五省牛、羊和猪口蹄疫疫苗免疫效果的试验

高日明，李婷婷，范秀丽，孙树民∗

（1.金宇保灵生物药品有限公司，呼和浩特010030；2.内蒙古民族大学动物科学技术学院，内蒙古通辽028042）

五省牛、羊和猪口蹄疫疫苗免疫效果的试验

高日明1，李婷婷2，范秀丽1，孙树民2∗

（1.金宇保灵生物药品有限公司，呼和浩特010030；2.内蒙古民族大学动物科学技术学院，内蒙古通辽028042）

为了监测O、A和AsiaⅠ型口蹄疫疫苗免疫后引起的抗体水平，采用口蹄疫液相阻断ELISA法和病毒非结构蛋白3ABC-ELISA法对我国云南、内蒙古、甘肃、新疆和西藏的部分地区牛、羊和猪的血清样品共65591份进行三型口蹄疫抗体水平监测。液相阻断ELISA方法显示加强免疫后各地合格率均能达到100%；非结构蛋白3ABC-ELISA方法显示五省抗体检测合格率分别为91.13%、88.38%、78.04%、88.15%和85.15%；不同动物口蹄疫分型抗体检测结果以云南最高（均在85%以上），其它四省抗体检测合格率均在70%以上。结果表明，该疫苗免疫可产生较好的免疫效果。［关键词］ 口蹄疫；口蹄疫疫苗；抗体检测；免疫效果

口蹄疫病（Foot and mouth disease，FMDV）是由口蹄疫病毒引起偶蹄动物多发的一种传染性较强的疾病。其病毒为小的正链，核糖核酸家族成员，现分七个血清型（O、A、C、AsiaⅠ、SAT1、SAT2和SAT3），我国流行最多的血清型为O、A和AsiaⅠ，五省邻近国家流行情况较为复杂，在2009-2011年统计显示：澳大利亚、韩国、朝鲜和日本口蹄流行主要以A和O型为主，印度、巴基斯坦、尼泊尔等南亚以O、A、C和AsiaⅠ型流行为主，越南以AsiaⅠ血清型为主要流行，这种错综复杂的流行情况，给我国口蹄疫病防治提出了巨大的挑战［1］。迄今为止，该病治疗上尚无有效药物，疫苗免疫是控制本病最为有效的方法之一，同时这种方法也帮助一些国家的部分地区消灭了本病［2］。澳大利亚通过选择适宜的血清型疫苗免疫，使口蹄疫的发病率逐年减少，以致部分地区消灭此病。土耳其、韩国、朝鲜、日本和越南等国家选择性增加免疫次数，直至达到规定国家规定的免疫防控标准。我国流行口蹄疫血清分型多，接种一种血清型的口蹄疫疫苗不足以保护其他血清型病毒的感染的抗体［3］。其根源在于每个分型具有不同的遗传系谱［4］，其每种血清型遗传变异可导致抗原变异，从而影响疫苗对同一血清异源毒株的保护［5］。尽管我国将该病列为强制免疫病种，如何实时监测免疫后抗体产生的水平，成为当前亟待解决的问题。本试验以2014年五省牛、羊、猪疫苗免疫后血清样品为研究对象，分别监测65591份血清样品抗体水平，为我国牛、羊、猪口蹄疫防控工作提供依据与参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血清来源 2014年收集我国内蒙古、云南、宁夏、新疆、西藏五个省份口蹄疫疫苗后15、30、60 d的牛血清、羊血清和猪血清共65591份，不区分动物、饲养性质和地区，统计抗体产生合格率情况。

1.1.2 ELISA试剂盒 口蹄疫病毒（O、A和AsiaⅠ型）非结构蛋白液相阻断ELISA抗体检测试剂盒和口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC-ELISA抗体检测试剂盒均购自中国兰州兽医研究所。

1.1.3 免疫疫苗 所选疫苗购于金宇保灵生物药品有限公司生产（批号：4235002，简称金宇）

1.2 方法

1.2.1 不同免疫期抗体合格率测定 采用口蹄疫O、A和AsiaⅠ型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒，按照检测试剂盒说明书对收集的15、30、60 d各3000份牛血清、3000份羊血清和3000份猪血清（每个采血日期三种动物各1000份样品，共9000份样品）进行测定。

1.2.2 不同地区免疫效果评价 采用口蹄疫O、A和AsiaⅠ型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒，按照检测试剂盒说明书对不同地区牛、羊、猪规模化养殖场、屠宰场和散户饲养收集的30 d共7146份样品进行检测，分析各地区用疫苗后免疫效果。

