血清TNF-α和sEC的表达与原发性肝癌侵袭和转移的关系*>

袁　林，沈世强

(1.柳州市人民医院普通外科，广西 柳州 545006；2.武汉大学人民医院普通外科)



血清TNF-α和sEC的表达与原发性肝癌侵袭和转移的关系*>

袁林1，沈世强2

(1.柳州市人民医院普通外科，广西 柳州 545006；2.武汉大学人民医院普通外科)

摘要：目的 探讨检测原发性肝癌患者手术治疗前后外周血肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和血清可溶性E-钙粘蛋白(sEC)的表达及侵袭转移的关系。方法 检测66例原发性肝癌患者手术前后及50例健康人TNF-α、sEC和AFP的水平，分析术前TNF-α、sEC和AFP水平与临床病理特征的关系。结果 原发性肝癌患者术前TNF-α、sEC水平显著高于健康人，手术1周后TNF-α、sEC水平较术前显著下降。术前TNF-α水平与肿瘤分级、TNM分期密切相关(P<0.01)，与肿瘤大小、有无门静脉癌栓、有无包膜相关(P<0.05)，与年龄、性别、有无腹水无关(P>0.05)。术前sEC水平与肿瘤分级、TNM分期密切相关(P<0.01)，与有无门静脉癌栓、有无包膜、有无腹水相关(P<0.05)，与年龄、性别、肿瘤大小无关(P>0.05)。结论 TNF-α和sEC参与原发性肝癌的侵袭和转移，在肝癌的恶性进展中起着重要作用，可作为一种肝细胞癌预后和复发预测因子。

关键词：肿瘤坏死因子-α；可溶性E-钙粘蛋白；原发性肝癌；侵袭；转移

原发性肝癌(primary hepatic carcinoma，PHC)是危害人类健康的常见消化道恶性肿瘤之一，其致死率位居所有肿瘤的第 3位[1]。目前治疗通常首选手术切除和肝脏移植，但因该病发展隐匿，早期诊断困难，且术后的复发率高[2]。恶性肿瘤侵袭转移是影响肿瘤手术等治疗及预后的关键，现经证实，肿瘤细胞间粘附的丧失是肿瘤侵袭转移的关键环节[3],而上皮细胞-间充质转化(epithelial- mesenchymal transition，EMT)又是细胞间粘附的基本环节。肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha，TNF-α)是一种重要的细胞因子，已经发现在许多肿瘤生长的微环境中都有TNF-α的表达，同时TNF-α活化的 NF-κB 和 ROS 均可以在某些细胞引起EMT，其中E-钙粘蛋白(E-cadherin)的下调似乎是关键事件。可溶性 E-钙粘蛋白(sEC)为E-cadherin生成的可溶性裂解片段，检测sEC可反应组织中E-cadherin状态。我们的前期研究[4]发现，PHC患者肝癌组织中E-cadherin表达缺失，且在外周血中检测sEC，有利于PHC的早期诊断和监测术后的复发。本研究进一步测定PHC患者术前、术后外周血TNF-α和sEC水平，同时检测血甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)水平，探讨检测外周血TNF-α和sEC水平对PHC侵袭和转移的预测作用。

1资料与方法

1.1一般资料选取2012年12月至2015年6月间在本院监测对象取自PHC行根治性切除术者75例，其中9例患者接受姑息性手术或术后因并发症死亡或恢复期临床症状未改善或者数据不完整，故将此9例病例剔除，最终入组患者66例，男39例，女27例，年龄33～77岁，平均52.3岁。PHC诊断以UICC[5]为标准，所有研究对象均为初治病例，术前均未接受过任何药物治疗或放疗。同时收集同期健康体检者50例作为对照，其中男29例，女21例，年龄26～63岁，平均49.2岁。健康体检者血细胞计数、血脂、肝肾功能均正常范围。

1.2血清样本收集与处理患者手术前与手术后第7～9d，空腹8～12 h后于清晨取肘静脉血立即放入4℃冰箱静置20 min。4℃4 000 r/min离心15 min分离血清。将血清转移到新的离心管中，放入-80℃冰箱保存。检测前取出血清样品，冰上融化后，4℃12 000 r/min离心10 min，除去血清中的不溶物。TNF-α和sEC的血清水平采用ELISA方法检测，AFP采用放射免疫法，所有操作严格按试剂盒说明进行。

