滋肾镇肝饮调控miR-128治疗阴虚阳亢型老年高血压病的综合评价＊

吴玉英，刘文捷＊＊，洪顺忠，刘 彬，周艺军

（1. 福建医科大学附属泉州市第一医院老年科 泉州 362000；2. 广州医科大学附属第二医院中医科 广州 510260）

随着全球步入老龄化社会，老年高血压的发病率明显增加[1]，研究显示当前全世界约有26%的人患有高血压，60 岁-69 岁人群发病率高达50%以上，而70岁以上发病率则激增至75%[2]。目前我国高血压防治指南中针对老年高血压的治疗以西药为主，在临床实际应用中虽然能都达到降压效果，但对患者生活质量的提升作用较小。

近年来，已经证明微小核糖核酸（microRNA，miRs）在高血压引起的异常心脏重建过程中起重要作用。miRs是一种小的非编码核糖核酸（RNA），具有重要的转录后作用。已经证明miRs 调节心肌细胞的生长，分化和损伤，因此具有重要的临床价值。Witman等通过调节蝾螈中Islet1 的表达，确定微小核糖核酸-128（miR-128）在心肌细胞增殖中起重要作用[3]。Jie Yin 等发现与对照组相比，高血压患者外周血中miR-128 显著增高，此外，与II 期高血压患者相比，III/IV 期高血压患者外周血中miR-128 含量显著增高，并在体外实验中证实miR-128 可引起心肌细胞损伤[4]。研究证明，在高血压病的发生发展过程中，miR-128具有重要作用。

高血压病在中医学中没有明确的定义，根据其证候特征，高血压病属于“眩晕”、“头痛”、“心悸”范畴，为中医治疗的优势病种。“诸风掉眩，皆属于肝”，高血压的病因病机早在《素问⋅至真要大论》中即有论述。在现代中医学中，老年高血压病的病机为本虚标实，本虚以肾阴亏虚为主，标实以肝阳上亢，淤血阻滞。肾为五脏六腑之本，年老体虚，肾阴阳不足，肝肾同源，则肝阴失养，不能制阳，肝阳上亢，上扰清窍，疏泄失职，气机紊乱，影响血液的运行，可引起眩晕、头痛、心悸。滋肾镇肝饮为我科自拟方，药用牛膝、生地各25 g、白芍、天冬各20 g、天麻、钩藤、石决明、代赭石、龟板各15 g。牛膝、生地滋肾填阴，白芍、天冬滋水涵木，养阴柔肝，天麻、钩藤、石决明平肝熄风，龟板益阴潜阳，代赭石镇肝降逆。诸药合用，共成滋肾镇肝，潜阳熄风之效。

将中药与西药联合使用，一方面能够发挥出西药短期降压效果确切的优势，另一方面可通过中药缓解相应症状，实现标本兼治的目的。本研究通过分析对比150 例老年高血压病不同治疗方法的效果，观察自拟方滋肾镇肝饮联合西药的综合疗效，为中西药联合防治高血压病提供科学依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

将我院2016 年1 月-2017 年1 月收入的150 例辨证为阴虚阳亢的老年高血压患者随机分为接受西药治疗的对照组及接受中西药联合治疗的观察组各75例。对照组中男48 例、女27 例；年龄64 岁-78 岁，平均年龄（67.88 ± 1.12）岁；病程时间5 年- 12 年，平均病程（6.30 ± 1.04）年；症状表现：头晕47 例、心悸28例；高血压分级：轻度19 例、中度56 例。观察组中男50 例、女25 例；年龄65 岁- 78 岁，平均年龄（67.85 ±1.15）岁；病程时间5.5 年- 12 年，平均病程（6.37 ±1.05）年；症状表现：头晕49 例、心悸26 例；高血压分级：轻度20 例、中度55 例。纳入标准：（1）高血压的诊断符合中华医学会心血管病学分会高血压病学组编撰的《中国高血压防治指南》以及中华人民共和国国家中医药管理局颁发的《高血压中医健康管理技术规范》；（2）均为原发性高血压且年龄>60周岁者；（3）既往使用过降压药物但停用2 周或5 个半衰期以上者；（4）认知功能良好，能够配合临床治疗者。排除标准：（1）继发性高血压或合并全身多器官功能障碍者；（2）既往临床常用西药，如：血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素II 受体阻滞剂、利尿剂、钙离子拮抗剂降压药联合应用效果仍然不理想者；（3）过敏体质者；（4）老年高血压患者和（或）家属未签署知情同意书者。两组老年高血压患者一般资料无统计学差异。

