高原地区小尾寒羊附睾细胞外基质相关蛋白分布特征研究

李　聪，袁莉刚，张　勇

(甘肃农业大学动物医学院，兰州 730070 )



高原地区小尾寒羊附睾细胞外基质相关蛋白分布特征研究

李聪，袁莉刚*，张勇

(甘肃农业大学动物医学院，兰州 730070 )

旨在研究高原地区小尾寒羊附睾细胞外基质相关蛋白的分布特征。应用Masson’s、Gomori’s、PAS和 AB-PAS(pH=2.5)组织化学染色方法观察5只健康成年高原地区小尾寒羊附睾的组织结构特点，进而用免疫组织化学SP法观察层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原蛋白(Col Ⅳ)和硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)的分布特征。高原地区小尾寒羊附睾各部分管腔为柱状纤毛上皮，附睾尾间质胶原纤维和网状纤维较附睾头及附睾体明显增多。PAS反应显示附睾头和附睾尾阳性强于附睾体，AB-PAS反应显示附睾头、体、尾阳性差异较小。免疫组织化学显示，Col Ⅳ在附睾头和附睾体组织中表达最强，HSPG次之，LN表达较弱，HSPG和LN的阳性表达差异不显著(P>0.05)；而HSPG在附睾尾组织中表达最强，LN次之，Col Ⅳ表达较弱，HSPG和LN的阳性表达差异不显著(P>0.05)。高原地区小尾寒羊附睾尾间质胶原纤维和网状纤维的分布较附睾头和附睾体多，附睾各部分中PAS的反应强弱与附睾上皮分泌功能的变化密切相关，附睾头和附睾尾输精管的分泌功能增强。附睾头上皮基细胞Col Ⅳ、HSPG和LN分泌增加，且Col Ⅳ、HSPG和LN与血管的调节作用密切相关。

高原地区小尾寒羊；附睾；Ⅳ型胶原蛋白；层粘连蛋白；硫酸乙酰肝素蛋白多糖；组织化学

小尾寒羊四季发情，全年可配种，具有极高的繁殖力，是中国独特的遗传资源[1]。哺乳动物附睾具有储存、转运和成熟精子的作用[2]，分布于附睾管固有层、上皮和间质区的细胞外基质(Extracellular matrix，ECM)主要包括胶原蛋白I、III、Ⅳ (Type Ⅳ Collage，Col Ⅳ)、层粘连蛋白(Laminin，LN)、硫酸乙酰肝素蛋白多糖(Heparan sulfate proteoglycan，HSPG)等，能够维持组织和细胞的形态和功能，并在生长、分化过程中起重要作用[3]。

哺乳动物睾丸生精小管基膜富含Col Ⅳ、LN、HSPG、制动素以及纤维粘蛋白等[4]。Col Ⅳ是由α肽链组成的异源三聚体螺旋结构的非原纤维胶原蛋白，形成器官基膜的力学结构[5]；HSPG则是由5个复杂结构域组成的蛋白多糖，维持基膜的稳定性并与基膜的滤过作用有关[6]；而由α、β、γ 3种肽链组成的异源三聚体糖蛋白LN是基膜中最丰富的一种ECM[7]。成年小鼠附睾各部分管壁基膜有Ⅳ型胶原和LN的分布[8]。附睾ECM成份在其生长繁殖过程中有重要调控的作用。笔者的前期研究表明，高原型成年藏绵羊附睾各部分中PAS(Periodic acid-schiff stain，PAS)的反应强弱与附睾上皮分泌功能的变化密切相关，Col Ⅳ参与基膜的物质转运；HSPG与血-附睾屏障构成相关；LN与基膜的形成及其他ECM的合成和分泌有关[9]。高原地区小尾寒羊对青藏高原的环境有很强的适应性，能在气候寒冷、牧草生长期短、空气稀薄的恶劣环境下生活并繁育后代，附睾细胞外基质在高原地区小尾寒羊的生殖繁育过程中起到重要的调控作用。在此基础上，本研究采用组织化学方法对高原地区小尾寒羊附睾组织中ECM相关纤维(胶原纤维、网状纤维)、糖(糖原、酸性粘多糖及中性粘多糖)以及蛋白(LN、Col Ⅳ和HSPG)等成份的分布特征进行比较观察，分析高原低氧环境对小尾寒羊的精子成熟环境的影响，为进一步研究高寒地区小尾寒羊生殖发育特点提供参考资料。

