妊娠母犬不同时期生殖系统超声声像图变化

王绿林，赫亚歌，高新玉，辛春燕，高培滨，邓立新*

(1.河南农业大学牧医工程学院，郑州 450002；2.河南省项城市秣陵镇人民政府，项城 466232)

妊娠母犬不同时期生殖系统超声声像图变化

王绿林1，赫亚歌1，高新玉2，辛春燕1，高培滨1，邓立新1*

(1.河南农业大学牧医工程学院，郑州 450002；2.河南省项城市秣陵镇人民政府，项城 466232)

为探索不同生殖时期母犬生殖系统的超声声像图变化特征，以8只标准试验比格犬为对象，利用彩色多普勒超声诊断仪，在二维灰阶、彩色多普勒超声模式下分别对子宫、卵巢、胎儿进行实时跟踪监测，将获取的声像图进行总结分析，同时对母犬在不同时期进行阴道涂片镜检。结果表明，超声条件下可见发情期母犬卵巢、子宫体积明显逐渐增大，边界清晰，单个卵泡成像明显，子宫腔内可见呈“细线”状的子宫乳，妊娠后23 d超声即可探查到孕囊；彩色多普勒超声下，发情期卵巢内血流明显丰富，后腔静脉和腹主动脉分出的卵巢动静脉相互缠绕，呈红蓝条带相互交织状态进入卵巢；妊娠后子宫血流逐渐丰富，血管内径及血流信号强度迅速增大。超声条件下可实时监测卵巢、子宫及胚胎在不同时期的大小、血流分布变化及其声像图规律，为母犬生殖系统发育过程多普勒超声声像图研究及临床检查提供相应参考依据。

多普勒超声；B超；母犬；生殖系统；声像图

作为宠物，犬备受人们喜爱；作为工作犬，主要用于军队、武警、公安等领域，为人们的生活提供安全保障，功劳显著。随着人们生活水平的提高和社会发展变化，宠物犬的饲养量不断增大，社会对工作犬的需求也成倍增加[1]。犬的生产繁殖逐渐引起人们的重视，同时犬科动物生产繁殖对于改进犬科珍贵物种及保护濒临犬种十分重要[2]，目前在犬的繁殖过程中，确定母犬最佳配种时间，必须用具体排卵期前指标来鉴定。这些指标主要涉及在卵巢血流变化，卵泡/黄体数和排卵期前指标声像图回声特性。母犬发情时间的准确判断极为重要，必须根据母犬所处的不同发情时期选择合适的配种时间。因此，临床上找到一种简单、高效的鉴定母犬发情周期的方法显得尤为迫切。为了更加精确的判定母犬最佳配种时间，需要一种实用便于操作的方法。

超声检查是一种方便、快捷、无损伤的检查方法，深受临床医师的喜爱，彩色多普勒超声成像技术可对感兴趣区的血流情况进行监测，可用于犬生殖系统的评估研究。彩色多普勒超声对犬生殖系统评估的研究已有十几年，但此类研究报道较少，国内更是一片空白，而国外一些文献对该领域仅仅做了部分纵向研究，如：L.H.Bergeron等[3]和K.Köster等[4]对发情周期中卵巢的血流灌注情况进行了研究；P.R.Batista等[5]和Cda.C.Barbosa等[6]对围产期及子宫复旧过程中子宫动脉血流变化情况进行了研究；P.Di Salvo等[7]和 P.G.Blanco等[8]对正常妊娠母犬子宫动脉及胎儿的一些大血管的血液动力学进行了研究。目前，该领域研究内容较为分散，缺少全面完整的研究，并不能对生殖系统进行系统的评估。

本试验利用多普勒超声检查方法对母犬的卵巢血流变化、卵泡、卵巢黄体等回声特性进行实时追踪监测，从发情前期开始每天进行检查，直到黄体生成素到达峰值4 d以后，并对所获得的声像图进行分析。用二维灰阶超声进行卵巢黄体数量及其回声特性分析，用彩色多普勒对卵巢血流特性进行分析，观察卵巢子宫的形态变化。确定发情各期与声像图的对应关系，为通过超声检查以确定最佳配种时间方法的应用，建立一套科学合理的参考标准。同时本试验还对胎儿的心血管系统发育进行了实时超声监测，为监测胎儿是否健康发育提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物

标准试验比格犬8只(陕西西安迪乐普生物科技公司提供)。雌性，1.5岁，平均体重11 kg，健康状态良好。

1.2 试验仪器

祥生Q6VET型彩色多普勒超声诊断仪(配有：微凸变频探头，中心频率5.0 MHz，线阵探头，中心频率7.5MHz)；显微镜，载玻片，瑞氏染液；宠物专用保定架；兽用耦合剂。