1.2 方法

本次研究中两组老年高血压患者均持续用药治疗2个月，随后收集其临床相关数据并进行对比分析。对照组单纯口服西药予以治疗，方案如下：口服硝苯地平（济南利民制药有限责任公司，国药准字H20103358）1 片/次、2 次/天，同时口服卡托普利（上海华源安徽仁济制药有限公司，国药准字H34020359）12.5 mg/次、3 次/天，根据治疗需要于治疗后的1 周-2周增加至50 mg/次、3 次/天。观察组采取中西药联合治疗，西药治疗方案与对照组相一致。中药治疗方案如下：根据中医辨证施治原则予以治疗，中药治疗采用滋肾镇肝饮加减治疗，组方：牛膝、生地各25 g、白芍、天冬各20 g、天麻、钩藤、石决明、代赭石、龟板各15 g。上述方剂均水煎成剂并取汁500 ml分早晚两次温服。

1.3 观察指标

选取不良反应发生率、治疗前后24 小时动态血压、生活质量作为观察指标，其中不良反应包括恶心/呕吐、药物热、腹泻、皮疹；降压疗效包括收缩压、舒张压、24 h 平均收缩压、24 h 平均舒张压，采用便携式血压计测定；生活质量包括躯体功能（10 分-30 分）、躯体角色（4 分- 8 分）、肌体疼痛（2 分- 12 分）、总健康（5 分-25 分）、生命力（4 分-24 分）、社会功能（2 分-10 分）、情感角色（3 分- 6 分）、心理健康（5 分- 30分），采用生活质量评价量表（SF-36）测定，分数越高效果越佳[4]。

1.4 外周血miRs 提取

将患者的外周血在室温下以2,000×g离心10 min，取250 µL 上 清 液 与750µRNA 抽 提 试 剂LTRIzol（Invitrogen；Thermo Fisher Scienti c，Inc.，Waltham，MA，USA）充分混合，提取RNA。通过凝胶电泳检查RNA 质量，并使用分光光度计在260 和280 nm 下测量吸光度比。使用PolyA 拖尾方法逆转录miRs 互补脱氧核糖核酸（complementary DNA，cDNA)，并将cDNA储存在-20℃。miRs逆转录的程序遵循miScript SYBR Green PCR 试剂盒（Qiagen GmbH，Hilden，Germany）：6µlRNA 模板，2X miRs 反应缓冲液混合物10 µl，2 ml 0.1%牛血清白蛋白，2 ml反应缓冲液（miRs PrimeScript RT Enzyme Mixture）（Takara Biotechnology，Co.，Ltd.，Dalian，China）,用PolyA 引物在37℃下进行反应60 分钟，总反应混合物体积为20ml。

1.5 荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）

使 用SYBR Green Master Mix 试 剂 盒（Takara Biotechnology，Co.，Ltd）检测外周血中miR-128 的表达。反应系统包括10µLSYBRGreen Master Mix，0.5µL正向引物和0.5µL反向引物，1µLcDNA和8µLddH2O。每个样品有3个重复。循环条件如下：95℃15秒，然后在95℃下进行40 个循环15 秒和60℃30 秒。使用2-ΔΔCq 方法计算结果，并使用U6 作为内部参考。引物序列如下：U6，正向5′CTCGCTTCGGCA GCACA 3′和反 向5′AACGCTTCACGAATTTGCGT3′；miR-128，正向5′-UCACAGUGA ACCGGUCUCUUU-3′。

1.6 统计学方法

本次研究中所有数据均采用SPSS 22.0 统计软件进行处理，计量资料采用均数±标准差（±s）表示，以t 检验，计数资料采用率（%）表示，以χ2检验，P < 0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组不良反应发生率比较

两组老年高血压患者疗程结束后不良反应发生率分别为9.33%和10.67%，观察组不良反应发生率略高于对照组但组间差异无统计学意义（P > 0.05），见表1。

2.2 两组降压疗效比较

治疗前两组动态血压监测结果（收缩压、舒张压、24 h 平均收缩压、2 4h 平均舒张压）无明显差异，治疗后观察组各指标数值均优于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.3 两组miR-128水平对比