1　材料与方法

1.1试验动物

健康2岁成年小尾寒羊附睾样品采自青海牧民养殖场，共5对，通过睾丸摘除手术采集。以4%中性福尔马林溶液固定3 d后备用。

1.2主要试剂

Ⅳ型胶原兔抗鼠多克隆抗体(bs-4595R)、LN兔抗鼠多克隆抗体(bs-8561R)和HSPG兔抗鼠多克隆抗体(bs-5072R)购自北京博奥森生物技术有限公司；免疫组化染色试剂盒(sp-0023)购自北京博奥森生物技术有限公司；DAB显色试剂盒(ZLI-9018)和(ZLI-9502)购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3普通切片制备

新鲜组织样品称重测量，记录解剖数据，4%中性福尔马林溶液固定，常规石蜡包埋，连续切片(片厚 5 μm)，相邻切片分为8套，其中3套分别用于Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)、LN和HSPG免疫组织化学SP法染色，剩5套用于组织化学Masson’s、Gomori’s、PAS、AB-PAS (Alcian blue-periodic acid schiff，pH=2.5)染色及阴性对照。

1.4组织化学染色法

切片脱水、脱蜡后分别进行Masson’s、Gomori’s、PAS和AB-PAS染色，之后继续进行脱水、透明，然后封片、观察、拍照。Masson’s三色(亮绿)染色，胶原纤维呈现蓝绿色，细胞核呈现灰黑或灰蓝色，红细胞呈红色；Gomori’s银染显示网状纤维为灰色，苏木素-伊红复染后呈棕红色;PAS染色显示糖原及其他PAS反应阳性物质均呈阳性，细胞核呈蓝色；AB-PAS(pH=2.5)染色显示酸性黏液物质呈蓝色，中性黏液物质呈红色，混合呈紫红色，细胞核呈浅蓝色。

1.5免疫组织化学SP法检测Col Ⅳ、LN和HSPG的分布

免疫组织化学SP法进行染色；切片脱水、脱蜡后，进行高温高压抗原修复，后加一抗，一抗用Col Ⅳ、LN和HSPG多克隆抗体，Col Ⅳ按1∶400比例稀释，LN和HSPG均按1∶600比例稀释，阴性对照组用0.01 mol·L-1的PBS代替一抗(Col Ⅳ、LN和HSPG)，4 ℃过夜，孵育、清洗、显色、脱水、透明、封片。然后显微镜进行观察、照相。

1.6图像分析

光镜下观察免疫组织化学切片随机选取5张，每组切片中在400倍显微镜(Olympus)下进行拍照，每张切片照片采集5个视野，用Image-Pro Plus6.0软件进行图像分析，测定阳性反应物的平均光密度，并用SPSS 21.0统计软件对数据进行单因素方差分析，结果用“平均值±标准差”表示，P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著。