1.2.3 不同地区3种动物的非结构蛋白抗体监测

采用病毒非结构蛋白3ABC-ELISA抗体检测试剂盒，按照检测试剂盒说明书进行对2014年五个省不同地区牛、羊、猪30407份血清进行了自然感染抗体监测及比较。

1.2.4 不同地区非结构蛋白抗体测定 采用病毒

非结构蛋白3ABC-ELISA抗体检测试剂盒，按照检测试剂盒说明书进行对2014年五个省不同地区牛、羊、猪19038份血清进行了自然感染抗体监测及比较。

2 结果

2.1 不同免疫期抗体合格率测定 在接种疫苗前被检测动物的抗体合格率基本在53%左右，一免后15 d都能达到国家规定的标准（抗体合格率70%），检测血清样品中口蹄疫AsiaⅠ型免疫抗体消长规律与O型口蹄疫消长规律基本一致，而口蹄疫A型免疫抗体消长规律相对于AsiaⅠ型和O型要低，加强免疫后抗体合格率能达到100%，结果见表1。

表1 注射口蹄疫三价灭活苗检测抗体合格率结果

2.2 不同地区口蹄疫免疫效果评价 经液相阻断ELISA方法对牛、羊和猪口蹄疫O型、亚洲I型（AsiaⅠ型）、A型的免疫抗体的检测，其中猪检测O型，牛、羊检测O型、亚洲Ⅰ型（AsiaⅠ型）、A型，以评价各地口蹄疫的免疫效果。结果显示：2014年五省和自治区中云南省合格率最高达91.13%，而内蒙古、甘肃、新疆和西藏抗体合格率均在70%以上符合国家规定的标准，结果见表2。

表2 不同地区口蹄疫的免疫效果检测结果

2.3 不同地区3种动物的非结构蛋白抗体测定经3ABC非结构蛋白抗体ELISA方法对牛、羊和猪口蹄疫抗体进行检测，结果如下：牛O型口蹄疫免疫抗体检测7737头份，合格6262头份，云南省合格率最高90.52%，西藏最低74.96%，平均合格率80.94%；亚洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗体检测6308头份，合格5075头份，云南合格率最高90.48%，西藏最低75.12%，平均合格率80.45%；A型口蹄疫免疫抗体检测6250头份，合格4705头份，云南合格率最高85.28%，西藏最低72.00%，平均合格率75.28%；全部抗体合格率均在70%以上，符合国家规定的标准。

羊O型口蹄疫免疫抗体检测1168头份、合格959头份、云南合格率最高93.16%，新疆最低75.31%，平均合格率82.11%；亚洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗体检测1107头份、合格935头份、云南格率最高91.00%，甘肃最低78.79%，平均合格率84.46%，全部抗体合格率均在70%以上，符合国家规定的标准。

猪仅统计O型口蹄疫抗体检测情况，抗体检测7836头份、合格6327头份、云南合格率最高96.43%，新疆最低73.54%，平均合格率80.74%，全部抗体合格率均在70%以上，符合国家规定的标准，结果见表3-表5。2.4 不同地区非结构蛋白抗体测定 采用非结构蛋白抗体（3ABC-ELISA）阳性率显示：不同地区2014年口蹄疫感染抗体的测定血清19038头份、阳性血清样品羊738头份，各省均有。内蒙古阳性率最低2.91%，云南省阳性率最高5.05%。检测阳性的刮取OP液进行PCR复检，结果为阴性，结果见表6。

表3 2014年不同地区牛非结构蛋白抗体监测情况

表4 2014年不同地区羊非结构蛋白抗体监测情况

表5 2014年不同地区猪非结构蛋白抗体监测情况

表6 2014年不同地区非结构蛋白抗体的测定结果

3 讨论

本研究的目的是通过边境各省ELISA方法检测的数据来评估口蹄疫灭活疫苗对本地区可能起到的防控作用，通过数据说明口蹄疫灭活疫苗接种不同的动物后，均能起到较好的防控效果。

从监测结果看不同血清型免疫抗体合格率均超过70%，总体免疫合格率均高于国家标准，这与祁光宇等［6］试验结论相一致。说明我国推广的口蹄疫疫苗强制免疫，提高了易感动物的免疫力，特别是在边境复杂的流行环境下，获得了较大的成效。

