2010—2012年中国部分地区鸡传染性支气管炎流行病学调查

尤永君，张国中，刘月焕，王 友，梁 武，刘兴彩，沈 元

(1.中国农业大学动物医学院，北京 100193；2.天津瑞普生物技术股份有限公司，天津 300381；3.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193)

2010—2012年中国部分地区鸡传染性支气管炎流行病学调查

尤永君1，2，张国中1*，刘月焕3，王 友2，梁 武2，刘兴彩2，沈 元2

(1.中国农业大学动物医学院，北京 100193；2.天津瑞普生物技术股份有限公司，天津 300381；3.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193)

鸡传染性支气管炎(IB)已经成为严重影响中国养禽业正常发展的传染性疾病，为了解中国主要养殖区域鸡传染性支气管炎流行情况，瑞普生物诊断研究服务中心在2010—2012年间从全国采集的3 132份发病鸡群肺和气管样本，利用RT-PCR及基因测序方法鉴定出410份IBV阳性样品，通过从时间、地域、发病特征、种群类型等方面进行了统计研究。结果发现：1)3年间IBV总检出率为13.1%，其中26.7%的IBV阳性样品为多重病原感染，以AIV-H9+IBV和NDV+IBV居多；2)白羽肉鸡的IBV检出率最高，为13.6%；3)IBV发病有较明显的季节性，从当年的11月份到次年的5月份，是IB的高发时段；4)IBV对感染鸡群造成的临床症状以肾大和呼吸道症状为主，其次是产蛋下降和腺胃炎；5)白羽肉鸡3～5周IBV检出率最高，商品蛋鸡IBV检出高峰有两个时段为3～5周及25～30周。通过本次全国范围的IBV流行病学调查，为我国有效防控传染性气管炎提供了科学依据，对制定防控鸡传染性支气管炎有效策略具有重要意义。

流行病学调查；传染性支气管炎；混合感染；白羽肉鸡；商品蛋鸡

鸡传染性支气管炎(IB)是由冠状病毒科、冠状病毒属中的传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性、高度接触性传染性呼吸道疾病[1]。病毒主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统，呈现气管啰音、咳嗽、打喷嚏、蛋鸡产蛋量下降或停产、蛋品质低劣(如产薄壳蛋和畸形蛋，蛋壳颜色变淡)，并可引起肾炎、尿结石，甚至死亡。病毒在消化道持续存在，并伴随粪便长期排泄[2]。自1931年在美国北达科他州发生，目前IB已在加拿大、英国、法国、德国、荷兰、俄罗斯、日本、朝鲜、韩国、印度等50个国家及地区发生和流行。中国于20世纪50年代就有IB的报道，并在1980年由郑福荣等自杭州暴发疫情的病鸡中首次分离到1株IBV，随后上海、广州、北京、广西、新疆、山东、黑龙江、陕西及河北等省市也相继有分离到IBV的报道[3-6]。

事实上，IBV现已遍及各养鸡地区，特别是近年来肾型IB(nephrotropic IB，NIB)的广泛流行，给养鸡业带来巨大的经济损失。有资料显示，IB的病型呈现多样化，不同地区、不同季节、不同品种、不同日龄的鸡易感性不同，且死亡率区别很大，重者病死率高达40%～60%[7]。特别是不同血清型的存在，既干扰了致病性病原的分离(不能区别疫苗免疫和野外感染)，也给利用血清学方法进行诊断带来诸多困难。因此，调查不同地区，不同季节，不同类型、品种，不同日龄鸡群鸡传染性支气管炎流行现状，对制定预防鸡传染性支气管炎策略意义重大。

本研究对2010—2012年河北、山东等18个省(市)规模化鸡场的传染性支气管炎病毒检出情况进行分析，了解3年来中国不同地区、不同季节、不同类型和品种、不同日龄的鸡群IBV感染和发病特点。对目前中国规模化鸡场制定IBV的防控策略，以及对鸡群IBV感染快速诊断具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品 标准毒株M41株，由瑞普生物制品研究中心提供。病料及样品背景：2010—2012年由瑞普生物诊断研究服务中心(以下简称诊断中心)从河北、山东、河南等18个省、市的蛋种鸡、肉种鸡和商品肉鸡场中采集和客户送检的3 132份气管和肺组织。所有采样鸡群都进行过至少2次传染性支气管炎疫苗免疫，同时做了严格的背景登记(包括日龄、品种、发病率、死亡率、发病时间、免疫及用药等)。1.1.2 其他生物材料和试剂 SPF鸡胚，购自北京梅里亚-维通利华实验动物技术有限公司，孵化至10日龄备用；引物由上海生工生物工程有限公司合成；Trizol RNA提取试剂、rTaq酶、M-MLV鼠源反转录酶等购自天根生物技术有限公司；其他材料均属于国产分析纯试剂。