2　结　果

2.1高原地区小尾寒羊附睾纤维及糖成份的组织化学特征

光镜下，高原地区小尾寒羊附睾各管腔上皮可见4～5层上皮细胞，管周肌样细胞胞核呈长梭形围绕各附睾管固有膜外周，大量成熟精子分布于腔面(图1F)；间质结缔组织较发达，富含胶原纤维(图1A～C)、网状纤维和血管(图1D～F)，且附睾头和附睾体间质胶原纤维(图1A，B)和网状纤维(图1D，E)较少，附睾尾间质胶原纤维(图1C)和网状纤维(图1F)明显增多；附睾头和附睾体管腔内纤毛较长(图1D，B)，而附睾尾管腔内纤毛较短，变为刷状缘结构清晰(图1F)。PAS染色显示各附睾管上皮固有膜、间质毛细血管壁、基细胞、管周肌样细胞及腔面精子紫红色糖原阳性条带明显(图1G～I)，附睾头上皮游离缘和附睾尾刷状缘呈强阳性(图1G，I)，且附睾头和附睾尾PAS阳性反应强于附睾体(图1G～I)。AB-PAS染色显示各部分细胞核为蓝色，附睾各部分毛细血管内皮细胞、柱状上皮下固有膜、基细胞及管周肌样细胞呈深紫红色(图1J～L)，附睾头和附睾尾上皮游离缘和腔面精子呈深紫红色(图1J，L)，但附睾头、体、尾AB-PAS阳性强弱差异较小(图1J～L)。

2.2高原地区小尾寒羊附睾组织中Col Ⅳ、LN和HSPG的分布

高原地区小尾寒羊附睾细胞外基质相关蛋白免疫组织化学染色显示，Col Ⅳ在附睾头上皮基细胞、血管内皮细胞和腔面精子呈强阳性表达，其他上皮细胞和纤毛呈中等阳性表达，管周肌样细胞呈弱阳性表达(图2A)；在附睾体和附睾尾管腔上皮细胞、纤毛和腔面精子呈强阳性表达，血管内皮细胞和管周肌样细胞呈弱阳性表达(图2B，C)，但附睾头阳性表达率高于附睾体，附睾体阳性表达率高于附睾尾(表1)。HSPG在附睾头上皮基细胞和血管内皮细胞呈强阳性表达，其他上皮细胞和纤毛呈中等阳性表达，管周肌样细胞呈弱阳性表达(图2D)；在附睾体和附睾尾管腔上皮细胞和纤毛呈强阳性表达，血管内皮细胞、管周肌样细胞和腔面精子呈弱阳性表达(图2E，F)，但附睾头的阳性表达率高于附睾体和附睾尾，附睾体和附睾尾的阳性表达率差异较小(表1)。LN在附睾头上皮基细胞、血管内皮细胞和腔面精子呈强阳性表达，其他上皮细胞、纤毛和管周肌样细胞成中等阳性表达(图2G)；在附睾体和附睾尾管腔上皮细胞、纤毛和血管内皮细胞呈强阳性表达，腔面精子和管周肌样细胞呈弱阳性表达(图2H，I)，但附睾头的阳性表达率高于附睾体和附睾尾，附睾体和附睾尾的阳性表达率差异较小(表1)。各蛋白阴性对照无表达(图2J～L)。

表1高原地区小尾寒羊附睾Col Ⅳ、LN和HSPG的平均光密度

Table 1The average optical density of Col Ⅳ、LN and HSPG in epididymitis of Small-tail Han sheep in plateau

分类ClassificationColⅣ平均光密度TheaverageopticaldensityofColⅣHSPG平均光密度TheaverageopticaldensityofHSPGLN平均光密度TheaverageopticaldensityofLN附睾头Caput0.0449±0.0027*0.0392±0.0036a0.0378±0.0033a附睾体Corpus0.0401±0.0022*0.0328±0.0043a0.0322±0.0051a附睾尾Cauda0.0282±0.0025a0.0345±0.0037*0.0337±0.0048*

同行标有*表示差异显著(P<0.05)；标有相同字母的无明显差异(P>0.05)

In the column， *means significant difference between groups(P<0.05)，same letters means no significant difference between groups(P>0.05)