由于没有区分动物的种类，表中所反应的数据有一定的局限性。但从表中不难看出口蹄疫阳性样品在五省不同程度的存在，具有潜在的威胁，这主要由于复杂的地理位置、病原血清种类的繁多、污染范围较广有关。从数据来看内蒙古、甘肃和西藏与高日明、豆思远和易俊等试验结论相一致［7-9］。

免疫效果差异可能存在以下原因，一是合格率低的省份可能存在农村采集散养户样品较多，免疫密度低于集中饲养动物和规模化养殖场，从而导致抗体水平较低；二是，从本次监测数据未能区分各种动物，而且有的动物不使用三价灭活疫苗免疫，存在纵向和横向比较的不对等，造成疫苗免疫效果不一；三是可能与样品的采集、运输、检测和人员的操作等因素有关。因此，开展细致、实时、纵横均衡的口蹄疫免疫抗体监测，及时掌握不同动物种群和不同饲养性质的免疫抗体产生水平，才能更加充分合理的反应本病的流行和防控状况。

［1］ 高飞，孙国斌，张金凤.国外口蹄疫流行现状分析及防治策略［J］.北京农学院学报，2006，1：76-77.

［2］ Rodriguez L L，Grubman M J.Foot and mouth disease virus vaccines.Vaccine.2009，5，27：90-94.

［3］ Sharma G K，Mohapatra J K，Mahajan S，et al.Comparative evaluation of non-structural protein-antibody detecting ELISAs for foot-and-mouth disease sero-surveillance under intensive vaccination［J］.J Virol Methods，2014：207：22-28.

［4］ Colling A，Morrissy C，Barr J，et al.Development and validation of a 3ABC antibody ELISA in Australia for foot and mouth disease［J］.Aust Vet J，2014，92（6）：192-199.

［5］ Nagendrakumar S B，Srinivasan V A，Madhanmohan M，et al.Evaluation of cross-protection between O1 Manisa and O1 Campos in cattle vaccinated with foot-and-mouth disease virus vaccine incorporating different payloads of inactivated O1 Manisa antigen［J］.Vaccine，2011，24，29（10）：1906-1912.

［6］ 祁光宇，任维维，智晓莹，等.O型口蹄疫抗体金标试纸盒检测免疫动物抗体效价与攻毒保护关系［J］.畜牧兽医学报，2011，09：1277-1283.

［7］ 高日明，马立峰，李敏，等.内蒙古地区牛羊口蹄疫灭活疫苗的免疫效果比较研究［J］.中国兽药杂志，2014，04：15-18.

［8］ 豆思远，豆玲，王佳，等.2009～2012年甘肃省猪口蹄疫感染情况和抗体水平调查［J］.国外畜牧学（猪与禽），2014，04：57-58.

［9］ 易俊，陈智勇，韩晋玫，等.2013年度西藏及四川红原地区牛血清口蹄疫抗体水平监测［J］.中国奶牛，2014，18：64-65.

（编辑：陈希）

Experiment on the Immune Effects of FMD Vaccine to Cattle，Sheep and Swine in Five Provinces

GAO Ri-ming1，LI Ting-ting2，FANG Xiu-li1，SUN Shu-min2∗
（1.Inner Mongolia Jinyu Baoling Biological Pharmaceutical Company Limited，Huhehot 010030，China；2.College of Animal Science and Technology，Inner Mongolia University for Nationalities，Tongliao，Inner Mongolia 028042，China）

In order to control the prevalence of FMD and moniter antibody levels of FMDV type O，A and AsiaⅠin the border area，FMD phase blocking ELISA and virus nonstructural protein 3ABC-ELISA method are used to detect three types of FMDV 65591 sample sera antibody levels of cattle，sheep and swines in Yunnan，Inner Mongolia，Gansu，Xinjiang and Tibet.Liquid phase blocking ELISA method shows that the pass rate could reach 100%after booster；non-structural protein 3ABC-ELISA antibody test shows the pass rates of five provinces are 91.13%，88.38%，78.04%，88.15%and 85.15%respectively；samples from Yunnan are indicate as the highest antibody levels ones in different types of animal FMDV antibody detection（more than 85%），the other four provinces antibody test pass rates above 70%.The results show that it can be well immunization effect by inactivation of FMD vaccines.

foot and mouth disease；FMD vaccine；antibody monitoring；immunization effect

2015-02-01

A

1002-1280（2015）03-0017-04

S852.52

国家自然科学基金项目（31160504；31460658）

高日明，硕士，从事生物制品研究。

孙树民。E-mail：shums1975＠163.com