2结果

2.1血清TNF-α、sEC、AFP在PHC患者手术前后及健康人中的比较术前各指标均高于手术后，手术前后比较差异有统计学意义(分别为P<0.01，P<0.05，P<0.01)；术前各指标也明显高于健康对照组，两者比较差异有统计学意义(分别为P<0.01，P<0.01，P<0.05)；而术后TNF-α、sEC稍高于健康对照组，但两者比较无统计学意义(P>0.05)。而AFP在术后与健康对照无明显变化，两者比较也无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1　健康人及HCC患者手术前后TNF-α、sEC和AFP值的变化

与术前比较，*P<0.05、**P<0.01；与健康对照比较，#P<0.05、##P<0.01

2.2PHC患者术前血清TNF-α、sEC、AFP与临床病理特征的关系表2结果显示PHC患者术前外周血TNF-α水平与临床分期及分级显著相关，分期较晚及低分化患者的血清TNF-α浓度较分期较早及分化较好患者明显升高(P<0.01)；此外肿瘤大小、有无门静脉癌栓、有无包膜，差异具有显著性(P<0.05)；但不同年龄、性别及有无腹水，差异无显著性(P>0.05)。

表2　PHC病理学参数与血清TNF-α、sEC、AFP水平的关系

同组内比较，*P<0.05、**P<0.01

术前血清sEC浓度与肝细胞癌临床分期及分级显著相关，分期较晚及低分化患者的血清sEC浓度较早期患者明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)；此外有无门静脉癌栓、腹水、有无包膜，差异显著(P<0.05)；但不同年龄、性别及肿瘤大小，差异无显著性(P>0.05)。而术前AFP水平仅与肝细胞癌TNM分期密切相关(P<0.05)，与年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤分级、有无门静脉癌栓、有无包膜无关(P>0.05)，见表2。

3讨论

TNF-α是由活化的巨噬/单核细胞系统产生有多种生物学效应的一种重要细胞因子，除了由成纤维细胞、星状细胞、内皮细胞产生外，许多恶性肿瘤细胞也可产生TNF-α。研究显示[6]：由TNF-α活化的NFκB和ROS均可在某些细胞中引起EMT，从而导致恶性肿瘤细胞的侵袭，进而引起肿瘤的复发和转移。在发生EMT的过程中[7]，某些特殊区域的上皮细胞基因表达发生完全性改变，其中E-cadherin的下调或缺失被认为是关键性事件，但该种效应在PHC中尚未见相关报道。目前己经证实[8]E-cadherin在结肠癌、胃癌等消化道恶性肿瘤中表达下调，特别在肝癌肝细胞中缺失程度较高，并与预后有着较为密切的关系。sEC为E-cadherin生成的可溶性裂解片段，我们的前期研究发现，肝癌组织中E-钙粘连蛋白的表达与肝癌的浸润和转移密切相关。虽然AFP作为肝癌辅助诊断指标的重要地位已被公认[9]，但仍有30%～40%的肝癌患者血清AFP呈阴性[10]。因此，对这类患者寻求敏感的血清诊断标记物，具有重要的临床意义。

我们的前期研究发现，PHC患者肝癌组织中E-cadherin表达缺失，且在外周血中检测sEC，有利于PHC的早期诊断和监测术后的复发，与肿瘤组织标本相比，血清学指标具有简便、重复性好、便于随访等优点。

本研究对66例PHC患者手术前、手术后和健康对照血TNF-α、sEC和AFP检测发现，术前TNF-α、sEC和AFP均高于手术后和健康者，比较差异有统计学意义；而术后TNF-α、sEC和AFP与健康对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。表明PHC患者术前存在与AFP升高相一致的TNF-α、sEC异常表达，术前监测TNF-α、sEC水平也可作为PHC的指标。我们大胆地推测，TNF-α、sEC可作为象AFP一样的肝癌的血清检测标志物。