BC.基细胞；CA.纤毛；CF.胶原纤维；ED.附睾管；G.糖原；MC.主细胞；PC.管周肌样细胞；RF.网状纤维；SD.输精管；SZ.精子；TED.睾丸输出管；V.血管。A、D、G、J.成年高原地区小尾寒羊睾丸输出管；B、E、H、K.成年高原地区小尾寒羊附睾管；C、F、I、L.成年高原地区小尾寒羊输精管BC.Basal cells; CA.Cilia; CF. Collagen fiber; ED.Epididymal duct; G.Glycogen; MC.Main cells; PC.Peritubular myoid cells; RF.Reticular fiber; SD.Seminiferous duct; SZ.Spermatozoon; TED.Testicular efferent duct; V.Vessel.A,D,G,J.The structure of testicular efferent duct in Small-tail Han sheep in plateau. Masson’s staining. B,E,H,K.The structure of epididymal duct in Small-tail Han sheep in plateau. Masson’s staining. C,F,I,L.The structure of seminiferous duct in Small-tail Han sheep in plateau. Masson’s staining. 图1　高原地区小尾寒羊附睾Masson’s、Gomori’s、PAS和AB-PAS组织化学染色(bar=20 μm)Fig.1　The histochemistry of Masson’s,Gomori’s,PAS and AB-PAS staining in epididymis of Small-tail Han sheep in plateau (bar=20 μm)

统计结果表明，LN、HSPG和Col Ⅳ在附睾体和附睾尾的表达规律相一致。Col Ⅳ在附睾头和附睾体组织中表达最强，HSPG次之，LN表达较弱，HSPG和LN的阳性表达差异不显著(表1，P>0.05)；而HSPG在附睾尾组织中表达最强，LN次之，Col Ⅳ表达较弱，HSPG和LN的阳性表达差异不显著(表1，P>0.05)。

BC.基细胞；CA.纤毛；ED.附睾管；MC.主细胞；PC.管周肌样细胞；SD.输精管；SZ.精子；TED.睾丸输出管；V.血管。A、D、G.Col IV、HSPG和LN在成年高原地区小尾寒羊睾丸输出管中的表达；B、E、H.Col IV、HSPG和LN在成年高原地区小尾寒羊附睾管中的表达；C、F、I.Col IV在成年高原地区小尾寒羊输精管中的表达；J、K、L.阴性对照BC.Basal cells; CA.Cilia; ED.Epididymal duct; MC.Main cells; PC.Peritubular myoid cells; SD.Seminiferous duct; SZ.Spermatozoon; TED.Testicular efferent duct; V.Vessel.A,D,G.The expresstion of Col IV,HSPG and LN in testicular efferent duct of Small-tail Han sheep in plateau;B,E,H.The expresstion of Col IV,HSPG and LN in epididymal duct of Small-tail Han sheep in plateau; C,F,I.The expresstion of Col IV,HSPG and LN in seminiferous duct of Small-tail Han sheep in plateau. J,K,L.Negative control图2　高原地区小尾寒羊附睾的免疫组织化学染色 (bar=20 μm)Fig.2　The immunohistochemical staining in epididymidis of Small-tail Han sheep in plateau (bar=20 μm)

Col Ⅳ表达的平均光密度值在高原地区成年小尾寒羊附睾头和附睾体具有统计学显著差异(与HSPG和LN组相比，P<0.05)；HSPG和LN表达的平均光密度值在高原地区成年小尾寒羊附睾尾具有统计学显著差异(与Col Ⅳ组相比，P<0.05)The average optical density of Col Ⅳ expression was significantly higher in caput and corpus of Small-tail Han sheep in plateau(compared with counterparts of HSPG and LN)；The average optical density of LN and HSPG expression was significantly higher in cauda of Small-tail Han sheep in plateau(compared with counterparts of Col Ⅳ)图3　Col Ⅳ、LN和HSPG在高原地区成年小尾寒羊附睾表达平均光密度检测柱形图Fig.3　Column graph of average optical density of Col Ⅳ，LN and HSPG in epididymitis of Small-tail Han sheep in plateau

