参芎注射液对顺铂耳蜗毒性防护作用的实验研究*

张　博，陈　颖，黄　喜，程胜男，李海燕

(1.湖北科技学院五官医学院，湖北 咸宁 437100；2.湖北科技学院五官医学院10级耳鼻咽喉班)



参芎注射液对顺铂耳蜗毒性防护作用的实验研究*

张博1，陈颖2，黄喜2，程胜男2，李海燕2

(1.湖北科技学院五官医学院，湖北 咸宁 437100；2.湖北科技学院五官医学院10级耳鼻咽喉班)

摘要：目的 探讨参芎注射液对顺铂致小鼠耳毒性拮抗作用。方法 将30只成年健康小鼠随机分为3组：对照组(A组)：连续7d 腹腔注射生理盐水2ml/(kg·d)；顺铂组(B组)：连续7 d腹腔注射顺铂4mg/(kg·d)；参芎组(C组)：先于第1、2d腹腔注射参芎液4ml/(kg·d)，接着第3～9d注射顺铂4mg/(kg·d)，注射顺铂30min后腹腔注射参芎液4ml/(kg·d)。通过测试听性脑干反应(auditory brainstem response，ABR)阈值，观察各组小鼠听力的变化。应用显微镜观察耳蜗毛细胞损伤情况。结果 ①用药前,三组小鼠ABR阈值差异无统计学意义(P>0.05)。用药后，B组和C组ABR阈值均明显高于A组(P<0．01)，但C组ABR阈值明显低于B组(P<0．01)。②显微镜下显示：A组耳蜗内外毛细胞排列整齐,细胞间边缘清楚；B组耳蜗毛细胞破坏严重，肿胀、边缘不清楚、外毛细胞严重缺失； C组耳蜗外毛细胞损伤及缺失现象较B组轻。结论 参芎注射液可减轻顺铂所致毛细胞损伤，可在一定程度上有效预防顺铂的耳毒性。

关键词：参芎注射液；顺铂；耳毒性；听性脑干反应

顺铂是临床最常用抗肿瘤药物之一，常用于治疗头颈部及泌尿生殖系统的恶性肿瘤，具有良好的疗效。但是临床研究表明顺铂与其他抗肿瘤药物一样，有许多毒副作用，其中以内耳损害致聋和肾脏损害最为严重[1～3]，目前尚无有效防治及拮抗手段。参芎葡萄糖注射液为复方制剂，其主要成分为：盐酸川芎嗪和丹参素，临床主要用于闭塞性脑血管疾病及其他缺血性血管疾病治疗。本研究通过建立动物顺铂耳毒性模型，探讨参芎注射液对顺铂致小鼠耳毒性拮抗作用，以寻求防治顺铂耳蜗毒性损伤的有效药物。

1资料与方法

1.1一般资料选择成熟健康小白鼠30只(校实验动物中心提供)，耳廓反射正常，体重28～30 g，雌雄不限。动物随机分成3组，每组10只。对照组(A组)：连续7d，每天腹腔注射生理盐水2ml/(kg·d)。顺铂组(B组)：连续7 d腹腔注射顺铂4mg/(kg·d)(齐鲁制药有限公司)。参芎组(C组)：先于第1、2d腹腔注射参芎注射液4ml/(kg·d)(贵州景峰注射液有限公司)，接着第3～9d注射顺铂4mg/(kg·d)，注射顺铂30min后腹腔注射参芎注射液4ml/(kg·d)。

1.2听性脑干反应(ABR) 阈值检测小鼠经1%戊巴比妥钠(上海西唐科技公司) 按35～40 mg/kg腹腔注射麻醉，在隔声屏蔽室内检测各组动物给药前及停药后24h ABR阈值。记录电极放置于两耳廓前沿连线中点，参考电极置于同侧耳垂，接地电极置于鼻尖处。声刺激强度从95 dB SPL开始，以5 dB SPL 依次递减，ABR阈值判定以Ⅲ波为准。

1.3形态学观察于停药24 h检测ABR阈值后，每组动物行耳蜗铺片，观察其形态学变化及毛细胞缺失情况。

2结果

2.1一般状况A组小鼠无异常变化。B组小鼠给药期间食欲减退、体重减轻、活动迟缓、毛发疏松。C组上述现象较B组轻。

2.2各组ABR阈值变化由表1可见，三组小鼠用药前ABR阈值差异无统计学意义(P>0.05)。用药后，B和C组ABR阈值均明显高于A组(P<0．01)，但C组ABR阈值明显低于B组(P<0．01)。

表1　各组小鼠ABR阈值变化

与A组比较，*P<0.01；与B组比较，△P<0.01

2.3耳蜗铺片显微镜下观察各组耳蜗铺片显示：A组耳蜗毛细胞排列整齐有序,细胞间边缘清楚，见图1(封二)；B组毛细胞破坏严重，细胞间边缘不清楚，有显著外毛细胞缺失，见图2(封二)；C组耳蜗外毛细胞损伤及缺失现象较轻，见图3(封二)。箭头所指处为外毛细胞缺失部位。

各组耳蜗对应部位毛细胞计数：在光镜(×400)下从左向右连续数三排外毛细胞各50个，计数出各组缺失毛细胞数。结果显示：B组外毛细胞缺失最严重，C组外毛细胞缺失明显低于B组(P<0.05)，A组无明显毛细胞缺失。见表2。

