丹莪妇康煎膏对子宫内膜异位症模型大鼠血浆TXB2和6-Keto-PGF1α的影响

贺克，刘姣，李彩霞，刘丽华，李清

1.石家庄市第四医院药学部，河北石家庄 050011；2. 河北医科大学中医学院药学部，河北石家庄 050091

子宫内膜异位症(EMS)为育龄妇女的常见疾病，是指子宫内膜腺体及间质异位并种植、生长于子宫腔体以外部位[1]。盆腔疼痛为EMS主要临床症状之一，给女性带来了极大痛苦，严重影响了女性的身心健康。近年来，因其发病率逐年上升而受到医学界的关注，但其发病机理至今不明。丹莪妇康煎膏具有活血化瘀，疏肝理气，调经止痛，软坚化积功效，为临床治疗EMS的常用中成药，对EMS患者出现的经期不适、痛经等症状具有较好疗效。为观察丹莪妇康煎膏对EMS的防治作用以及其抑制EMS盆腔疼痛的作用机制，本实验采用子宫内膜自体移植法建立大鼠EMS模型，通过观察异位子宫内膜组织形态学改变，血浆血栓烷B2、6-酮-前列腺素F1α的含量变化，以期为临床应用提供参考及依据。

1 材料

1.1 动物 Wistar大鼠，清洁级，雌性，体重180～200g，由河北省实验动物中心提供，实验动物使用许可证 SYXK(冀)2006-0047，动物合格证号1009075。饲养于温度20～23℃，湿度45～60%，过氧乙酸溶液消毒环境。

1.2 药物 丹莪妇康煎膏，昆明滇虹药业有限公司，批号100404；孕三烯酮，北京紫竹药业，批号53110101；庆大霉素，石家庄制药集团有限公司，批号068100905；苯甲酸雌二醇，上海通用药业股份有限公司，批号009004。

1.3 试剂 血栓烷B2放射免疫分析药盒，北京普尔伟业生物科技有限公司；6-酮-前列腺素F1α放射免疫分析药盒，北京普尔伟业生物科技有限公司。

1.4 仪器 超净工作台，苏州净化设备有限公司；5417R型离心机，德国Eppendorf公司；756MC型紫外-可见分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；全自动γ放免分析仪，北京金泉水科技有限公司。

2 方法

2.1 动物 造模采用自体移植法建立EMS大鼠模型， 造模前2天，大鼠每日肌肉注射苯甲酸雌二醇0.1mg/kg体重促情，假手术组肌肉注射等容量生理盐水。手术时，大鼠腹腔注射2%戊巴比妥钠0.2mL/100g体重，待麻醉后固定于操作板上。开腹找到子宫，暴露左侧子宫，在离卵巢约1cm处，分离附着于子宫肌壁的脂肪和结缔组织，两端分别用手术线结扎，剪取中间约1cm长子宫组织，纵向剖开宫腔，暴露子宫内膜，切取5mm×5mm的子宫壁块[1]。在腹壁切口右侧的腹肌与皮下筋膜层之间打隧道，以正好能置入子宫壁块为宜，将子宫壁块平整的置入右侧隧道底部，使内膜面紧贴腹肌，常规关闭腹腔[2]。假手术组按上述方法切取子宫组织，丢弃，关腹，其余操作同上。术后各鼠腹腔注射庆大霉素0.4万U/只，连续5d。术后次日，各鼠肌肉注射苯甲酸雌二醇0.1mg/kg体重，每隔4d1次，共3次，以促进移植内膜的生长[3]，假手术组肌肉注射等容量生理盐水。术后每周触摸包块2次，观察是否出现包块及包块的体积变化。术后第21d，将大鼠麻醉后固定，开腹，观察异位内膜形态学变化。以游标卡尺测量异位内膜组织体积，若体积增大≥8mm3，并出现液体积聚，隆起呈透明小囊状，则为造模成功。

2.2 分组与处理 取造模成功的大鼠40只，随机分为模型组(MG)，丹莪妇康煎膏高剂量组(DFD-H，6g/kg·d)、低剂量组(DFD-L，3g/kg·d)、孕三烯酮组(GSG，0.5mg/kg·d)，每组10只。另设假手术组(SHM)大鼠10只。各组大鼠每日灌胃给药(或蒸馏水)一次，给药容量为10mL/kg体重，连续30d。末次给药后禁食12h，麻醉，开腹，腹主动脉取血。观察异位子宫内膜生长情况，以游标卡尺测量其长、宽、高，并快速剪取异位子宫内膜，以10%甲醛液固定。

2.3指标检测

2.3.1 组织形态学观察 取异位子宫内膜组织，常规石蜡包埋，作4μm连续切片，HE染色，观察子宫内膜组织形态学变化。

2.3.2 生化指标检测 采用放免法测定血浆血栓烷，B2(TXB2) 6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PG1α)含量。

图 1 各组大鼠异位病灶体积比较Fig 1 The ectopic lesion volume of rats in each group

3 结果

3.1 异位病灶的外观 观察EMS模型大鼠腹腔内有广泛粘连，可见移植物体积显著增大，呈近圆形，囊状，表面有血管生长，内有淡黄色透明积液。经药物治疗后，腹腔内粘连减少，移植物体积显著缩小且部分萎缩，囊内液体较少或基本消失。各组异位病灶体积比较见图1。 与模型组相比：**P<0.01。