3　讨　论

附睾ECM各成份以纤维、蛋白多糖及基质等各种形式参与附睾管的构建。多数器官中Ⅰ型胶原纤维和Ⅲ型胶原纤维并存，以Ⅰ型胶原纤维为主[10]。小鼠附睾管外围为Ⅰ型胶原纤维，其含量从附睾头至附睾尾逐渐增加[11]。D.R.Keene等[12]发现Ⅰ型胶原纤维有较强的伸展性。本研究中小尾寒羊附睾各管腔外围胶原纤维丰富，但附睾尾胶原纤维的分布较附睾头和附睾体明显增多，可能与Ⅰ型胶原纤维良好的伸展性促进附睾尾的收缩功能运送精子到输精管有关。网状纤维位于疏松结缔组织，由Ⅲ型胶原蛋白形成，并常伴其他类型的胶原、蛋白多糖和糖蛋白[13]。随着年龄的增长，网状纤维可以转化为胶原纤维[14]，F.A.Fakoya等[15]发现大鼠睾丸间质中的网状纤维可以为精子形成过程中精子从生精小管上皮到腔面的迁移提供结构支持。本研究中小尾寒羊附睾各管腔外围网状纤维较丰富，但附睾尾网状纤维的分布较附睾头和附睾体明显增多，提示网状纤维的分布规律与胶原纤维一致，附睾间质网状纤维可能也为精子的成熟提供结构支持，附睾尾间质网状纤维较多可能与其较强的收缩能力促进精子运输有关。

附睾为精子的贮存和成熟提供了适宜的微环境，具有分泌、吸收、收缩和浓缩等功能。P.M.Wassarman等[16]认为精子与卵子的特异性识别是依赖于精子表面的糖蛋白和透明带糖蛋白互补而实现的，精子表面的中性和酸性粘多糖参与细胞之间的识别及信息交流。本研究中小尾寒羊各附睾管PAS和AB-PAS染色腔面精子可见较强阳性反应带，提示精子表面的中性和酸性粘多糖在附睾管中已经具备，为进一步精子与卵子的特异性识别奠定物质基础。B.C.Moore等[17]发现美国短吻鳄睾丸组织PAS和AB-PAS反应显示基膜和管周肌样细胞呈阳性。本研究中小尾寒羊各附睾管PAS和AB-PAS反应显示基膜和管周肌样细胞均有紫红色阳性反应条带，提示基膜和管周肌样细胞与中性和酸性粘多糖的合成有关。R.E.Glegg等[18]发现网状纤维较丰富的区域，其PAS反应也较强；与本研究结果一致，小尾寒羊附睾尾间质网状纤维分布较多，PAS反应也较强。亮细胞主要存在于大鼠附睾的尾部，是PAS阳性细胞分泌周期中的一种状态[19]；大白鼠附睾头、体、尾PAS反应阳性逐渐增强是因为亮细胞的数量逐渐增多导致[20]。本研究中PAS染色显示各附睾管上皮固有膜、间质毛细血管壁、基细胞、管周肌样细胞及腔面精子紫红色糖原阳性条带明显，附睾头上皮游离缘和附睾尾刷状缘呈强阳性，且附睾头和附睾尾PAS阳性反应强于附睾体，提示PAS反应的强弱和亮细胞的数量有直接关系，附睾尾PAS反应较强与亮细胞数量较多及网状纤维含量较多有关。附睾上皮PAS的反应强弱与附睾上皮分泌功能的变化密切相关，附睾尾分泌功能较强，而附睾头PAS反应较强，提示附睾头亮细胞数目较多，分泌功能增强。AB-PAS阳性反应的糖原、糖蛋白和蛋白多糖典型存在于结缔组织黏液以及基膜中[17]。本研究中AB-PAS染色显示各部分细胞核为蓝色，附睾各部分毛细血管内皮细胞、柱状上皮下固有膜、基细胞及管周肌样细胞呈深紫红色，附睾头和附睾尾上皮游离缘和腔面精子呈深紫红色，但附睾头、体、尾阳性反应强弱差异较小，提示各附睾管上皮下固有膜和间质区域富含酸性粘多糖。本研究中小尾寒羊附睾头、体、尾AB-PAS阳性反应强弱差异较小，而附睾头和附睾尾PAS阳性反应强于附睾体，提示附睾头、体、尾各管腔酸性粘多糖的含量差异较小，附睾头和附睾尾管腔中性粘多糖含量较附睾体多，而附睾头和附睾尾的分泌能力强于附睾体，附睾上皮的分泌能力对中性及酸性粘多糖含量的影响有待于进一步的探究。

