复方左炔诺孕酮片溶出度测定方法研究

胡楚楚　郑国钢（浙江省食品药品检验研究院，浙江 杭州310052）



复方左炔诺孕酮片溶出度测定方法研究

胡楚楚郑国钢
（浙江省食品药品检验研究院，浙江 杭州310052）

【摘要】目的：建立复方左炔诺孕酮片的溶出度测定方法。方法：采用桨法，以0.1%SDS的0.1 mol/L HCl溶液500 mL为溶剂，转速为75 r/min，30 min时取样。采用高效液相色谱法测定，C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）为固定相，以乙腈-水（60∶40）为流动相，流速为1.0 mL/min。左炔诺孕酮采用紫外检测器检测，波长为247 nm；炔雌醇采用荧光检测器检测，激发波长为285 nm，发射波长为 310 nm。结果：左炔诺孕酮在 0.059 88～0.359 3 μg/mL浓度范围内，线性关系良好；炔雌醇在0.012 19～ 0.073 15 μg/mL浓度范围内，线性关系良好。左炔诺孕酮平均回收率为99.2%，炔雌醇平均回收率为99.0%。结论：建立了测定复方左炔诺孕酮片溶出度的新方法，此法方法重复性好，所得结果稳定可靠，可有效控制药品的质量。

【关键词】高效液相色谱法；复方左炔诺孕酮片；溶出度

复方左炔诺孕酮片为左炔诺孕酮和炔雌醇组成的复方制剂，为第2代口服避孕药，目前在育龄妇女中应用广泛。已有文献表明复方中两种成分配伍，既增强避孕作用，又减少了药品不良反应［1］。该品种现行标准收录于《中国药典》（2010年版）二部［2］，溶出度是其质量控制的一个重要指标［3-4］。在溶出度方法中，溶出介质用到的聚山梨酯80溶液质量很不稳定，进而严重影响测定结果。在起草世界卫生组织（WHO）的《国际药典》过程中，根据专家意见，对溶出介质进行了重新考察，并对整个溶出度方法学进行了重新研究。本研究建立了测定复方左炔诺孕酮片溶出度的新方法，此方法重复性好，所得结果稳定可靠，可有效地控制药品的质量。

1　仪器与试药

RCZ-8B溶出试验仪（天津市天大天发科技有限公司）；高效液相色谱仪（岛津 LC-20AT液相色谱仪）；C18色谱柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm）（Agilent公司）；复方左炔诺孕酮片（2个厂家共6批样品）；左炔诺孕酮对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100076-201205）和炔雌醇对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100052-200609）；乙腈（色谱纯，Merck公司）。

2　方法与结果

2.1溶出介质的选择

取本品6片，采用桨法，转速75 r/min，取溶剂①：0.000 5%聚山梨酯 80溶液；溶剂②：0.1% SDS的0.1 mol/L HCl溶液，分别在5，10，20，30，45，60 min取样并及时补样，考察溶出曲线，溶出介质体积为 500 mL，依法操作，取溶液适量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2溶出度对照品溶液的制备

精密称取左炔诺孕酮对照品和炔雌醇对照品适量，加乙腈-溶出介质（1∶1）溶解并稀释至每1 mL含左炔诺孕酮0.3 μg和炔雌醇0.06 μg的溶液。

2.3溶出度样品测定方法

采用高效液相色谱法（HPLC）测定。C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）为固定相，以乙腈-水（60∶40）为流动相，流速为1.0 mL/min。左炔诺孕酮采用紫外检测器测定，检测波长为247 nm；炔雌醇采用荧光检测器测定，激发波长为285 nm，发射波长为310 nm。检测器串联。取上述供试品溶液和对照品溶液各100 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。

2.4溶出曲线测定结果

取一批样品（厂家A，批号：102A），分别在两种溶出介质中测定，以每个时间点6个溶出杯平均溶出量为总坐标，时间为横坐标，绘制溶出曲线。见图1～2。

图1　溶出曲线（0.1%SDS的0.1mol/L HCl为溶出介质，厂家A，批号102A）

图2　溶出曲线（0.000 5%聚山梨酯 80溶液）

从图中可以看到，采用0.1%SDS的0.1 mol/L HCl溶出介质，在30 min时左炔诺孕酮溶出量已有94%，炔雌醇溶出量达到最高；溶出曲线的趋势与采用《中国药典》方法规定的溶出介质（0.000 5%聚山梨酯 80溶液相比更加平稳上升，溶出量比《中国药典》方法略高，因此可以采用 0.1%SDS 的0.1 mol/L HCl溶出介质，可以避免使用质量均一性不好的聚山梨酯80溶液。溶出曲线上升平缓，对不同质量样品的区分度较好。取样时间设置在拐点后10 min，即30 min较合理。

采用0.1%SDS的0.1 mol/L HCl溶出介质，另取厂家B一批样品进行溶出曲线试验，溶出曲线上升平缓，趋势与图1较接近。样品在20 min时达到平台期。见图3。

图3　溶出曲线（0.1%SDS的0.1 mol/L HCl为溶出介质，厂家B，批号LEE100401）

2.5溶出度方法的确定

因此制定溶出度测定标准为“照溶出度测定法桨法，转速75 r/min，以0.1%SDS的0.1 mol/L HCl为溶出介质，体积为500 mL，依法操作，经30 min时，取溶液适量，滤过，取续滤液作为供试品溶液”。

