干酪乳杆菌与氟苯尼考对肉雏鸡生长性能及免疫力影响的比较研究

伊淑帅，王开，齐宇，潘娜，胡桂学

(吉林农业大学 动物科学技术学院，长春 130118)



干酪乳杆菌与氟苯尼考对肉雏鸡生长性能及免疫力影响的比较研究

伊淑帅，王开，齐宇，潘娜，胡桂学*

(吉林农业大学 动物科学技术学院，长春 130118)

为比较肉雏鸡在饮水中添加干酪乳杆菌与氟苯尼考对肉雏鸡生长性能与免疫力的影响，本试验选取1日龄肉鸡120只，随机分为3个处理组，分别为对照组、干酪乳杆菌组、氟苯尼考组，每个处理组4个重复，每个重复10只，试验期为21 d，检测不同阶段各处理组的平均日增重、料重比、免疫器官指数、外周血IgG含量、盲肠sIgA含量、淋巴细胞增殖能力。结果显示，饮水中添加干酪乳杆菌对肉雏鸡体重、平均日增重、平均日采食量影响不显著，添加氟苯尼考显著抑制了肉雏鸡的生长性能(P<0.05)，二者对肉雏鸡料重比的影响均差异不显著。添加干酪乳杆菌对肉雏鸡免疫器官指数影响不显著，但显著提高了肉雏鸡外周血IgG含量、盲肠sIgA含量以及外周血淋巴细胞增殖能力(P<0.05)，添加氟苯尼考显著抑制了肉雏鸡的免疫水平(P<0.05)。结果表明新进肉雏鸡在饮水中添加氟苯尼考对雏鸡的生长性能及免疫力有显著的抑制作用，应减少使用，而添加干酪乳杆菌对提高雏鸡免疫力是有益的。

干酪乳杆菌；氟苯尼考；雏鸡；生长性能；免疫力

肉鸡养殖的经济效益与雏鸡阶段的发病率、死亡率、生长性能等因素息息相关。吉林省作为我国肉鸡养殖大省，养殖场经常使用抗生素并通过饮水或作为饲料添加剂的形式施用以控制发病率、提高生长性能，获取更大的经济效益。其中，氟苯尼考是肉鸡养殖场中使用率最高的抗生素之一，使用普及率达到78%[1]。然而，由于细菌抗药性、兽药残留等问题的出现，限制了抗生素的使用。益生菌作为一类对机体有益的活的微生物，可以有效抑制病原菌的生长，调节肠道微生物菌群平衡，增强宿主机体免疫力，已做为一种新型饲料添加剂用于畜禽养殖[2]。益生菌是否可以代替抗生素推广使用已经成为肉鸡养殖业一个值得关注的问题，因此，评估使用益生菌、抗生素对雏鸡生长性能与免疫力的影响，对二者在临床实践中的应用具有良好的指导意义。本试验通过在雏鸡饮水中添加干酪乳杆菌、常用抗生素氟苯尼考，比较各阶段相应的生长性能与免疫指标，探讨干酪乳杆菌与氟苯尼考对雏鸡生长性能与免疫力的影响，旨在评价二者在雏鸡养殖中的应用价值。

1 材料和方法

1.1 主要仪器 SANYO-MCV131BNF超净无菌工作台(日本SANYO公司)、Multiskan Spectrum 全波长酶标仪(芬兰Thermo Fisher Labsystems公司)、MikRo 22R高速冷冻离心机(德国HETTICH公司)、HX502T电子分析天平(慈溪市天东衡器厂)、MCO-18AIC CO2恒温培养箱(日本SANYO公司)、UV-2012PCS气浴恒温摇床(龙尼柯仪器有限公司)。

1.2 主要试剂 干酪乳杆菌(L.casei)ATCC393为本实验室保存；禽用氟苯尼考购自吉林省某动物药业有限公司；鸡分泌性免疫球蛋白-A(sIgA)和鸡免疫球蛋白-G(IgG)ELISA检测试剂盒购自上海朗顿生物有限公司；刀豆蛋白A(ConA)、MTT、淋巴细胞分离液(密度1.077±0.002)购自sigma公司。

1.3 试验动物及试验设计 选取120只1日龄AA+肉鸡，购自吉林永吉方圆肉种鸡场，随机分为3个处理组：对照组(C组)，基础日粮；干酪乳杆菌组(L组)，基础日粮，饮水中添加1 g/L干酪乳杆菌(约109CFU/L)；氟苯尼考组(F组)，基础日粮，饮水中添加0.1%氟苯尼考；添加标准依据氟苯尼考产品说明与郑颖辉研究结果[3]。每个处理组4个重复，每个重复10只。