Col Ⅳ是基膜的主要胶原成分，形成结构网架，广泛存在于各种基膜中，使其具有韧性和通透性，对基质和细胞间物质交换具有筛板作用[21]。Col Ⅳ主要在上皮或内皮细胞合成，是上皮细胞或内皮细胞等生长的依附和支架，不仅有促进血管生成的作用，还可以抑制血管生成[22]。本研究中Col Ⅳ在小尾寒羊附睾头上皮基细胞和血管内皮细胞呈强阳性表达；在附睾体和附睾尾管腔基膜呈强阳性表达，血管内皮细胞呈弱阳性表达，提示Col Ⅳ对基膜及基膜上基细胞有一定的调节作用，与血管的生成也有密切的关系。在哺乳动物的附睾中，各附睾管基膜是ECM的特殊型，可以作为细胞迁移的附着物和选择性滤过屏障[23]，而胶原是良好的细胞粘附基质，在组织中含量丰富[24]。本研究中Col Ⅳ在小尾寒羊各附睾管基膜均为强阳性表达，提示Col Ⅳ参与基膜和细胞间的物质转运。研究表明牦牛犊牛睾丸管周肌样细胞与Ⅳ型胶原的合成和分泌有关[25]。本研究中小尾寒羊各附睾管管周肌样细胞均为弱阳性表达，提示附睾各段管周肌样细胞分泌Col Ⅳ的能力较弱。

HSPG是基膜中普遍存在的重要成分，具有细胞黏附、聚集及构建组织的作用，能结合基膜的LN和Col Ⅳ等多种成分，并与ECM的多样性密切相关[26]。免疫组化研究证实，HSPG在成熟且高度分化的上皮细胞不表达[27]。本研究中HSPG在小尾寒羊附睾头上皮基细胞呈强阳性表达，其他上皮细胞呈中等阳性表达；而在附睾体和附睾尾管腔上皮细胞呈强阳性表达，表明HSPG在附睾头除基细胞外的其他上皮细胞表达较弱可能与附睾头除基细胞外其他上皮细胞的分化程度有关。HSPG可作为血管生长因子的储存库[28]。HSPG大量表达于血管内皮细胞表面，在血管形成过程中，内皮细胞表面HSPG可作为某些血管生长因子和抑制因子的辅助受体发挥调节作用[29]。本研究中HSPG在小尾寒羊附睾头间质血管呈强阳性表达，而在附睾体和附睾尾间质血管呈弱阳性表达，提示HSPG在血管发育过程中有重要的调节作用。本研究中小尾寒羊各附睾管管周肌样细胞均为弱阳性表达，提示小尾寒羊附睾各段管周肌样细胞分泌HSPG的能力较弱。