3　溶出度方法学试验

3.1线性关系试验

分别精密称取左炔诺孕酮对照品和炔雌醇对照品，用乙腈溶解制成每1 mL含左炔诺孕酮0.748 5 mg和炔雌醇0.152 4 mg的溶液，作为储备对照品溶液，用乙腈-溶出介质（1∶1）稀释至不同浓度，照“2.3”方法测定。以面积（A）和对照品浓度（C）线性回归，左炔诺孕酮回归方程为：

A=305 263C＋ 589（r=0.999 5），

线性范围浓度为：0.05 988～ 0.3 593 μg/mL，线性关系良好。炔雌醇回归方程为：

A=33 855 264C＋ 1 458（r=0.999 2），

线性范围浓度为：0.01 219～0.07 315 μg/mL，线性关系良好。

3.2回收率试验

取“3.1”项下左炔诺孕酮对照品和炔雌醇储备对照品溶液稀释5倍，作为回收率对照品溶液，按处方量的80%，100%，120%加入回收率对照品溶液，并按处方加入辅料，按照“2.5”项下方法进行溶出度试验，取样后照“2.3”测定溶出度，计算回收率。测得左炔诺孕酮平均回收率为99.2%，炔雌醇平均回收率为99.0%。

3.3辅料干扰试验

处方量加入辅料，按照“2.5项”下方法进行溶出度试验，取样后照“2.3”测定，辅料不出峰，不干扰测定。

3.4样品测定

取两个厂家6批样品，测定。典型色谱图如图4～ 5，测定结果见表1。

图4　左炔诺孕酮溶出度图谱（UV 247 nm）

图5　炔雌醇溶出度图谱（FLD）

表1　样品溶出度测定结果

4　讨论

4.1溶剂的选择

在选择溶剂种类的时候，之所以采用 0.1% SDS的0.1 mol/L HCl溶液，是因为左炔诺孕酮和炔雌醇水溶性均较差，因此需要加入适当的表面活性剂助溶。且《国际药典》中左炔诺孕酮片的溶出介质是0.1%SDS的0.1 mol/L HCl溶液，为了保持系列品种方法的一致性，本文优先考察了SDS 的0.1 mol/L HCl溶液。比较选择了0.1%SDS和0.2%SDS两个浓度，由于采用0.2%SDS的0.1 mol/L HCl溶液时，在10 min就到达溶出平台，时间太快，因此最终确定了0.1%SDS的0.1 mol/L HCl溶液。

4.2进样量选择

液相色谱测定溶出度样品时，采用 20，50，100 μL进样，发现进样100 μL峰面积较大，且峰无展宽，因此进样量确定为100 μL。

4.3色谱柱选择

考察 Agilent、Dikma、菲罗门三个品牌的 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），均适用。

4.4药品选择

复方左炔诺孕酮片溶出度测定时，发现国产药品和原研药品溶出度无明显差异，一定程度上说明了国产药品质量的可靠性。

参考文献：

［1］ Endrikat J，Hite R，Bannemerschult R，et al.Multicenter，comparative study of cycle control，efficacy and tolerability of two low-dose oral contraceptives containing 20 μg ethinylestradiol/ 100 μg levonorgestrel and 20 μg ethinylestradiol/500 μg norethisterone［J］.Contraception，2001，64（1）：3-10.

［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：576-577.

［3］ 李芳，李瑛，刘建平，等.复方左炔诺孕酮片的体外溶出度比较［J］.药学服务与研究，2006，6（6）：417-420.

［4］施捷，车宝泉，周立春，等.左炔诺孕酮片溶出度方法研究及制剂学评价［J］.药物分析杂志，2013，33（4）：689-705.

doi：10.3969/j.issn.1672-5433.2016.02.005

收稿日期：（2015-09-02）

作者简介：胡楚楚，女，硕士，主管药师。研究方向：化学药品检测、药物标准制定。通讯作者E-mail:chuchuhu615@ 163.com

Research on Determination Method for Dissolution of Compound Levonorgestrel Tablets

Hu Chuchu，Zheng Guogang（Zhejiang Institute for Food and Drug Control，Zhejiang Hangzhou 310052，China）

ABSTRACTObjective:To develop a method for determination of the dissolution of compound levonorgestrel tablets.Methods:The 0.1 mol/L hydrochloric acid solution containing 0.1%sodium dodecyl sulfate was used as a solvent，and the paddle was rotated at a rate of 75 r/min for 30 min，afterwards samples were taken and determined by HPLC using C18colume（4.6 mm ×250 mm，5 μm）as a stationary phase and acetonitrile-water （60∶40）as a mobile phase.The flow rate was 1.0 mL/min.An ultraviolet spectrophotometer set at a wavelength of 247 nm was used for levonorgestrel analysis，and a spectrofluorometric detector was used for ethinylestradiol analysis at an excitation wavelength of 285 nm and an emission wavelength of 310 nm.Results:The linear ranges of levonorgestrel and ethinylestradiol concentrations were 0.059 88～0.359 3 and 0.012 19～ 0.073 15 μg/mL，while the average recovery rates were 99.2%and 99.0%，respectively.Conclusion:A novel method for determination of dissolution of compound levonorgestrel tablets was developed，which was reproducible，stable and reliable，and might be used for quality control of drugs.

KEY WORDSHPLC；Compound Levonorgestrel Tablets；Dissolution