表2　各组耳蜗对应部位缺失毛细胞数比较(个，±s，n=10)

与B组比较，*P<0.05

3讨论

顺铂是临床治疗头颈部及泌尿生殖系统的恶性肿瘤的首选药物之一，然而该药具有严重的耳毒性副作用，可导致耳蜗毛细胞受损，从而造成双侧听力丧失。关于顺铂耳毒性作用机制存在多种学说，目前尚无统一认识。有文献报道[4]顺铂对耳蜗形态的影响主要表现在Corti器、血管纹和螺旋神经节神经元这三方面。目前认为顺铂耳毒性机制可能与以下途径有关[4，5]： 药物选择性聚集于内耳，当达到中毒剂量时，可引起细胞水肿、细胞间隙压缩或闭合，造成药物排泄缓慢，使顺铂在内耳可长时间、高浓度存在，引起耳毒性损伤。 引起毛细胞内线粒体变性，由于线粒体是细胞进行氧化代谢、提供能量的中心，其损伤势必影响细胞的代谢及功能活动。顺铂还能引起耳蜗血管纹的损伤，而血管纹是整个耳蜗包括内、外毛细胞及支持细胞能量的主要来源，其损伤也会影响细胞代谢和功能活动，导致耳蜗功能的失调[6]。 影响抗氧化酶及参与三羧酸循环的各种酶的功能正常发挥。

参芎葡萄糖注射液为复方制剂，其主要成分为盐酸川芎嗪和丹参素，具有抗血小板聚集，扩张冠状动脉，降低血液粘度，加速红细胞的流速，改善微循环，并具有抗心肌缺血和心肌梗死的作用，临床主要用于闭塞性脑血管疾病及其他缺血性血管疾病治疗。本研究观察到顺铂可使小鼠ABR阈值升高，耳蜗毛细胞破坏严重，部分外毛细胞缺失；使用参芎注射液后ABR阈值降低，毛细胞损伤及缺失减轻。结果表明参芎注射液可在一定程度上抑制顺铂诱导的耳蜗毛细胞的破坏，有效减轻听功能的损伤。至于参芎注射液对顺铂耳毒性防护作用具体机制，还有待于今后更深入的研究。

参考文献：

[1]廖英俊，汤浩．抗癌药顺铂耳毒性机制及防治方法的研究进展[J]．生理科学进展，2003，34(3)：266

[2]Tsuchiya A,Imai M,Kamimura H,et al.Successful treatment of multiple lung metastases of hepatocellular carcinoma by combined chemotherapy with docetaxel，cisplatin and tegafur/uracil[J].World Journal of Gastroenterology,2009,15(14):1779

[3]Mukherjea D,Jajoo S,Whitworth C,et al.Short interfering rna against transient receptor potential vanilloid 1 attenuates cisplatin-induced hearing loss in the rat[J].J Neurosci,2008,28(49):13056

[4]费文彬,江洋,吴展元.顺铂耳毒性的研究[J].听力学及言语疾病杂志,2007,15(6):505

[5]沈雄，王挥戈，何婉珑，等.黄芪对顺铂耳蜗毒性防护作用的实验研究[J].中国实用医药,2009,4(11):22

[6]Wang J,Lloyd Faulconbridge RV,Fetoni A,et al.Local application of sodium thiosulfate prevents cisplatin-induced hearing loss in the guineapig[J],2003,45(3):380

Protective Effect of Shenxiong Injection on Cochlea Toxicity Induced by Cisplatin

ZHANG Bo,CHEN Ying，HUANG Xi,et al

(HubeiUniversityofScienceandTechnology,XianningHubei437100,China)

ABSTRACT：Objective To investigate the protective effect of Shenxiong injection on cisplatin-induced ototoxicity in mice. Methods 30 adult healthy mice were randomly divided into 3 groups: control group (group A)，cisplatin group (group B) and Shenxiong injection group (group C).The group A was injected intraperitoneally with normal saline for 7 days，group B was treated with cisplatin at the dose of 4mg/kg for 7 days，once a day，and group C was treated with Shenxiong injection at the dose of 4ml/kg for consecutive 9 days.The threshold of auditory brainstem response(ABR)and the changes of hearing were measured in each group.The injury of cochlear hair cells was observed by microscope.Results Before treatment，there was no significant difference for ABR threshold between the three groups(P>0.05).After treatment，the ABR thresholds in group B and group C were significantly higher than that of group A(P<0.01)，but the ABR threshold in group C was significantly lower than that in group B(P<0.01).Under the microscope，the hair cells of group B were severally damaged and swollen，the edge was not clear，and the outer hair cells were badly absent.Compared with group B，Shenxiong injection could significantly alleviate the pathological changes of cochlear hair cells.Conclusion Shenxiong injection can reduce the damage of hair cells induced by cisplatin，and prevent effectively cisplatin-induced ototoxicity.

KEY WORDS：Shenxiong injection;Cisplatin;Ototoxicity；Auditory brainstem response

(收稿日期：2016-01-09)

DOI:10.16751/j.cnki.2095-4646.2016.02.0111

中图分类号：R-322

文献标识码：A

文章编号：2095-4646(2016)02-0111-03

基金项目：大学生创新创业训练计划项目