LN属于糖蛋白，为基膜的主要成分之一，具有促进细胞黏附、调节细胞形态、分化及细胞移动等作用[24]。研究表明LN由位于基膜上的上皮细胞合成[30]，本研究中LN在小尾寒羊各附睾管基膜均为强阳性表达，提示LN和基膜的形成密切相关。睾丸生精小管基膜的基本成分如LN是PAS特殊反应阳性糖蛋白[17]，因此，本研究中各附睾管基膜基本成分LN可能与PAS合成及分泌相关。LN由血管内皮细胞分泌[31]。本研究中小尾寒羊各附睾间质血管内皮细胞均为强阳性表达，LN对血管生长有重要作用。牦牛犊牛睾丸管周肌样细胞可能与LN的合成和分泌有关[25]。本研究中小尾寒羊附睾头管周肌样细胞呈中等阳性表达，而附睾体和附睾尾各管周肌样细胞呈弱阳性表达，提示附睾头管周肌样细胞分泌LN的能力强于附睾体和附睾尾。HSPG可以和Ⅳ型胶原和LN构成基膜[32]，LN通过巢蛋白与Ⅳ型胶原形成稳定的基膜[33]。本研究中小尾寒羊各附睾管管腔LN与HSPG和Col Ⅳ的表达规律基本一致，提示LN的形成与HSPG和Col Ⅳ有关。

4　结　论

高原地区小尾寒羊附睾尾间质胶原纤维和网状纤维的分布较附睾头和附睾体多，附睾各部分中PAS的反应强弱与附睾上皮分泌功能的变化密切相关，附睾头和附睾尾输精管的分泌功能增强。附睾头上皮基细胞Col Ⅳ、HSPG和LN分泌增加，且Col Ⅳ、HSPG和LN与血管的调节作用密切相关。

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(编辑程金华)

The Distribution of Extracellular Matrix Proteins in Small-tail Han Sheep Epididymis in Plateau

LI Cong，YUAN Li-gang*，ZHANG Yong

(CollegeofVeterinaryMedicine，GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou730070，China)

To explore the distribution of extracellular matrix proteins in epididymis of Small-tail Han sheep in plateau.The histochemistry of Masson’s，Gomori’s，PAS and AB-PAS(pH=2.5)staining were used to study the microstructure of epididymis in 5 pairs of Small-tail Han sheep in plateau，and the distribution of the laminin (LN)，type Ⅳ collagen (Col Ⅳ) and heparan sulfate glycoprotein (HSPG) were identified by SP immunohistochemical method.The observations made with the light microscope showed that the epithelium of epididymal ducts were columnar ciliated and the distribution of the collagen and reticular fibers in the cauda were more abundant than the caput and the corpus，although the PAS positive reaction in the caput and the cauda were stronger than the corpus，but the AB-PAS positive reaction without significant differences in the caput，the corpus and the cauda.Immunohistochemical analysis appeared that Col Ⅳ was strongly presented in the caput and the corpus，the relative expression of HSPG was lower than Col Ⅳ，and LN was expressed weakly，the distribution of LN and HSPG without statistical differences in epididymis (P>0.05)，but in the cauda，it was showed that HSPG was strongly presented，the Col Ⅳ was lower than LN and HSPG，and the distribution of LN and HSPG without statistical differences in epididymis (P>0.05).Taken together，the collagen and reticular fibers of the epididymis cauda were more abundant than the caput and corpus in Small-tail Han sheep from plateau，and the positive of the PAS reaction was companied with the changes of the secretion function of epithelium.The secretion of Col Ⅳ，HSPG and LN in the basal cells of caput epithelium were increased than the other parts，and the Col Ⅳ，HSPG and LN might work together closely for the regulation of the vessel.

Small-tail Han sheep in plateau；epididymis；type Ⅳ collagen；laminin；heparan sulfate proteoglycan；histochemistry

10.11843/j.issn.0366-6964.2016.08.006

2016-03-02

甘肃省财政厅基本科研业务项目(2012)；国家自然科学基金项目(31160488)；甘肃省自然科学研究基金(145RJZA223)

李聪(1991-)，女，青海大通人，硕士，主要从事动物发育生物学研究,E-mail:393803599@qq.com

袁莉刚, 教授，E-mail：yuanyuanxi2011@hotmail.com

S852.16+2

A

0366-6964(2016)08-1565-09