1.3 动物准备与超声检查

每次试验前对动物进行饥饿处理12 h。将试验比格犬上界剑状软骨部，右侧至第11肋骨末端，左侧至最后肋骨部，后界为耻骨联合部进行备毛处理。按照各器官的空间解剖位置及相互之间位置关系，在相应区域进行扫查。分别获取卵巢、子宫及胚胎的不同切面声像图，将声像图和数据进行保存分析，根据声像图及生殖生理特征，总结不同阶段声像图的规律。整个检查周期包括：乏情期、发情前期、发情期和妊娠后每隔一周进行检查直至恢复正常。

采集各个阶段犬阴道分泌物，常规瑞氏吉姆萨染色法染色，显微镜下观察拍照记录。

1.4 数据统计与分析

2 结 果

2.1 卵巢声像图变化

探头扫查右肾头部稍偏向腹侧即可见右侧卵巢，分别对右侧卵巢进行不同生殖时期声像图扫查分析。在B型超声条件下：发情间期，卵巢内整体呈现均匀中等强度回声，边界清晰，并可见黄体存在，黄体与卵巢的边界清晰可辨；发情前期，卵巢内可见清晰卵泡，卵泡边界清晰，回声强度较高，卵泡内为液性暗区，卵巢体积较发情间期增大；发情后期，卵巢内卵泡体积变大，卵泡边界清晰，同时有红体产生，卵巢整体体积变大；妊娠第7天，卵巢内出现黄体，同时有腔黄体和红体并存，并且三者之间界限清晰分明；妊娠第14天，卵巢内可见黄体，红体和有腔黄体消失，卵巢的体积较发情期小，与发情间期接近。

在彩色多普勒超声条件下：发情间期，卵巢内血流不明显，但可见卵巢下方的卵巢动静脉；发情前期，可见卵巢内部有血流存在，分布在各个卵泡之间，同时卵巢下方的卵巢动静脉搏动清晰可见；发情后期，卵巢内血流丰富，血管环绕卵泡分布，并呈交织缠绕状态；妊娠第14天，卵巢内的血流减少，与发情期相同的量程等条件下，血流图像不可见，只能观察到卵巢后方的动静脉。具体见图1～10。

图1 乏情期右侧卵巢二维声像图Fig.1 Diestrus，dimensional ultrasound image of right ovary

图2 乏情期右侧卵巢彩色多普勒声像图Fig.2 Diestrus，dimensional Doppler ultrasound image of right ovary

图3 发情前期右侧卵巢二维声像图Fig.3 Proestrus，dimensional ultrasound image of right ovary

图4 发情前期右侧卵巢多普勒声像图Fig.4 Proestrus，Doppler ultrasound image of right ovary

图5 发情期右侧卵巢二维声像图Fig.5 Metestrous，dimensional ultrasound image of right ovary

图6 发情期右侧卵巢多普勒声像图Fig.6 Metestrous，Doppler ultrasound image of right ovary

图7 右侧卵巢配种7 d二维声像图Fig.7 Right ovary dimensional ultrasound image at breeding 7 d

图8 右侧卵巢配种7 d多普勒声像图Fig.8 Right ovary Doppler ultrasound images at breeding 7 d

图9 配种14 d右侧卵巢二维声像图Fig.9 Breeding 14 d，two-dimensional ultrasound images of right ovary

图10 配种14 d右侧卵巢多普勒声像图Fig.10 Breeding 14 d，Doppler ultrasound image of right ovary

2.2 卵巢变化

不同生殖时期的卵巢进行实时监测，测量左右两侧卵巢大小与生殖时期的相关规律，具体数据见表1。

2.3 子宫声像图变化

定位于耻骨前缘，在膀胱直肠三角区找到子宫，分别进行横切面与纵切面扫查，观察发情间期、发情期、妊娠第16、23天时母犬子宫二维灰阶超声声像图特征。结果显示：发情前期子宫二维声像图回声无明显变化，呈低回声强度匀质结构，如图11；发情期时，子宫变化不明显，但可观察到子宫开始增粗，子宫壁开始变厚，如图12；妊娠第16天，子宫体积变大，子宫腔扩张内部开始出现条带状液性暗区，子宫壁开始增厚，如图13；妊娠第23天(犬一般20 d左右能检查到孕囊)，检查发现子宫内有圆形，边界清晰，回声较强声像图，如图14。妊娠第29天时可观察到胎心搏动，胎儿雏形已基本形成。