两组miR-128 水平相比较，治疗前观察组和对照组没有显著差异，治疗后观察组和对照组miR-128 水平均显著降低，与对照组相比，观察组miR-128 显著低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表3。

表1 两组不良反应发生率比较[n(%)]

2.4 两组生活质量比较

两组生活质量相比较，观察组8 个维度评分均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表4。

3 讨论

目前心血管疾病已经成为导致全球人口死亡的重要病因，我国每年死于高血压合并症的患者数量超过了150万人，并且有持续上升的趋势，我国高血压患者治疗后血压达标者不超过30%，因此控制血压已经成为一个亟待解决的问题[5]。随着人口寿命的增加，全球老年高血压发病率逐年提升，老年高血压病常常伴有多种合并症，如：冠状动脉粥样硬化性心脏病、糖尿病、心力衰竭、高血脂、肾脏病、周围动脉疾病、高血压脑卒中、左室肥厚等[6]。目前临床上以口服西药为主，但随着临床资料的日益丰富，老年高血压患者经过单纯西药长期治疗可导致体位性低血压、脑血流减少、糖代谢紊乱以及血尿酸增高等不良反应[7]。目前临床治疗高血压所使用的药物种类多样，诸如血管紧张素转化酶抑制剂、钙拮抗剂、血管紧张素II 受体阻滞剂、利尿剂、钙拮抗剂、β 受体阻滞剂等均有应用的报道[8]。本研究针对原发性老年高血压病的基础治疗方案采用硝苯地平为我国医学界推荐的治疗方案，并且在大量临床研究中均已经证实该方案疗效理想且不良反应发生率低，具备较高的安全性。

作为我国传统医学，中医将高血压的发病机理总结为肝肾阴虚、阴虚阳亢使得机体阴阳失去了平衡，气血逆乱之下使得久病入血，诱发淤血、痰浊所致[9-10]。在中医药悠久的历史中，高血压病的主要症状眩晕、头痛、心悸是中医治疗的优势病症之一，所以将中医药融入老年高血压患者的临床治疗工作中无疑能够取得更为理想的疗效。

表2 两组降压疗效比较（±s,mmHg）

表2 两组降压疗效比较（±s,mmHg）

组别对照组观察组t P 167.44±1.16 167.50±1.15 1.130 0.989 134.10±1.20 128.31±1.19 8.664 0.000 116.54±1.20 116.60±1.24 1.130 0.989 92.17±1.13 86.39±1.11 8.565 0.000 165.38±1.25 165.40±1.22 1.012 0.995 132.20±1.20 126.57±1.23 8.560 0.000 115.40±1.20 115.45±1.25 1.124 0.991 91.14±1.26 85.67±1.23 8.555 0.001收缩压治疗前治疗后舒张压治疗前治疗后24 h平均收缩压治疗前治疗后24 h平均舒张压治疗前治疗后

老年高血压多为阴虚阳亢型，病机为上实下虚，上实为肝阳上扰，肝风内动，下虚为肾阴亏虚，水不涵木，肝失所养从而出现肝阳上亢。滋肾镇肝饮为我科自拟方，本方以生地、牛膝为君，生地补肾填精，清热凉血，养阴生津，牛膝补肝肾，强筋骨，逐瘀通经，引血下行，二者合用可滋水涵木，滋肾养阴，白芍柔肝养血、天冬养阴清热为臣，辅佐生地、牛膝滋补肝阴清肝热，天麻、钩藤和石决明平肝熄风，龟板益阴潜阳，代赭石镇肝降逆。诸药合用，共成滋肾镇肝，潜阳熄风之效。

本次研究证实，采取单纯西药治疗的对照组出现药物热3 例、恶心/呕吐2 例、腹泻1 例、皮疹1 例，不良反应发生率9.33%，而同期接受中西药联合治疗的观察组药物热3 例、恶心/呕吐3 例、腹泻1 例、皮疹1 例，不良反应发生率10.67%，二者不良反应发生率之间没有统计学差异，相较于单纯西药治疗，中西药联合治疗并未因用药种类的增加而大幅提高不良反应发生率，具备较高的安全性，能够满足我国老年高血压患者日益高涨的临床治疗需求。

