银马抗病毒颗粒抗炎解热作用及急性毒性实验研究

张俊明，周艳艳，郑国安，徐丽瑛，肖小华，丁琦

江西省医疗器械检测中心，江西省药物安全评价重点实验室，江西 南昌 330029

银马抗病毒颗粒处方来源于清朝吴瑭所著《温病条辨》中银翘马勃散方，主要由连翘、马勃、金银花、芦根、牛蒡子及射干六味中药组成，采用传统的温水浸出工艺精制，现代化的β-环糊精包埋及流化床技术制备，具有清热解毒、泄肺利咽等功效，主要用于湿温、湿热郁于上焦，喉阻咽痛、急性扁桃腺炎的治疗［1］。本研究对该颗粒剂的药效及急性毒性进行了实验，为该药临床研究提供参考。研究如下。

1 实验材料与仪器

1.1 药品

银马抗病毒颗粒，生产单位：江西省药物研究所，批号：010915；双黄连口服液，生产单位：黑龙江珍宝岛药业股份有限公司，批号：20 010303；阿司匹林，生产单位：南京白敬宇制药厂。

1.2 动物

昆明种清洁级小鼠，合格证：2003001 101171；SPF 级SD 大鼠，合格证：2003001 101248；新西兰兔，合格证：2003001101393，生产单位：上海斯莱克实验动物有限公司。

1.3 试剂

内毒素显色基质鲎试剂盒，生产单位：厦门市鲎试剂实验厂有限公司。

1.4 仪器

FA-NJA-N 电子天平，生产单位：上海民桥精密仪器有限公司。

2 实验方法与结果

2.1 方法

2.1.1 对小鼠二甲苯所致耳廓炎症的试验［2］取雄性小鼠50 只，体质量范围20 g～22 g，按体质量随机分成5 组，10 只/组，分别为阴性对照组（纯化水），供试品低、中、高剂量组（银马抗病毒颗粒9.1、18.2、36.5 g/kg）及阳性对照组（双黄连12 mL/kg）。每组灌胃给予相应药物，1 次/d，连续7 d，每次给药1 h 后，各组动物右侧耳廓均匀涂抹20 μL 二甲苯，左侧耳廓不处理作对照。0.5 h后处死动物，均沿耳基线剪下动物两耳，并用直径9 mm 打孔器于耳的同一部位打下耳片，用千分之一电子天平称重，计算耳部肿胀程度（左右耳片的重量之差），比较给药组与对照组的肿胀程度，计算药物对耳廓肿胀的抑制率，所得数据均进行组间t检验。

2.1.2 对大鼠琼脂肉芽肿的试验［3-4］取SD 雄性大鼠50 只，体质量范围180 g～220 g，随机分成5 组，10 只/组，分别为阴性对照组（纯化水），供试品低、中、高剂量组（银马抗病毒颗粒4.5、9.1、18.2 g/kg）及阳性对照组（双黄连6 mL/kg）。用乙醚浅麻醉，在无菌操作下，每只大鼠于背中线项下注射2 mL的2%琼脂溶液，各组灌胃给予相应药物，1 次/d，连续7 d，末次给药后24 h 处死动物，剥离肉芽肿，用千分之一电子天平称量肉芽肿湿重，所得数据进行组间t检验比较。

2.1.3 对内毒素致发热实验兔体温的试验［5］选择体温范围在38.6～39.5 ℃内，且二次温度波动幅度在0.3 ℃内实验兔32 只，按基础体温随机分成4 组，8 只/组，分别为阴性对照组（纯化水），供试品低、高剂量组（银马抗病毒颗粒3.64、7.28 g/kg）及阳性对照组（阿司匹林0.10 g/kg）。各组实验动物均灌胃给予相应药物，1 次/d，连续给药3 d。末次给药前对各组实验兔进行基础体温测定，连续两次间隔30 min，末次给药30 min 后，耳缘静脉推注细菌内毒素30 EU/kg，静脉注射后0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 h各测量体温1 次，并计算各时间点实验兔体温的变化值（测定体温-基础体温，△℃），所得数据均进行组间t检验。

2.1.4 小鼠急性毒性试验 取SPF 级昆明种小鼠80只，雄性、雌性各40 只，按体质量随机分为8 组，10 只/组。据预试验结果，将试验用药按1:0.93 的组间比等比稀释，给药量为30 mL/kg，单日给药3 次，单日内给药剂量分别为511.875、475.850、442.590、411.640、382.820、356.070 及331.130 g/kg。对照组给予纯化水，给药后观察实验动物的毒性反应及死亡情况，1 次/d，连续观察14 d。对死亡动物及观察期结束后的动物进行大体解剖，观察腹腔、盆腔、胸腔、颈部、心、肝、脾、肺、肾及脑等主要脏器及组织的变化，对有异常的脏器及组织取出、固定、包埋行组织病理学检查，用Bliss 法计算动物灌胃给药的LD50及95%的可信区间。