Table 1 The size of ovary at the genesial cycle(±s)mm

图11 发情间期子宫横切二维声像图Fig.11 Diestrus，uterine cross-section of the two-dimensional ultrasound image

图12 发情期子宫横切二维声像图Fig.12 Estrus，uterine cross-section of the two-dimensional ultrasound image

图13 配种16 d子宫矢状切二维声像图Fig.13 Breeding 16 d，uterine longitudinal section of two-dimensional ultrasound image

图14 配种23 d子宫矢状切二维声像图Fig.14 Breeding 23 d，uterine longitudinal section of two-dimensional ultrasound image

2.4 母犬不同生殖时期阴道涂片

根据超声检查结果，对处于不同生殖时期的母犬进行阴道涂片，染色镜检，观察不同阶段阴道涂片中脱落的有核鳞状上皮细胞比例判定发情时期，对超声检查结果进行分析。通过显微镜观察显示：乏情期阴道涂片可见视野内几乎全部为未角化的有核上皮细胞，如图15；发情前期阴道涂片可见视野内角化的无核上皮细胞增多，约占60%，如图16；发情期阴道涂片可见视野内角化的无核上皮细胞大量增加，占90%以上，如图17；发情后期阴道涂片可见视野内未角化的有核上皮细胞增多，视野内几乎不可见角化的无核上皮细胞，如图18。

大量未角化的有核上皮细胞A great quantity of nuclei epithelial cells aren’t keratotic图15 乏情期阴道涂片(400×) GSFig.15 Diestrus smear of vagina

角化的无核上皮细胞增多Keratotic non-nuclei epithelial cells were increased图16 发情前期阴道涂片(400×) GSFig.16 Proestrus smear of vagina

大量角化的无核上皮细胞A great quantity of non-nuclei keratotic epithelial cells 图17 发情期阴道涂片(400×) GSFig.17 Estrus smear of vagina

2.5 不同时期孕囊变化特征

母犬妊娠后逐渐开始出现孕囊，并且孕囊及胚胎变化呈现一定的规律。具体数据见表2。

大量未角化的有核上皮细胞A great quantity of nuclei epithelial cells aren’t keratotic>

图18 发情后期阴道涂片(400×) GSFig.18 Late estrus smear of vagina

3 讨 论

在过去的近半个世纪，超声医学取得突飞猛进的发展，随着基础理论研究的深入，仪器性能和检查方法的改进，超声图像的分辨力和清晰度都得到了极大地提高[9]，同时，彩色多普勒技术的应用，可以显示器官的血液供应状态及组织器官的发育过程[10]。近年来，超声诊断技术在临床上应用正在飞速发展，其中B型超声、彩色多普勒超声应用最为普遍。临床上有B超对肾组织损伤检查[11]、腹腔疾病的诊断[12]以及彩色多普勒对肝动脉检查[13]、超声引导下穿刺技术[14]的应用等，超声影像技术正逐步成为兽医临床上不可或缺的一种重要检查方法。生殖系统疾病是犬常见的多发病，特别雌性生殖系统疾病正极大地威胁着动物的生命安全。超声影像技术以其独特的优势在生殖系统检查和疾病诊断方面发挥着巨大的作用，如犬隐睾的超声诊断[15]、犬子宫蓄脓的影像学诊断[16]等，超声技术已在宠物临床上得到了广泛地应用。

表2 妊娠期胚胎大小与超声所见

Table 2 The size and contents of ultrasound of embryo in the gestational period

妊娠时间/dPregnancydays孕囊大小(x-±s)/mmPregnancysacsize(x-±s)超声所见Ultrasoundfeatures232．28±0．37可探查到早期孕囊出现2613．38±1．58出现较强回声的胚胎细胞2921．35±1．66可见初具胎儿形态的组织3328．05±1．08胎儿头部和体部已经分化3835．02±1．14已经出现完整的胎儿形态4655．60±1．02胎儿的内脏器官和肢体完全出现5580．58±1．25骨骼已经钙化有明显声影，胎儿已经具备出生的基本条件