1.1.3 主要仪器 PCR扩增仪，购自T6美国Bio-RAD公司；DYY-8C型电泳仪，购自北京六一仪器设备厂；T2A型凝胶成像系统，购自美国Bio-RAD公司。

1.2 方法1.2.1 病毒的分离与鉴定 按照中华人民共和国国家标准(GB/T 23197-2008)的方法，对采集的病料进行处理，经过RT-PCR、鸡胚接种、HI/HA以及基因测序等方法[8]分离传染性支气管炎病毒，同时根据基因测序方法和免疫背景排除疫苗毒株的干扰。1.2.2 流行病学数据统计 根据采样单或病料送检单，按照采集病料的临床背景，根据数学方法进行分离率的统计。

2 结 果

2.1 三年间IBV的总体感染情况

从2010—2012年中国18个省、市采集了3 132份临床发病样品，共检出病毒性感染疾病1 505份。其中传染性支气管炎病毒(IBV)共检出410份，检出率为13.1%，单纯IBV检出301份，检出率为9.6%，混合感染检出109份，检出率为3.5%。传染性支气管炎混合感染以IB+H9 AIV和IB+ND的二重感染为主，检出率占比分别为1.4%和1.2%，同时也存在IB+ND+H9 AIV的三重感染，占比为0.7%。详情见表1。

2.2 不同年份IBV的感染情况

对2010—2012年不同年份检出的410份IBV检出数据分析，三年平均检出率为13.1%，2010年、2011年、2012年IBV检出阳性率分别为8.1%、18.1%和15.5%。表明IBV已经成为威胁中国家禽养殖主要的疾病之一。详情见表2。

表2 IBV、NDV和AIV(H9)三种主要疾病2010—2012年检出情况统计表

Table 2 Diagnosis results of IBV，NDV and AIV(H9) between 2010 and 2012

年份Years疾病Disease单纯感染Singleinfection混合感染Mixedinfection合计Total检出数Thedetectednumber检出率/%Thedetectionrate检出数Thedetectednumber检出率/%Thedetectionrate检出数Thedetectednumber检出率/%Thedetectionrate占阳性样本比例/%Thepropo-rtionofvirusinthepositivesamplesND19715.8302.422718.235.72010H917414.0262.120016.131.5IB917.3100.81018.115.9ND7111.4325.110316.529.32011H98413.4325.111618.633.0IB8313.3304.811318.132.1ND957.5745.916913.432.62012H9645.1705.613410.625.9IB12710.1695.519615.537.8ND36311.61364.349915.933.2合计TotalH932210.31284.145014.429.9IB3019.61093.541013.127.2

2.3 三年间IBV流行的地域分析

经统计，2010—2012年自18个省(直辖市)的410个IBV阳性组织病料，各省份IBV检出率差别相对较大，IBV检出率排在前5位的省份分别是天津、河南、江苏、辽宁和山东，检出率分别为19.30%、17.80%、15.60%、15.50%和14.90%，这些地区也正是中国肉鸡养殖的主要地区，说明养殖密集省份感染率较高，同时可能与病料的采集方式和运输距离有一定关系。详情见表3。

2.4 三年间不同月份IBV流行情况分析

将2010—2012年IBV检出数绘制成折线图(图1)。从图可以看出，每年11月份到下一年5月份，是IBV病毒检出率较高时段，表明传染性支气管炎主要发生在气温波动较大季节。

2.5 三年间IBV的临床流行症状分析

对分离到的410份IBV阳性样品采样背景进行分析，其中有189份临床表现为腹泻，剖检特征为肾大，占比46.10%；有145份临床表现呼吸道症状，剖检支气管堵塞、有干酪样渗出物，占比35.37%；有49份表现产蛋下降、蛋壳品质下降、输卵管囊肿或输卵管萎缩，占比11.95%；有27份表现食欲减退、轻度腹泻、肠炎，占比6.59%(表4)。可以推测传染性支气管炎在临床上主要以肾大和呼吸道症状为主。

2.6 不同品种鸡群IB流行情况

采集的3 132份组织样品中，2 502份来源于肉鸡，630份来源于产蛋鸡。肉鸡的IBV平均分离率为13.5%，产蛋鸡的平均分离率为11.3%。从分离率上看，各品种间差异较小，以白羽肉鸡分离率最高，为13.6%；白羽肉种鸡分离率最低，为9.4%。说明鸡各品种对IBV都易感，肉鸡的感染率略大于蛋鸡，可能与蛋鸡比肉鸡有较多传支疫苗免疫有关。不同品种鸡群的详细数据详见表5。