2.1.5 统计学方法 用DAS3.0 软件进行统计学分析，数据以表示，进行组间t检验和半数致死量（LD50）的计算。

2.2 结果

2.2.1 对小鼠二甲苯所致耳廓炎症影响 银马抗病毒颗粒低、中剂量组（9.1 g/kg、18.2 g/kg）和双黄连口服液组均能不同程度地降低二甲苯所致耳廓炎症反应的耳肿胀度，与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05 和P＜0.01）。结果表明，银马抗病毒颗粒具有良好的抑制急性炎症反应。结果见表1。

表1 银马抗病毒颗粒对小鼠二甲苯所致耳廓炎症的影响（n=10）

2.2.2 对大鼠琼脂肉芽肿的影响 银马抗病毒颗粒低、中剂量组（4.5、9.1 g/kg）与阳性对照组均明显抑制由琼脂所致的肉芽肿，与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05 和P＜0.01）。结果见表2。

表2 银马抗病毒颗粒对大鼠琼脂肉芽肿的影响（n=10）

2.2.3 对内毒素致发热实验兔体温的影响 受试物低剂量组（3.64 g/kg）可显著性降低0.5 h 体温，与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；高剂量组（7.28 g/kg）可显著性降低0.5 h～2.0 h 时间段的体温，与对照组比较，均差异有统计学意义（P＜0.05 和P＜0.01）；阿司匹林组可显著性降低0.5 h～2.5 h 的体温，与对照组比较，均差异有统计学意义（P＜0.05 和P＜0.01）。结果表明，银马抗病毒颗粒在多个时间点可显著抑制内毒素致实验兔的体温升高，具有较好的解热作用。结果见表3。

表3 银马抗病毒颗粒对内毒素致实验兔体温的影响

2.2.4 小鼠急性毒性试验 给药组动物除对照组和银马抗病毒颗粒331.13 g/kg 剂量组未见异常外，其他各组动物均在给药后24 h 内不同程度地出现烦躁不安，活动增多，醉步，自主活动减少，毛发松散、嗜睡、死亡，具体的死亡动物数见表4。对死亡动物进行大体解剖，主要脏器脑、心、肝、肺、脾、肾、胃等均未见异常变化，其余存活小鼠也有嗜睡，自主活动减少，但24 h 后，其毛色、摄食、行为活动，二便均正常，无异常反应。用Bliss 法计算银马抗病毒颗粒单日3 次灌胃给药，每次给药容量为30 mL/kg，计算得LD50为397.203 g/kg，95%的可信区间为379.699 g/kg～415.514 g/kg。

表4 银马抗病毒颗粒急性毒性试验动物死亡结果

3 讨论

银马抗病毒颗粒由连翘、牛蒡子、金银花、射干、马勃及芦根六味药组成，处方中的几味中药都具有抗炎、解热的作用，盛可心等［6］报道连翘具有抗炎、抗氧化及抗病毒的作用，有研究［7-8］提示牛蒡子中木质素和生物碱具有镇痛抗炎的作用，苏连杰等［9］研究结果表明金银花茎叶不同方法的提取物均具有一定的抗炎、镇痛作用，雷玲等［10］对金银花的解热成分进行了初步探讨，发现其中绿原酸和木犀草素没有解热活性，对其解热、抗炎的确切成分仍不明确，需要进一步的研究。二甲苯致小鼠耳肿胀是常用的急性炎症模型，以血管通透性改变为主，银马抗病毒颗粒能明显抑制耳肿胀程度。琼脂致大鼠肉芽肿模型是以排异反应为主的亚急性（慢性）炎症模型，银马抗病毒颗粒对急性炎症和慢性炎症均具有明显的抑制作用，提示银马抗病毒颗粒具有抗炎作用。在解热实验模型中，内毒素致进入机体后产生和释放内生致热原［11］，从而使机体发热，银马抗病毒颗粒能明显抑制内毒素致实验兔的体温升高，呈剂量效应关系，提示银马抗病毒颗粒具有解热作用，且剂量越大维持解热的作用更明显，时间更长。综上，银马抗病毒颗粒具有抗炎解热的作用。采用Bliss 法，银马抗病毒颗粒小鼠口服LD50为397.203 g/kg，95%的可信区间为379.699 g/kg～415.514 g/kg，相当于人用剂量的218.2 倍。我们的前期研究结果表明银马抗病毒颗粒在体内外为均具有明显的抗菌作用，还具有明显抑制T 细胞介导的迟发型超敏反应的作用［1］。

新型冠状病毒肺炎患者的主要症状是发热、炎症因子大量表达引发细胞因子风暴，进而导致免疫失衡，因此采用有解热抗炎、免疫调节作用的中药、中药方剂，有利于更好地抗击病毒［12］。银马抗病毒颗粒药效学研究显示，其在抗炎、解热、抑菌及免疫调节方面均有明显的作用。梁德东等［13］报告，银马抗病毒颗粒能较好地抑制炎症性疼痛，有效降低LPS 诱导发热大鼠的体温，具有良好的利咽、抗炎、镇痛、解热等作用。方中含有《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》［14］中推荐的单味中药，可能对抗击病毒具有潜在治疗价值，有待进一步研究。