雌性生殖系统主要包括卵巢和子宫。犬卵巢是产生卵母细胞的器官，同时能分泌雌激素，以促进其生殖器官和乳腺的发育，发情期卵巢内可见卵泡，由于卵泡细胞的增生、分化及透明带的生长，卵泡明显增大[17]，子宫在胎儿着床及后期的生长发育有着不可替代的作用。为了提高雌性犬生殖效率，本试验通过对卵巢、子宫及妊娠后胎儿的实时超声监测，找出不同生殖时期雌性生殖器官的影像学变化。试验中可见超声条件下卵巢形态、大小及卵泡大小的变化，经过对不同生殖时期卵泡大小的实时监测及对比分析，发现卵巢最小时直径9 mm，最大时直径25 mm，大小随着发情周期的变化而变化。卵泡最早在发情前期能够监测到，最小直径2.5 mm，最大直径7.9 mm，发情后期伴有红体和黄体的出现。发情间期可以清晰看到黄体的存在，发情前期黄体逐渐消失并被卵泡取代，通过监测发现母犬卵巢内卵泡个数一般在5～9，并且卵泡大小不一，同侧卵巢内相同时期卵泡大小相差不超过3 mm。彩色多普勒超声条件下，发情间期卵巢内几乎不可见血流，发情前期卵泡开始出现，卵巢内血流出现并且较为丰富，围绕卵泡分布。同时，可看到由后腔静脉和腹主动脉分出的卵巢动静脉相互缠绕，彩色多普勒条件下呈红蓝条带相互交织状态进入卵巢。超声条件下对子宫在各个发情时期形态变化监测时发现，子宫体大体位于最后一对乳房头侧，并且在距离其1 cm左右时开始分叉，形成左右子宫角。不同时期声像图中可见发情间期和发情前期的形态变化不大，进入发情后期，子宫形态开始发生变化，子宫壁增厚、回声增强及子宫腔形成可见有液性暗区。

试验发现超声监测比格犬孕囊最早可在配种后23 d，监测到孕囊第一周时间内其发育较快，体积不断增大，短短2 d内胚胎细胞已逐渐分化形成各功能区。胎儿发育早期变化较大，后期观察中变化较小，胎儿在发育过程中体积变大、骨骼逐渐钙化，形成声影。彩色多普勒条件下，妊娠早期子宫内无明显变化，不能探查到血管，仅能观察到沿子宫前进的子宫动静脉，直至孕囊出现以后，子宫内血流逐渐丰富。当孕囊内出现胚胎细胞时，可见细胞团与囊壁接触区有小血管出现，随着胚胎的不断发育，心肌细胞开始出现并能监测到搏动频率在200 次·min-1以上。胚胎发育38 d时，可见其基本的血管网络已经形成，随着胎儿发育，次级血管开始出现。妊娠55 d时，胎儿的血管网络已基本发育完善，不再有明显变化。

超声影像技术对犬不同生殖时期的不同生殖器官实时监测，同时将获取的声像图与阴道涂片进行对比观察分析，使得通过超声技术鉴定雌性犬发情状态的方法更加成熟可靠。超声技术有着无损伤、实时性、携带方便和操作简单[18]的优越性，未来宠物临床上运用超声技术鉴定发情周期必将不断得到推广应用。

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(编辑 白永平)

The Ultrasound Image Change of Pregnant Bitches of the Reproductive System at Different Time

WANG Lü-lin1，HE Ya-ge1，GAO Xin-yu2，XIN Chun-yan1，GAO Pei-bin1，DENG Li-xin1*

(1.CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China；2.ThePeople’sGovernmentofMolingTownofXiangchengcity，HenanProvince，Xiangcheng466232，China)

The aim of the present study was to explore the ultrasound image features of pregnant bitches of the reproductive system at different times.In our study，8 standard test Beagles are selected，and the color Doppler instrument was used.The uterus，ovaries and fetus were observed by real-time tracking and monitoring under the two-dimensional gray-scale and color Doppler ultrasound mode.The ultrasound images we got were summarized and analyzed，meanwhile the bitches testing by vaginal smear microscopy.The result of ultrasound image showed that the ovaries and uterus’s volume increased significantly，the line was clear，the follicle was obviously，and the womb milk like ‘thin’ in uterine cavity was visible during the heat period.We tested the fetus at the 23 d of gestation by ultrasound.The blood stream of ovaries was obviously and plentiful，the arteriovenous fistula of ovary from the back cavity vein and the abdominal aorta twisted together as red and blue strap interlace，and flow into the ovary during the estrus by color Doppler ultrasound machine；the blood of uterine was more plentiful gradually after pregnancy，internal diameter and signal intensity of blood vessel rising quickly.The size，blood stream distribution can change during physiology period，and real-time monitored regular pattern of ultrasound image of the ovary，uterus and embryo by ultrasound will provide reference information for bitches reproductive system development and clinical examination.

Doppler ultrasound；B model ultrasound；bitches；reproductive system；ultrasound image

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.08.023

2014-11-04

王绿林(1988- )，河南项城人，硕士生，主要从事动物超声影像学研究，E-mail：wll6666666@163.com

*通信作者：邓立新，副教授，E-mail：lx8198@sohu.com

S854.7

A

0366-6964(2015)08-1455-08