3.2 异位病灶的形态学 观察对异位病灶进行形态学观察可见：模型组大鼠横纹肌旁可见子宫内膜组织，腺腔体积较大，腺上皮呈单层柱状，间质致密，见图2。以孕三烯酮治疗后，异位腺体几乎不可见，见图3。以丹莪妇康煎膏治疗后，异位腺腔体积明显减小，并有部分细胞呈萎缩状，腺腔内有粒细胞浸润，见图4、5。

3.3 丹莪妇康煎膏 对血浆血栓烷B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)含量的影响从表1结果可见，与假手术组相比，模型组大鼠血浆TXB2含量显著升高(P<0.01)，6-Keto-PGF1α含量显著降低(P<0.01)，TXB2与6-Keto-PGF1α比值显著升高(P<0.01)。与模型组相比，丹莪妇康煎膏各剂量组大鼠血浆TXB2含量显著降低(P<0.01)；丹莪妇康煎膏高剂量组大鼠血浆6-Keto-PGF1α含量明显升高(P<0.05)，低剂量组也有升高趋势，但无统计学意义(P>0.05)；各剂量丹莪妇康煎膏均能使大鼠血浆TXB2与6-Keto-PGF1α比值较模型组显著降低(P<0.01)。

图 3 孕三烯酮组异位病灶组织学观察(HE×100)Fig 3 The ectopic lesions histologic observation of the gestrinone group (HE × 100)

图 4 低剂量组异位病灶组织学观察(HE×100) Fig 4 The ectopic lesions histologic observation of the low-dose group (HE × 100)

图 5 高剂量组异位病灶组织学观察(HE×100)Fig 5 The ectopic lesions histologic observation of the high-dose group (HE × 100)

表 1 丹莪妇康煎膏对EMS大鼠血浆6-Keto-PGF1α含量的影响(n=10, ±s)Tab 1 The influence of DFD on the EMS rats' plasma 6-Keto-PGF1α(n=10, ±s)

表 1 丹莪妇康煎膏对EMS大鼠血浆6-Keto-PGF1α含量的影响(n=10, ±s)Tab 1 The influence of DFD on the EMS rats' plasma 6-Keto-PGF1α(n=10, ±s)

组 别TXB2(ng/mL)TXB2/6-Keto-PGF1α SHM 3.79±0.60**836.19±452.29**5.52±2.66**MG5.88±0.67 364.49±74.42 16.88±4.36 GSG 5.14±0.62* 846.20±434.27**6.80±1.85**DFD-H 4.80±0.51**687.31±248.51* 7.79±2.64**DFD-L 4.86±0.67**648.84±208.55 4.81±2.33**6-Keto-PGF1α(pg/mL)

4 讨论

子宫内膜异位症(EMS)是育龄妇女常见疾病之一，虽为良性疾病，但其引起的痛经、性交痛、不孕等对女性的生活和健康却带来了极大的影响。目前临床上尚无治愈EMS的药物，只能缓解症状或控制疼痛。近年来，中医药治疗EMS因其疗效好，不良反应低，易为患者接受，受到了医学界的广泛关注。中医认为，EMS属于痛经、癥瘕、不育等范畴，与血瘀有关。由于血瘀而致气血运行不畅，“不通则痛”；或胞宫失于濡养，“不荣则通”，而出现痛经，临床常以行气活血，化瘀止痛药进行治疗[4]。丹莪妇康煎膏，由紫丹参、莪术、竹叶柴胡、三七、赤芍、当归、三棱、香附、延胡索、甘草组成，具有活血化瘀、疏肝理气、调经止痛、软坚化积功效，对妇女瘀血阻滞所致月经不调、痛经、经期不适、盆腔子宫内膜异位症见上述症状者均具有较好疗效。为探究丹莪妇康煎膏缓解EMS盆腔疼痛的作用机制，本实验通过观察异位子宫内膜组织形态学改变，血浆血栓烷B2、6-酮-前列腺素F1α的含量变化，以期为临床应用提供参考及依据。

现代研究发现，E M S痛经患者血浆血栓烷A2(TXA2)含量显著升高，前列环素(PGI2)含量显著降低[5]。TXA2为血小板微粒体合成的血管收缩剂，能够使血小板内cAMP减少，并引起Ca2+内流，造成血小板聚集性增强。而前列环素(PGI2)则是一种抑制血小板聚集的物质，并具有扩张血管的作用。正常情况下，机体通过调节TXA2及PGI2含量保持平衡，调控血管舒缩、血小板聚集[6-8]。而临床研究发现，EMS患者的TXA2、PGI2比值较正常人升高，造成血管收缩，血小板聚集性高，进而子宫平滑肌血流减少，出现痉挛性收缩，引起盆腔疼痛。由于TXA2及PGI2均不稳定，极易代谢为TXB2、6-Keto-PGF1α，因此本研究对EMS大鼠血浆TXB2、6-Keto-PGF1α含量进行检测。结果显示，模型组大鼠血浆TXB2含量显著升高，6-Keto-PGF1α含量显著降低，二者比值显著升高，与临床报道吻合。

应用丹莪妇康煎膏进行治疗后，可见EMS大鼠腹腔内粘连减少，移植物体积显著减小；病理切片可见异位腺腔体积减小，并有部分细胞萎缩。消除异位病灶是丹莪妇康煎膏治疗EMS盆腔疼痛的根本原因。本研究还发现，丹莪妇康煎膏能够通过显著降低血浆TXB2含量，明显升高6-Keto-PGF1α含量，显著降低TXB2与6-Keto-PGF1α比值，从而改善子宫平滑肌血管，缓解痉挛，减少盆腔疼痛。

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