表3 2010-2012三年间全国18个省(直辖市)IBV检出情况

Table 3 Diagnosis results of IBV in 18 provinces of China between 2010 and 2012

省份ProvinceIB阳性数Positivenumber样品总数ThetotalnumberofsamplesIB检出率/%Thedetectionrate天津Tianjin168319.30北京Beijing8879.20河北Hebei6964110.80山西Shanxi131339.80浙江Zhejiang21711.80江苏Jiangsu3824315.60山东Shandong14496714.90安徽Anhui101486.80福建Fujian1214.80辽宁Liaoning2314815.50黑龙江Heilongjiang2355.70吉林Jilin86911.60湖南Hunan65411.10河南Henan4827017.80湖北Hubei71046.70四川Sichuan32313.00陕西Shaanxi43411.80广东Guangdong53813.20合计Total410313213.10

图1 2010—2012年间各月份IBV检出情况Fig.1 Monthly diagnosis results of IBV between 2010 and 2012

表4 三年间IBV临床流行症状

Table 4 Prevalence and clinical symptoms between 2010 and 2012

主要临床症状与解剖特点Themainclinicalsymptomsandanatomiccharacteristics病例数Thenumberofcases比例/%Rate腹泻、肾大18946.10呼吸道症状、支气管栓塞、有干酪样渗出物14535.37产蛋下降、蛋壳品质下降、输卵管囊肿或输卵管萎缩4911.95食欲减退、轻度腹泻、腺胃炎276.59

表5 不同品种鸡群IBV流行情况

Table 5 The prevalence of IBV in different varieties of chickens

类型Type品种Breed送检数Submissionnumber阳性数Positivenumber检出率/%Thedetectionrate肉用型Meat-Type白羽肉鸡212228913.6黄羽肉鸡2353113.2817肉鸡1451913.1肉鸡小计250233913.5蛋用型Egg-Type商品蛋鸡3844712.2蛋种鸡67710.4白羽肉种160159.4黄羽肉种19210.5蛋鸡小计6307111.3合计Total313241013.1

2.7 不同品种鸡群不同年龄段IBV感染情况分析

通过对不同类型不同品种鸡不同周龄检出的IBV阳性数量、阳性数在本类型品种占比进行统计分析发现：肉用型鸡群3、4、5三个周龄最易感染，阳性检出数占比分别为24.48%、48.97%、16.34%。在三个类型的肉鸡中，白羽肉鸡比其他类型肉鸡更易感染，阳性数占比为82.25%，这可能与白羽肉鸡生长速度较快，抗病力差有一定关系。在产蛋鸡群中，商品蛋鸡的检出数量多高于种鸡，阳性数占比为66.20%，这可能与商品蛋鸡饲养管理不如种鸡饲养管理精细有关。商品蛋鸡存在两个感染高峰阶段，育雏期的3-5周龄和产蛋期的25-30周龄，3-5周龄合计占比23.95%，25-30周龄占比15.49%。详情见表6、表7。

表6 不同品种肉鸡不同周龄IBV检出情况及阳性比例

Table 6 IBV prevalence and positive rates in different broiler breed at different weeks of age

周龄Weeksofage项目Item白羽肉鸡Whitefeatherbroiler黄羽肉鸡Yellowfeatherbroiler817肉鸡“817”Broiler小计Total1周阳性1438占比0.29%1.18%0.88%2.36%2周阳性53412占比1.47%0.88%1.18%3.54%3周阳性709483占比20.65%2.65%1.18%24.48%4周阳性15196166占比44.54%2.65%1.77%48.97%5周阳性614267占比14.88%0.98%0.49%16.34%6周阳性1203占比0.29%0.59%0.00%0.88%合计合计2893119339占比85.25%9.14%5.60%100.00%

表7 产蛋鸡不同周龄IBV检出情况及阳性比例

Table 7 IBV prevalence and positive rates in different layer chicken at different weeks of age

周龄Weeksofage项目Item商品蛋鸡Commerciallayer蛋种鸡Eggbreedchicken白羽肉种鸡Whitefeatherbroilerbreeder黄羽肉种鸡Yellowfeatherbroilerbreeder小计Total1周阳性00000占比000002周阳性00000占比000003周阳性50005占比7.04%0.00%0.00%0.00%5.63%4周阳性323210占比4.23%2.82%4.23%2.82%15.49%5周阳性942015占比12.68%5.63%2.82%0.00%21.13%6周阳性20002占比2.82%0.00%0.00%0.00%2.82%7-12周阳性10001占比1.41%0.00%0.00%0.00%1.41%13-18周阳性30003占比4.23%0.00%0.00%0.00%4.23%19-24周阳性51006占比7.04%1.41%0.00%0.00%8.45%25-30周阳性1107018占比15.49%0.00%9.86%0.00%25.35%31-36周阳性10001占比1.41%0.00%0.00%0.00%1.41%37-42周阳性703010占比9.86%0.00%4.23%0.00%14.08%合计合计47715271占比66.20%9.86%21.13%2.82%