1.4 试验日粮及饲养管理 按照肉鸡正常饲养及防疫程序进行，采用立体笼养方式，饲养周期为21 d，分三阶段进行：1～7 d，8～14 d，15～21 d。各处理组雏鸡自由采食和饮水，干酪乳杆菌与氟苯尼考采用饮水的方式进行添加，并保证雏鸡在短时间内全部饮用完毕。试验基础日粮营养标准见表1。

表1 基础日粮营养水平

1.5 试验方法

1.5.1 生长性能 每天定时称量各处理组每日供料量、剩余料量、损失料量。分别于试验0、21 d称量各处理组雏鸡的体重，称重前禁食12 h，计算平均日增重与平均日采食量，按以下公式计算料重比：料重比=饲养期内所耗标准饲料量(kg)/同期增重(kg)。

1.5.2 免疫器官指数 分别于试验7、14、21 d称量各处理组雏鸡的体重，称重前禁食。12 h，采集脾脏、法氏囊、胸腺，剔除表面多余的脂肪组织，称量免疫器官重量，按以下公式计算免疫器官指数：免疫器官指数(g/kg)=免疫器官湿重(g)/体重(kg)。

1.5.3 外周血IgG含量检测 使用鸡免疫球蛋白-G(IgG)ELISA试剂盒检测各处理组雏鸡7、14、21 d收集的外周血血清中IgG含量，每个样品做两个重复。

1.5.4 盲肠内容物sIgA含量检测 使用鸡分泌性免疫球蛋白-A(sIgA)ELISA试剂盒检测各处理组雏鸡7、14、21 d收集的盲肠内容物上清中sIgA含量，每个样品做两个重复。

1.5.5 外周血淋巴细胞增殖试验 无菌采集心脏肝素抗凝血2 mL，经淋巴细胞分层液分离淋巴细胞，细胞计数后稀释至浓度为2×106cell/mL，并用台盼蓝拒染法检测细胞活力>95%。采用 MTT法检测外周血淋巴细胞增殖能力，计算淋巴细胞的转化率[4]。

1.5.6 数据统计分析 实验数据采用Mean±SD表示，使用spss18.0软件，采用单因素方差分析(one way-ANOVA)法对实验数据进行分析，检验标准为P<0.05。

2 结果与分析

2.1 对雏鸡生长性能的影响 如表2所示，雏鸡饮水中添加干酪乳杆菌(L组)对雏鸡的体重、平均日增重、平均日采食量影响均不显著(P>0.05)；氟苯尼考组(F组)的体重、平均日增重、平均日采食量显著低于对照组(C组)与干酪乳杆菌组(L组)。整个试验周期内，三个处理组料重比差异均不显著(P>0.05)。结果表明，添加干酪乳杆菌对雏鸡生长性能影响不显著，添加氟苯尼考显著抑制了雏鸡的生长性能。

表2 干酪乳杆菌与氟苯尼考对雏鸡生长性能的影响结果表

注：同一行标注有不同字母表示差异显著(P<0.05)，标注有相同字母或不标注表示差异不显著(P>0.05)

2.2 对雏鸡免疫器官指数的影响 如表3所示，7 d时干酪乳杆菌组(L组)与对照组(C组)脾指数、法氏囊指数、胸腺指数差异均不显著(P>0.05)；添加氟苯尼考(F组)免疫器官指数均显著降低，与对照组(C组)相比，脾指数、法氏囊指数、胸腺指数降低30.6%、39.6%、33.4%。14 d时，与对照组(C组)相比，干酪乳杆菌组(L组)胸腺指数提高23.6%，氟苯尼考组(F组)脾指数、法氏囊指数降低16.3%、29.6%。21 d时，三个处理组脾指数、胸腺指数差异均不显著(P>0.05)，干酪乳杆菌组(L组)与氟苯尼考组(F组)法氏囊指数差异显著(P<0.05)。表明干酪乳杆菌对雏鸡免疫器官指数影响不显著，而氟苯尼考则降低了免疫器官指数。

表3 干酪乳杆菌与抗生素对雏鸡免疫器官指数的影响结果表

注：同一行标注有不同字母表示差异显著(P<0.05)，标注有相同字母或不标注表示差异不显著(P>0.05)

2.3 对雏鸡外周血IgG含量的影响 依据ELISA试剂盒绘制标准曲线(图1)，计算样品含量如图2所示，7 d时三个处理组外周血IgG含量差异均不显著(P>0.05)；14 d时，干酪乳杆菌组(L组)与对照组(C组)、氟苯尼考组(F组)相比，外周血IgG含量增加24.3%、17.2%，但是不具有生物学统计意义(P>0.05)；21 d时，三个处理组IgG含量差异显著(P<0.05)，其中干酪乳杆菌组(L组)含量最高，为4.18±0.37 mg/mL，氟苯尼考组(F组)含量最低，为3.24±0.91 mg/mL。表明干酪乳杆菌可以显著提高肉雏鸡外周血IgG水平。