采取中药治疗高血压凸显出了以下几方面优势：其一，可显著改善老年高血压患者的症状。其二，降压作用更为缓和且稳压效果更为持久。相较于西药的快速降压，中药通过对患者主诉症状入手，标本兼治原则，从引发高血压的根源着手，所以其降压效果相对较为缓和，但稳压效果却更为持久，避免了血压的剧烈波动[11-12]。然而，中药治疗周期长，见效相对较慢，老年高血压患者依从性差，是中药治疗老年高血压的关键问题[13]。鉴于此，将中药与西药联合应用，能够充分发挥出二者各自具有的治疗优势，在原有基础上进一步提高降压疗效。本次研究中治疗后观察组动态血压监测结果（收缩压、舒张压、24 h平均收缩压、24 h平均舒张压）显著均低于对照组，证实了中西药联合降血压的有效性。

表3 两组外周血miR-128水平比较（±s）

表3 两组外周血miR-128水平比较（±s）

组别对照组观察组t P 5.041 17.91 0.0026 0.03 t P治疗前4.143±1.209 4.069±1.142 0.3933 0.6264治疗后2.919±1.723 1.091±0.918 8.228 0.000

微小RNA（miRs）是一种内源性非编码RNA，短链，单链RNA 通过与靶mRNA 结合并抑制翻译和促进转录物降解，进而在转录后水平发挥基因调控作用。miRs 还可通过调节各种转录途径来影响转录。miRs调节着人类约1/3的蛋白质编码基因。miRs调节对于适当的免疫细胞和内皮功能是必需的，并且这些基因的调节和表达的改变可导致内皮功能障碍。miRs 参与多种心脏功能，包括心肌细胞的细胞分化，增殖，凋亡和血管生成的介导[14]。miRs 谱也可作为心血管疾病的生物标志物，如外周动脉疾病[15]。

miR-128 是心脏发育的重要参与者，可调节心肌细胞的细胞周期，研究表明，在动物实验中过表达miR-128 抑制心肌细胞增殖和新生小鼠心脏再生，而抑制miR-128 则可促进出生后心肌细胞增殖窗口并增强成年小鼠心脏的再生能力[16]。在体外细胞实验中，miR-128 可促进心肌细胞损伤。在临床试验中miR-128与高血压的发生和进展密切相关。为了进一步探索滋肾镇肝饮的降压机理，我们采用检测外周血miR-128 水平来进行评价。而与单纯西药治疗相比，联合使用滋肾镇肝饮可显著降低老年高血压患者外周血miR-128 的表达水平，因此滋肾镇肝饮对血压的调控和心肌的保护均具有良好的作用。

西药治疗老年高血压病关注点在于控制患者血压的数值，而忽略了对患者生理、心理及社会功能的整体生活状态的影响[17]。高血压不仅是一种需要长期规范治疗的慢性病，更属于一种心身疾病[18]，因此对于老年高血压患者的治疗而言，其目标不仅仅是将血压控制在正常范围，还需要改善患者的不适症状，最大程度上提高其生活质量[19]。本次研究中采取中西药结合治疗的观察组老年高血压患者治疗完成后生活质量中躯体功能、躯体角色、躯体疼痛、总健康、生命力、社会功能、情感角色、心理健康8个维度评分均高于同期接受单纯西药治疗的对照组。因此相较于单纯西药治疗，采取中西药联合治疗能够提高其生活质量，使老年高血压患者获得更大的收益。

表4 两组生活质量比较（±s，分）

表4 两组生活质量比较（±s，分）

组别对照组（n = 75）观察组（n = 75）t P躯体功能24.79±1.11 27.58±1.12 8.289 0.032躯体角色5.33±0.17 7.11±0.15 8.188 0.035躯体疼痛9.29±0.41 11.33±0.42 8.293 0.031总健康20.29±1.11 23.20±1.14 8.300 0.030生命力19.92±1.04 22.70±1.00 8.290 0.032社会功能7.11±0.35 8.88±0.32 8.182 0.036情感角色4.19±0.11 5.35±0.10 8.129 0.039心理健康21.40±0.10 25.45±0.15 8.460 0.027

综上所述，本次研究通过对两组老年高血压患者不同治疗方案取得的降压疗效以及生活质量进行比较后证实，中西药联合治疗无疑能够取得更为理想的降压效果并大幅改善患者生活质量，且与单纯西药治疗相比较，不良反应发生率并未随着用药种类的增加而大幅提高，具备较高的安全性，值得在今后临床治疗工作中加以推广使用。