3 讨 论

对从2010到2012年来自于中国18个省、市(直辖市)的3 132份临床发病鸡群肺和气管组织样品进行病毒的分离，有1 505份检测到致病性病毒，其中有410份检测到IBV。众所周知IBV和NDV由于有活疫苗的使用，单纯的RT-PCR检测并不能区分疫苗毒和野毒，但是疫苗毒和野毒在基因序列上是有差异的，对于所有的PCR阳性病料最终都是通过基因测序的方法将疫苗毒排除，仅保留野毒感染病料为阳性病料[9]。

3年间IBV总体感染率为13.1%；在检出有病毒感染病料中，有IBV感染病料占27.2%。这与徐守振等对山东胶东半岛2008—2012年 IBV的流行病学调查结果大体一致[10]。IBV检出率2010年为8.1%，2011年为18.1%，2012年为15.5%。在所检测的13种感染禽类病毒中，IBV检出率2010年排在第三位，2011年排在第二位，到2012年为第一位，这说明中国传染性支气管炎流行越来越严重，并且已经成为影响中国家禽养殖业的重要的病毒性疾病之一。另一方面IBV混合感染检出率2010年为0.8%，2011年为4.8%，2013年为5.5%，呈现逐年增加的趋势。这说明中国的养殖大环境正在进一步恶化，发病情况也越来越复杂。另外免疫抑制病的影响也加大了疫病的防控难度，但是与免疫抑制病所不同的是，母源传播的概率更大一些，这与父母代种鸡是否净化有关。另外引用山东省白羽肉鸡免疫抑制病病原学与血清学调查显示，对山东省某规模化商品肉鸡场不同日龄商品肉鸡进行REV和CAV的病原学和血清学动态调查，137份病料中REV感染率为2.19%，CAV的感染率为1.46%[11]。这些现实存在的问题对今后科学有效地防控IB提出了更大的挑战。

就全国区域来看，IBV阳性检出率最高的5个省(直辖市)为天津、河南、江苏、辽宁和山东，这几个区域正是中国养殖规模和养殖密度最大的区域。这也说明了随着养殖量的不断增加，相应的生物安全、饲养管理和疫病防控也必须同时跟上，否则，疾病会越来越严重，造成的损失也会越来越大。

通过对3年来不同月份IBV检出数量综合分析发现，每年11月份到次年的5月份IBV阳性率最高，表明IBV感染主要发生在季节交换时节。这可能与这几个月份昼夜温差较大，鸡舍小环境对温度的控制滞后，通风管理不能灵活转换有很大关系。另一方面与IBV不耐热，耐寒也有一定关系。温暖条件下IBV在外界仅能存活约10 d，而在寒冷的冬季则可存活至少56 d[1]。提示应加强对季节交替时节的鸡舍通风管理，使鸡舍小气候的温度相对稳定。既要保证鸡舍通风量足够，又要保证鸡群不受风冷的应激。

对检出的IBV阳性样品发病背景进行统计。不同的临床表现，IBV检出数量有所差别。其中表现腹泻、肾大的占比46.10%；表现呼吸道症状、支气管堵塞、有干酪样渗出物的占比35.37%；表现产蛋下降、蛋壳品质下降、输卵管囊肿或输卵管萎缩的占比11.95%；表现食欲减退、轻度腹泻、腺胃炎的占比6.59%。众所周知，鸡传染性支气管炎可以造成多种临床症状，如肾型、呼吸型、生殖型和肠型等。瑞普生物诊断研究中心曾对1日龄、14日龄和28日龄的SPF进行IBV回归试验，发现发病鸡临床病理变化主要以肾病变和呼吸道病变为主，这也与调查结果相吻合。由此可以看出，当前IBV主要是引起肾和呼吸系统病变，其次引起生殖系统和消化系统病变。

通过对不同品种IBV检出情况分析发现，肉鸡群检出率为13.5%，产蛋鸡群检出率11.3%。说明肉鸡比产蛋鸡相对更易感IBV。这可能与产蛋鸡生长速度相对正常，疫苗免疫次数较多，抗病力和抗体维持时间较长有很大关系。疫苗对疫病的防控意义不可忽视。