进一步对PHC患者术前TNF-α、sEC水平与肝癌患者临床病理特征进行分析，并与AFP进行对比发现，术前TNF-α、sEC均与PHC的临床分期和分级呈显著相关性(P<0.01)，与有无门静脉癌栓、有无包膜也有统计学差异(P<0.05)。而术前AFP水平仅与肝细胞癌TNM分期密切相关(P<0.05)，与年龄、肿瘤大小、肿瘤分级、有无门静脉癌栓、有无包膜相关无关(P>0.05)，表明术前检测TNF-α、sEC能更好地判断PHC的预后。但TNF-α与肿瘤的大小之间有相关性，而与有无腹水无统计学意义，可能是TNF-α一方面作为肿瘤侵袭转移因子，另一方面TNF-α也是肿瘤细胞重要的免疫调节因子，故而在巨块型肝癌中TNF-α表达显著升高。而术前sEC与有无腹水有统计学意义，而与肿瘤的大小无相关性。由此推测，在将TNF-α、sEC作为其预后的监测因子时，TNF-α更倾向于反应肝癌患者全身免疫状态，而sEC倾向于反应肝癌患者肝组织腹腔局部状态。

参考文献：

[1]de Lope CR，Tremosini S，Forner A，et al.Management of HCC[J].Journal of Hepatology，2012，56(1):75

[2]杨浩.杨连粤.肝癌术后复发转移相关因素研究进展[J].中国实用外科杂志,2012，32(10)：868

[3]陈浩，李建生，荚卫东，等.肝细胞癌患者血清细胞外基质蛋白1表达水平与术后复发及预后的关系[J].中华普通外科杂志,2012,27(7):582

[4]袁林，徐又先，沈世强，等.血清E-钙粘连蛋白在肝细胞癌手术前后的表达及术后复发的意义.肿瘤防治研究,2014，41(2)：153

[5]Novák J，Fabian P.Comments on the TNM classification of malignant tumours-7th edition[J].Klin Onkol，2011，24(2):149

[6]庄远，张婷，魏超，等.白细胞去除对悬浮红细胞上清中肿瘤相关因子蓄积改变及其对肿瘤细胞体外增殖影响的研究[J].中国实验血液学杂志，2015，23(1)：217

[7]Reinhold WC，Reimers MA，Lorenzi P，et al.Multifactorial regulation of E-Cadherin expression：an integrative study[J].Molecular Cancer Therapeutics，2010，9(1):1

[8]于海峰，张逊，徐美林，等.FOXQ1和E-cadherin在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义[J].天津医药，2015，43(2)：170

[9]刘凤奎，孙卫莉，李鹏.恶性肿瘤标志物检查的临床应用[J].中国临床医生杂志，2015，43(11)：17

[10]Giannini EG，Sammito G，Farinati F，et al.Determinants of alpha-fetoprotein levels in patients with hepatocellular carcinoma：Implications for its clinical use[J].Cancer，2014，120(14):2150

Study on the Relationship between the Expression of Serum TNF-α and sEC and Invasion and Metastasis of Primary Hepatic Carcinoma

YUAN Lin,SHEN Shi-qiang

(DepartmentofGeneralSurgery,thePeople'sHospitalofLiuzhou,LiuzhouGuangxi545006,China)

ABSTRACT：Objective To investigate the relationship between the expression of serum tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and soluble E-cadherin (sEC) and invasion and metastasis of primary hepatic carcinoma (PHC). Methods The levels of TNF-α，sEC and AFP in serum of 66 PHC patients and 50 healthy controls were tested ELISA，and its relationship with clinical and pathological characteristics were analyzed.Results The levels of TNF-α and sEC in PHC patients before operation were significantly higher than those in controls，which declined significantly one week after operation.The of TNF-α level before operation showed significant correlation with Edmondson grade，TNM staging，tumor size，the carcerous thrombi within the portal vein and the capsule of carcinoma(P<0.05 or P<0.01)，but had no correlation with age and sex of patients or ascites (P>0.05).The of sEC level before operation showed significant correlation with Edmondson grade，TNM staging，ascites，the carcerous thrombi within the portal vein and the capsule of carcinoma (P<0.05 or P<0.01)，but had no correlation with age and sex of patients or the tumor size (P>0.05).Conclusion The expression of TNF-α and sEC involves in the process of invasion and metastasis of PHC.It plays important roles in malignancy of PHC，which may be a predictive factor for prognosis and recurrence of PHC.

KEY WORDS：Tumor necrosis factor-alpha;Soluble E-cadherin；Primary hepatic carcinoma;Invasion;Metastasis

(收稿日期：2016-02-015)

DOI:10.16751/j.cnki.2095-4646.2016.02.0108

中图分类号：R735.7

文献标识码：A

文章编号：2095-4646(2016)02-0108-03

基金项目：广西壮族自治区卫生厅计划课题(Z2014433)；柳州市培养新世纪学术和技术带头人专项资金资助项目