为差异显著，P＜0.01时认为差异极显著。

2 结果与分析

2.1 不同地区奶牛养殖场牛副结核分枝杆菌抗体检测结果 从16172份被检血清中，共检出牛副结核分枝杆菌抗体阳性血清419份，总体阳性率为2.59%。各省（区）牧场牛副结核病阳性率为1.22%～8.00%，其中江苏省的阳性率最低，为1.22%，安徽省的阳性率最高，为8.00%，湖北省的阳性率为2.05%，内蒙古自治区的阳性率为2.09%，黑龙江省的阳性率为3.90%、四川省的阳性率为5.23%（见图1）。

2.2 不同饲养规模牧场牛副结核分枝杆菌抗体阳性率 根据规模化牧场的奶牛养殖数量，将样本来源的牧场分为小型牧场（1～2 000头）、中型牧场（2 000～4 000 头）、大型牧场（4 000 头以上）。 不同规模牧场的阳性率为2.01%～4.32%，其中，小型牧场的阳性率为4.32%、中型牧场的阳性率为2.01%、大型牧场的阳性率为2.42%。

2.3 不同饲养规模牧场牛副结核分枝杆菌抗体阳性率之间的差异分析 运用卡方检验对不同规模牧场抗体阳性率之间的差异进行统计学分析，结果表明，小型牧场的阳性率显著高于大型牧场 （P＜0.05），极显著高于中型牧场（P＜0.01）；中型牧场与大型牧场的阳性率之间差异不显著（P＞0.05）。

图1 不同省（区）奶牛养殖场牛副结核分枝杆菌抗体检测结果

图2 不同饲养规模牧场的牛副结核分枝杆菌抗体阳性率

3 讨论

该研究采用Prionics公司生产的ELISA试剂盒，对采集自内蒙古自治区、黑龙江省、湖北省、四川省、安徽省、江苏省共6个省（区）规模化牧场的16 172份血清进行了牛副结核分枝杆菌抗体检测。针对采集样品的地区和采集样品的牧场规模等级进行调查与分析，笔者发现各省（区）的规模化牧场均发现牛副结核分枝杆菌感染阳性个体，6个省（区）的总体阳性率为2.59%，各省（区）的阳性率在1.22%～8.00%，其中江苏省的阳性率最低，安徽省的阳性率最高。该次调查结果与孙雨等［5］在2014—2015年对我国部分地区牛副结核病的血清学调查结果基本吻合，但总体阳性率略高于2014年（2.29%），各省（区）的阳性率范围也高于2014年（0.50%～3.75%）。按照样品采集的牧场规模等级来看，各等级牧场的阳性率在2.01%～4.32%，其中小型牧场的阳性率为4.32%，中型牧场的阳性率为2.01%，大型牧场的阳性率为2.42%。进一步对各个等级牧场之间的阳性率进行卡方检验，结果表明，小型牧场的阳性率与大、中型牧场之间存在显著或极显著差异，而大型牧场与中型牧场差异不显著。大型牧场和中型牧场的阳性率低于小型牧场，主要与大、中型牧场的饲养管理、疫病检疫、环境消毒等方面的工作比小型牧场开展得更好有关。

目前，牛副结核病已遍布全世界，而养牛业发达的国家，如英国、法国、丹麦、荷兰、德国、美国、前苏联、澳大利亚、加拿大、新西兰等国尤为多见。在英国，该病的感染率在15%～33%，每年损失200万～300万英镑，是奶牛淘汰的第一病因。美国已确认30个州约360多个牧场存在该病的流行。据估计，美国的感染畜群中每年每头牛遭受75～100美元的经济损失。该病在法国流行30多年，牛群病死率约为8%。澳大利亚每年因副结核分枝杆菌污染而被限制出口的肉、奶损失约7 500万澳元，产业损失5 760万澳元［6］。牛副结核病在带来巨大经济损失的同时也给人类的健康产生了威胁。近十余年来，我国的克罗恩病患者数量呈明显上升趋势，该病已成为我国人群消化系统的常见病［7-8］。

目前，我国尚未研制出针对牛副结核病的有效疫苗，也缺乏有效治疗该病的方法。加强检验检疫工作，及时发现并隔离病牛，加强消毒工作，控制病原的传播扩散，定期反复检疫，逐步净化，是目前防控牛副结核病的主要手段。

［1］田克恭.人与动物共患病［M］.北京：中国农业出版社，2013.