通过对不同周龄鸡群的检出率统计发现，肉鸡群IBV感染主要集中在3、4、5周龄，检出数阳性占比分别为24.48%、48.97%和16.34%，说明IB主要发生在育雏阶段。肉鸡生长时间较短，大部分只做两次活苗，加上母源抗体的存在，免疫空白期在3周左右，因此发病常出现在3-5周。而产蛋鸡在25-30周再出现一次检出高峰，主要表现为输卵管炎症，产蛋下降，蛋壳颜色变淡和蛋质量下降。这个时段正是产蛋高峰，是产蛋鸡群抵抗力最差的年龄段。这时主要能量和营养都用于产蛋，同时体重还要增加，因此抗应激能力较低，此时最易感染。所以产蛋鸡群在产蛋高峰时段务必做好生物安全和饲养管理，严防各种病原微生物的侵入，尽可能降低一切可能的应激，为鸡群安全的度过产蛋高峰提供一个良好环境。

总体来看，IB在鸡群常见的疫病中，检出比重均已达到或超过15%，而且所占比重较高的月份也多集中在温度变化较大的11月份—次年5月份。而且IBV与其他病毒混合感染的情况一直存在，且混合感染比例逐年增加。由此提示当前IBV已经成为威胁我国家禽健康的重要病毒性疾病之一，应当予以高度重视。

由于流行病学调查是一项复杂的，劳动量很大的工作，检测的样品不可避免受地域和养殖背景(养殖场生物安全、鸡群饲养管理以及免疫程序等)的限制。养殖量大的地区，距离检测实验室较近的地区，送检的和采集的样品就多一些，检出数量也相应会多一些。增加病料标本采集的区域范围，同时更加细致地分析采样鸡群的养殖背景，会使流行病学调查更全面更具有临床指导意义，分析出IB更多的流行特征，为科学有效地防控IB提供更多的科学数据。

由于IB临床表现复杂，血清型众多，不同血清型之间没有交叉保护，或者有很少的交叉保护。当前中国IBV分离率越来越高，这可能是因为中国目前临床应用IB疫苗毒株与大多数流行毒株血清型不匹配有关。目前中国流行的IBV优势基因型和血清型是什么样的现状，与常用疫苗毒株的分子生物学特征及血清型存在何种差异，还需要进一步研究。

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(编辑 白永平)

The Epidemiological Investigation of the Chicken Infectious Bronchitis in China between 2010 and 2012

YOU Yong-jun1，2，ZHANG Guo-zhong1*，LIU Yue-huan3，WANG You2， LIANG Wu2，LIU Xing-cai2，SHEN Yuan2

(1.CollegeofVeterinaryMedicine，ChinaAgriculturalUniversity，Beijing100193，China； 2.TianjinRingpuBio-technologyCo.，Ltd，Tianjin300381，China； 3.InstituteofAnimalSciences，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100193，China)

The chicken infectious bronchitis (IB) is a broad epidemic and infectious disease，and became a critical threat to poultry industry in China.To understand the current national IBV epidemiological situation，3 132 samples collected between 2010 and 2012 in China have been tested by the Ringpu Diagnosis Research and Service Center.There were 410 IBV positive results by RT-PCR method，then statistic and analyzed by cross-references，such as by time，geography，clinical symptoms and animal species etc.The results showed that 1) 13.1% of all samples were IBV positive，and 26.7% of positives were multiplex infection，especially with AIV-H9 or NDV.2) White feather broilers are more susceptible to the wild IBV，the isolation rate was 13.6%.3) The IBV incidence showed quite clear seasonal changes，especially between November and next May.4) The main clinical symptoms of IBV were kidney swelling and respiratory symptoms，also showed egg drop and proventriculitis sometimes.5) The 3-5 weeks old white feather broilers had the highest IBV isolation rate，but also the 3-5 and 25-30 weeks old period of layer chicken.Through the epidemiological investigation on IBV，it provides important scientific data and evidences which are important to develop effective strategies for prevention and controlling IB.

epidemiological investigation；chicken infectious bronchitis (IB)；multiplex infection；white feather broiler；layer chicken

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.02.013

2014-06-04

农业技术服务创新项目(农财发[2013]14号)

尤永君(1973-)，男，河北定兴人，博士生，主要从事畜禽疫病临床诊断、技术服务和开发研究，Tel：022-88958179，E-mail:yyjringpu@163.com

*通信作者：张国中，研究员，博士，主要从事禽类病毒及其分子生物学研究，E-mail：Zhanggz@cau.edu.cn

S852.659.6

A

0366-6964(2015)02-0264-09