图1 IgG ELISA检测试剂盒标准曲线(标准曲线相关系数：y=1.9512x2-1.4838x+1.3258, R2=0.9920)

图2 干酪乳杆菌与氟苯尼考对雏鸡外周血IgG含量的影响

2.4 对雏鸡盲肠sIgA含量的影响 依据ELISA试剂盒绘制标准曲线(图3)，计算样品含量如图4所示，7、14 d时，三个处理组盲肠sIgA含量差异均不显著(P>0.05)，干酪乳杆菌组(L组)较其他处理组含量较高；21 d时，对照组与氟苯尼考组盲肠sIgA含量差异均不显著(P>0.05)；添加干酪乳杆菌(L组)盲肠sIgA显著提高(P<0.05)，与对照组(C组)、氟苯尼考组(F组)相比，盲肠sIgA含量增加22.0%、23.4%。表明添加干酪乳杆菌可以显著提高雏鸡盲肠sIgA水平，添加氟苯尼考对雏鸡盲肠sIgA含量影响不显著。

图3 sIgA ELISA检测试剂盒标准曲线

图4 干酪乳杆菌与氟苯尼考对雏鸡盲肠内sIgA含量的影响

2.5 对雏鸡外周血淋巴细胞增殖能力的影响 如图5所示，14 d时三个处理组淋巴细胞转化率差异显著(P<0.05)，干酪乳杆菌组(L组)外周血淋巴细胞转化率最高，为0.534±0.028，氟苯尼考组(F组)淋巴细胞转化率最低，为0.150±0.022；21 d时，对照组(C组)与干酪乳杆菌组(L组)外周血淋巴细胞转化率差异不显著(P>0.05)，分别为0.352±0.082、0.360±0.089，氟苯尼考组(F组)淋巴细胞转化率最低，为0.077±0.005，与其他处理组差异显著(P<0.05)。结果表明添加氟苯尼考显著抑制了雏鸡淋巴细胞增殖能力，添加干酪乳杆菌可以提高淋巴细胞增殖能力。

图5 干酪乳杆菌与氟苯尼考对雏鸡外周血淋巴细胞转化率的影响

3 讨论与小结

3.1 干酪乳杆菌与氟苯尼考对雏鸡生长性能的影响 干酪乳杆菌在畜禽胃肠道内可以合成多种消化酶类，消化分解机体内多种营养物质，促进营养物质的吸收与利用；还可以通过在胃肠道内的发酵，利用小分子的碳水化合物合成脂肪酸、氨基酸、维生素等营养物质，为机体提供能量来源，加速饲料的消化利用，提高生长性能[5]。但本实验中，添加干酪乳杆菌对雏鸡的平均日增重、料重比影响均不显著，但有改善胃肠功能、提高饲料转化率的趋势，其原因可能与乳杆菌的种类、剂型、添加的浓度有关，与付果花等的研究相一致[6]。氟苯尼考为氯霉素的结构同系物，作用机理及抗菌谱与氯霉素和甲砜霉素相似，1990年首次在日本上市，目前在肉鸡养殖实践中，常用于防治大肠杆菌、沙门菌等引起的细菌性肠炎。它可以引起胃肠迷走神经轴索变性，引起神经功能障碍，导致胃酸分泌减少，降低胃泌素释放量和胰液分泌，最终导致胃肠消化、吸收功能障碍[7]。本试验结果表明，添加氟苯尼考可以抑制雏鸡的生长，但对料重比的影响不显著，因此建议在肉雏鸡阶段，应尽量减少对该药物的使用。

3.2 干酪乳杆菌与氟苯尼考对雏鸡免疫器官指数的影响 免疫器官的发育水平决定了机体免疫应答的能力，是评价雏鸡免疫机能的重要指标[8]。研究发现，雏鸡日粮中添加不同剂量、不同剂型的枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌均能促进免疫器官的发育，显著提高雏鸡的脾指数、法氏囊指数与胸腺指数[9-10]。李汝春证明，氟苯尼考对鸡的免疫器官在短期内造成了不可逆的损伤作用，造成了法氏囊、脾脏、盲肠扁桃体的萎缩[11]。本试验结果表明，饮水中添加干酪乳杆菌对雏鸡免疫器官指数影响不显著，但可以提高雏鸡部分免疫器官指数，添加氟苯尼考显著抑制了免疫器官的发育。氟苯尼考对免疫器官发育的抑制作用在低日龄雏鸡中表现的更加明显。