［2］OIE.Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals［M］.6thed.Paris：OIE Press，2011.

［3］韩猛，张亮，王基隆，等.山东省规模化奶牛场结核病与副结核病流行病学调查研究 ［J］.中国农学通报，2014，30（14）：10-13.

［4］何昭阳，韩有库，顾万钧，等.牛副结核ELISA诊断方法研究［J］.畜牧兽医学报，1991，22（1）：57-60.

［5］孙雨，马世春，董浩，等.我国部分省市牛副结核病的血清学调查与分析［J］.动物医学进展，2015，36（11）：118-120.

［6］谷立波，刘云志，朱恒义.牛副结核病及其防制对策［J］.吉林畜牧兽医，2004（9）：13-15.

［7］WANG Y F，OUYANG Q，HU R W.Progression of inflammatory bowel disease in China ［J］.J Dig Dis，2010，11（2）：76-82.

［8］OUYANG Q，TANDON R，GOHK L，et al.The emergence of inflammatory bowel disease in the Asian Pacific region［J］.Curt Opin Gastroenterol，2005，21（4）：408-413.

Epidemiological Investigation of Bovine Paratuberculosis in Scaled Dairy Farms in Some Provinces of China in 2015

CUI Jin-lei1，ZHAO Yong-chun2，WU Tong1，SHEN Zhi-yi1
（1.College of Veterinary Medicine，Inner Mongolia Agricultural University，Hohhot 010018，China；2.Baotou Municipal Agricultural Bureau of Inner Mongolia，Baotou 014010，China）

In order to understand the infection status of bovine paratuberculosis in the scaled dairy farms in some provinces of China,a total of 16 172 bovine serum samples from dairy farms in Inner Mongolia Autonomous Region,Heilongjiang Province,Hubei Province,Sichuan Province,Anhui Province and Jiangsu Province were collected in 2015 and used to detect the antibody against Mycobacterium paratuberculosis.The total antibody positive rate of the samples for Mycobacterium paratuberculosis was 2.59%,and the positive rate of Inner Mongolia Autonomous Region,Heilongjiang Province,Hubei Province,Sichuan Province,Anhui Province and Jiangsu Province were 2.09%,3.90%,2.05%,5.23%,8.00%and 1.22%.The antibody positive rate of the dairy farms with different scales was as following:the large scale dairy farms was 2.42%,the moderate scale dairy farms was 2.01%,and the small scale dairy farms was 4.32%.The antibody positive rate of the small scale dairy farms was extremely significantly higher than that of the moderate scale dairy farms （P<0.01）,and was significantly higher than that of the large scale dairy farms （P<0.05）.It was indicated that the infection rate of Mycobacterium paratuberculosis in the scaled dairy farms in Anhui Province,Sichuan Province and Heilongjiang Province was higher,and the antibody positive rate of the large scale dairy farms was lower than that of the moderate and small scale dairy farms.The results of epidemiological investigation of bovine paratuberculosis obtained in this study offered reference for the control of this disease in China.

bovine paratuberculosis；epidemiological investigation；scaled dairy farms

S855.12；S854.43

A文章顺序编号1672-5190（2016）03-0097-03

2016－03－02

崔金磊（1991—），男，硕士研究生，主要研究方向为兽医传染病学。

申之义（1958—），男，教授，硕士生导师，主要研究方向为兽医传染病学。

（责任编辑：赵俊利）