H PLC测定止咳清肺口服液中橙皮苷的含量

张宇博　刘光斌

（酒钢医院药学部，甘肃嘉峪关735100）

H PLC测定止咳清肺口服液中橙皮苷的含量

张宇博刘光斌

（酒钢医院药学部，甘肃嘉峪关735100）

目的：建立止咳清肺口服液中橙皮苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法测定制剂中橙皮苷含量。色谱柱为Inertsil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸（22∶78，v/v），流速为1.0 mL/min，检测波长283 nm。结果：橙皮苷在0.8～9.6 μg（r=0.999 1）范围内有良好的线性关系，平均回收率分别为99.9%（RSD=0.80%，n=9）。结论：本方法可用于止咳清肺口服液的质量控制。

止咳清肺口服液；橙皮苷；高效液相色谱

止咳清肺口服液是在我院使用多年的经验处方基础上经多年的基础实验研究和临床应用研究，根据现代制剂工艺制备的医院制剂。主要由陈皮、茯苓、法半夏、桑叶、枇杷叶、川贝、前胡、甘草组成，具有化痰、止咳、宣肺之功效；用于痰邪阻滞、肺气不宣。依据《中药质量标准分析方法验证指导原则》［1］，采用高效液相色谱法（HPLC）测定制剂中陈皮的主要成分橙皮苷的含量，从而建立控制止咳清肺口服液质量的含量测定方法。

1　仪器与材料

Agilent 1100高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；CP225型十万分之一电子天平（德国赛多利斯公司）；Branson型超声波清洗器（中国上海）。

橙皮苷对照品（中国食品药品检定研究院提供，供含量测定用，批号：110721-200613）；乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Inertsil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（22∶78）；流速：1.0 mL/min；检测波长：283 nm；柱温：30℃。

2.2对照品溶液的制备

精密称取橙皮苷对照品0.004 0 g，置于5 mL容量瓶中，加甲醇定溶至刻度，配制成浓度为0.80 mg/mL的对照品溶液。

2.3供试品及阴性对照品溶液的制备

精密吸取本品2.0 mL于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，静置30 min，取上清液过0.45 μm滤膜，作为供试品溶液。

取按处方比例及工艺制备的缺陈皮样品，同供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。

2.4专属性试验

分别取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液，按上述色谱条件进样分析，HPLC色谱图见图1。结果表明，供试品溶液在该色谱条件下分离度良好，阴性无干扰，理论塔板数＞3 000。

2.5线性关系考察

分别精密吸取对照品溶液50，100，200，300，400，500，600 μL于1 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，依次吸取上述溶液20 μL，进行高效液相色谱分析，以峰面积（Y）为纵坐标，浓度（X）为横坐标，绘制标准曲线，

Y=328 056X-2.358 72×106（r=0.999 1）。

表明橙皮苷在0.8～9.6 μg范围内具有良好的线性关系。标准曲线图见图2。

图1　橙皮苷HPLC图

图2　橙皮苷标准曲线

2.6精密度试验

精密吸取稀释后的对照品溶液20 μL，重复进样，测得橙皮苷含量的RSD为0.86%（n=6）。结果见表1。

2.7稳定性试验

取供试品溶液于0，2，4，6，8，10，24 h，分别精密吸取20 μL注入液相色谱仪，测得橙皮苷含量的RSD为1.36%，结果见表2，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.8重复性试验

表1　精密度试验

表2　稳定性试验

取同一批号本品，精密吸取上清液2.0 mL，共6份，按“供试品溶液制备方法”制备，按上述色谱条件进行测定，测得橙皮苷的平均含量为0.784 mg/mL，RSD为1.68%（n=6）。结果见表3。

2.9加样回收率试验

精密量取1 mL已知含量的同一批供试品溶液，共9份，于10 mL容量瓶中，加入一定量的橙皮苷对照品溶液（橙皮苷浓度为0.303 3 mg/mL），按样品测定项下所述方法测定，计算回收率，平均回收率为99.9%，RSD为0.80%。结果见表4。

2.10样品含量测定

按“供试品溶液的制备”项下操作制备不同批号的样品溶液各3份，按上述色谱条件进行测定。

表3　重复性试验

测定结果见表5。

表4　加样回收率试验

表5　止咳清肺口服液中橙皮苷的含量（mg/mL）

3　讨论

止咳清肺口服液由二陈汤加味组成，方中君药陈皮的主要化学成分为橙皮苷，本研究采用HPLC建立了止咳清肺口服液中橙皮苷的含量测定法。

《中国药典》2010年版陈皮中橙皮苷测定流动相为甲醇-醋酸-水（35∶4∶61）［1］，供试品溶液的制备需要用索氏提取器回流提取，提取过程比较繁琐，容易造成操作误差。止咳清肺口服液中橙皮苷的测定在药典规定流动相条件下分离度不能达到要求，参照有关文献［2-3］，考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-磷酸、乙腈-醋酸系统，结果表明以乙腈-0.1%磷酸（22∶78）为流动相时，橙皮苷的分离度良好，峰形较理想。止咳清肺口服液经甲醇稀释、定容、微孔滤膜滤过后直接进样，无繁杂的提取过程，可减少操作过程中由于仪器、人员造成的系统误差。

本研究对建立的检测方法进行验证，专属性、重复性均良好，准确度也较高。对多批次样品进行了测定，发现建立的检测方法可很好地控制制剂的内在质量。本品3批样品经测定橙皮苷的平均含量为0.933 mg/mL，以该值的80%计，每毫升含陈皮以橙皮苷（C28H34O15）计，不得少于0.75 mg。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：附录ⅩⅤⅢA，176.

［2］崔永青，刘光斌，毛和平，等.高效液相色谱法测定和胃散中橙皮苷的含量［J］.航空航天医药，2010，21（4）：440-441.

［3］张捷，谭生建，王欢，等.高效液相色谱法测定小儿润肺止咳口服液中橙皮苷和黄芩苷的含量［J］.药物分析杂志，2010，30（8）：1451-1453.

Determination of Hesperidin Content in Zhike Qingfei Oral Liquid by HPLC

Zhang Yubo，Liu Guangbin
（Department of Pharmacy，Jiugang Hospital，Gansu Jiayuguan 735100，China）

Objective：To develop a method for determination of hesperidin content in zhike qingfei oral liquid. Methods：The hesperidin content in the oral liquid was determined by high performance liquid chromatography（HPLC）.Inertsil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）column was used with acetonitrile-0.1%acetic acid（22∶78，v/v）as the mobile phase.The flow rate was 1.0 ml/min while the detection wavelength was 283 nm.Results：The linear range of hesperidin concentration was 0.8～9.6 μg（r=0.999 1）.The mean recovery rate of hesperidin was 99.9%（RSD=0.80%，n=9）.Conclusion：The method may be used for the quality control of Zhike Qingfei oral liquid.

Zhike Qingfei Oral Liquid；Hesperidin；High Performance Liquid Chromatography（HPLC）

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.12.006

2015-07-24）

刘光斌，男，主任药师。研究方向：临床药学、医院药学。通讯作者E-mail：jgyylgb@sina.com