3.3 干酪乳杆菌与氟苯尼考对雏鸡免疫力的影响 干酪乳杆菌进入畜禽胃肠道后，通过介导细胞内信号传导通路，活化巨噬细胞、自然杀伤细胞、杯状细胞等，促进巨噬细胞分泌IL-10、TNF-α等多种细胞因子，促进黏液蛋白与sIgA的分泌、增强肠道黏膜屏障，增加血清中IgA 、IgG和IgM水平，促进T 淋巴细胞和 B 淋巴细胞成熟，增强免疫机能，提高肠道免疫力和抗病力，抵抗肠道肿瘤、炎症等疾病[12-13]。徐子涵比较了不同剂型的草乳杆菌与格氏乳杆菌制剂对雏鸡免疫机能的影响，结果表明，液体与固体两种剂型的乳杆菌制剂均能提高雏鸡血清中IgA、IgG以及肠道内容物中sIgA的含量，增强雏鸡T淋巴细胞转化率，增加细胞因子表达量，并且证明液体益生菌制剂的效果略优于固体制剂[14]。Molnar等研究了枯草芽孢杆菌对肉鸡免疫机能的影响，结果表明枯草芽孢杆菌增加肠粘膜固有层杯状细胞的数量，增强肉鸡对新城疫病毒的免疫应答能力[15]。氟苯尼考作为氯霉素家族的抗生素，可以抑制免疫活性细胞的生成，降低细胞免疫功能，抑制细胞免疫与体液免疫。张建梅等比较了复合微生态制剂与氟苯尼考对雏鸡免疫机能的影响，结果表明氟苯尼考可引起雏鸡法氏囊与脾脏萎缩及淋巴细胞的减少与死亡，对机体免疫机能具有明显的抑制作用[16]。本试验结果显示，干酪乳杆菌可以显著提高雏鸡外周血IgG含量、盲肠sIgA含量以及外周血淋巴细胞增殖能力，而氟苯尼考对雏鸡外周血IgG水平、外周血淋巴细胞增殖能力均有显著的抑制作用，尤其是淋巴细胞增殖能力。表明饮水中添加干酪乳杆菌有助于提高雏鸡免疫水平，而氟苯尼考对雏鸡免疫机能有显著的抑制作用。

本试验证明干酪乳杆菌能提高雏鸡的免疫力，可以从外周血中IgG含量、盲肠sIgA含量以及淋巴细胞增殖能力均显著提高得到验证。而肉鸡养殖中使用普及率最高的抗生素-氟苯尼考对雏鸡的生长性能与免疫力均有显著的抑制作用。因此，在肉鸡养殖中应尽量减少氟苯尼考的使用，并通过不断筛选益生菌菌株、改进益生菌发酵工艺等途径逐步替代抗生素，提高生长性能与抗病力，以获得更大的经济效益。

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(编辑：侯向辉)

Comparative Study on Effect ofLactobacillusand Florfenicol on Growing Performance and Immunity Function of Broilers

YI Shu-shuai, WANG Kai, QI Yu, PAN Na, HU Gui-xue*

(CollegeofAnimalScienceandTechnology,JilinAgriculturalUniversity,Changchun130118,China)

In order to compare the effect ofLactobacilluscaseiand florfenicol on growth performance and immunity function of broilers, in this experiment, 120 one-day-old broilers were randomly divided into 3 groups with 4 replicates in each group and 20 chickens per replicate, including the control group, theLactobacilluscaseigroup, the florfenicol group. The average daily gain, feed weight ratio, immunity organ index, IgG content, sIgA content, and lymphocyte proliferation ability of the treatment group were detected at different stages. The results showed that the effect of body weight, average daily gain and average daily feed intake was not significant by addingL.caseiin drinking water, the growth performance of broilers was significantly inhibited by adding florfenicol(P<0.05), the effect ofL.caseiand florfenicol on chicken feed weight ratio was not significantly. The effect ofL.caseion immunity organ index was not significant, but the IgG content, sIgA content and lymphocyte proliferation ability were significantly increased (P<0.05), immunity function was significantly inhibited using florfenicol (P<0.05). In conclusion, the growth performance and immunity function of broiler could be significant inhibited using florfenicol in the water. however,Lactobacilluscaseiis benefical for brolier to improve the immunity.

Lactobacillus;florfenicol;broilers; growing performance;immunity function

国家自然科学基金项目(31372413)

伊淑帅，硕士研究生，从事益生菌作用机制研究。

胡桂学。E-mail：guixue1964@126.com

2015-07-17

A

1002-1280 (2015) 09-0031-06

S852.61