胎膜早破并发宫内感染病原菌类型分析及其胎膜组织中凋亡因子表达水平

洪燕兰，宋珍，胡梦川

（南方科技大学医院 妇产科，广东 深圳 518000）

胎膜早破（PROM）的发病机制尚不十分清楚，可能与胎膜细胞凋亡有关。随着妊娠进程发展，覆盖子宫颈口的胎膜组织会逐渐弱化、变薄，此过程与细胞程序性凋亡过程密切相关，一旦胎膜受到外界因素影响而发生过度凋亡时，组织结构改变加速，胎膜组织难以承受宫腔内压力的增高，可诱发PROM［1－2］。故胎膜组织中凋亡因子水平与PROM的发生可能存在一定关系。胱天蛋白酶（Caspase）由线粒体介导，被激活的Caspase通路是细胞凋亡的主要途径，而B淋巴细胞瘤／白血病－2基因（Bcl－2）、凋亡诱导因子（AIF）是机体凋亡通路的重要基因。本研究选择就诊于我院的98例PROM产妇为对象，分析PROM并发宫内感染病原菌类型及其胎膜组织中Caspase－3、AIF、Bcl－2表达水平，为临床诊疗提供参考，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2020年1月至2021年1月就诊于我院的98例PROM产妇。纳入标准：符合《妇产科学》中PROM相关诊断标准［3］；孕周≥28周；签署知情同意书；破膜12 h内入院；单胎妊娠；病历资料完整；入组前14 d内未服用抗菌药物。排除标准：合并宫内感染外其他感染；存在妊娠期糖尿病、高血压等合并症；合并恶性肿瘤；合并精神疾病。按是否并发宫内感染分为非感染组（61例）和感染组（37例）。非感染组年龄22～39岁，平均年龄（30.21±2.14）岁；孕次1～5次，平均孕次 （2.52±0.38）次；产次1～3次，平均产次（1.65±0.35）次。感染组年龄21～38岁，平均年龄（30.16±2.10）岁；孕次1～6次，平均孕次 （2.56±0.32）次；产次1～3次，平均产次（1.70±0.33）次。两组的一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 宫内感染诊断标准PROM出现胎心率显著增加、脉搏加快、体温升高；合并子宫压痛、羊水异味；实验室指标C－反应蛋白、白细胞计数、中性粒细胞升高。

1.3 方法①病原菌鉴定。无菌采集感染组产妇分娩时羊水标本3 mL，离心后1 h内送检，使用全自动微生物鉴定系统（VITEK－2 Compact型，法国生物梅里埃公司）实施病原菌培养与鉴定，参考 《全国临床检验操作规程》［4］操作。质控菌株均购自卫生部临床检验中心，包括大肠埃希菌ATCC 25922、肺炎克雷伯菌ATCC 700603、铜绿假单胞菌ATCC 27853。②胎膜组织中相关指标测定。两组产妇分娩后，采集胎膜破口处2 cm×2 cm大小胎膜组织，用无菌生理盐水漂洗，将血液去除后，用免疫组化法测定Bcl－2、Caspase－3、AIF表达情况，试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.4 观察指标①分析PROM并发宫内感染的病原菌类型。②比较两组胎膜组织中的Bcl－2、Caspase－3、AIF表达水平。

1.5 统计学处理应用SPSS 21.0统计软件处理数据。计量资料以±s表示，采用t检验；计数资料以n（%）表示，采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PROM并发宫内感染的病原菌类型37例合并宫内感染产妇中检出52株病原菌，其中细菌37株，真菌15株，以大肠埃希菌、B族链球菌、白假丝酵母为主。见表1。

表1 PROM并发宫内感染产妇羊水主要病原菌构成

2.2 两组胎膜组织中Bcl－2、Caspase－3、AIF表达比较感染组胎膜组织中Bcl－2表达水平低于非感染组，Caspase－3、AIF表达水平高于非感染组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组胎膜组织中Bcl－2、Caspase－3、AIF表达水平比较（±s）

表2 两组胎膜组织中Bcl－2、Caspase－3、AIF表达水平比较（±s）

组别 n Bcl-2 Caspase-3 AIF感染组 37 4.30±1.66 5.48±1.32 3.62±1.11非感染组 61 6.38±2.01 3.31±1.01 1.83±0.59 t 5.292 9.166 10.420 P 0.000 0.000 0.000

3 讨论

胎膜是羊膜与绒毛膜共同构成的密闭环境，可保护胎儿生长与发育。当胎膜受到头盆不称、机械性因素等危险因素作用时，胎膜张力与弹性降低，难以承受羊腔膜的压力而发生破裂，造成羊水外漏，致使胎儿丧失屏障保护，可引起绒毛膜羊膜炎、败血症、新生儿感染性疾病、肺成熟障碍等不良妊娠结局［5］，严重威胁母婴健康。

宫内感染是诱发PROM的重要因素之一，能够水解宫颈口周围胎膜的细胞外物质，降低组织张力强度，减少胶原纤维，增加膜的脆性，同时会加速宫内组织学与内分泌改变，进而诱发PROM。早期了解PROM合并宫内感染者的病原菌感染类型，对指导临床治疗至关重要。本研究中，37例合并宫内感染产妇中检出52株病原菌，其中细菌37株，真菌15株，以大肠埃希菌、B族链球菌、白假丝酵母为主，提示大肠埃希菌、B族链球菌、白假丝酵母是合并宫内感染PROM产妇的主要病原菌，原因可能与三者具有多种毒力因子，能够穿透胎膜有关。

PROM可能与凝血功能、慢性炎症、氧化应激、基质金属蛋白激活、细胞凋亡等过程密切相关，其中细胞凋亡可在多种因素刺激下促使细胞程序性死亡过程启动，促进PROM发生。本研究结果显示，感染组胎膜组织中Bcl－2表达水平低于非感染组，Caspase－3、AIF表达水平高于非感染组，提示三者的表达水平与宫内感染的发生密切相关。Bcl－2包含2个内含子和3个外显子，具有抑制凋亡作用，能够通过与其受体Bax形成异源或同源二聚体促使细胞的凋亡平衡改变，参与线粒体外膜的透化过程，在正常组织内表达极低，其高水平表达与细胞凋亡减少，延长细胞寿命关系密切［6］。AIF是主要位于线粒体膜间隙的一种凋亡效应蛋白，当受到上游刺激信号作用时会释放进入细胞质，促使细胞凋亡。Caspase－3是细胞凋亡的核心环节，也是细胞凋亡的终极蛋白，因存在较低的自我活化能力，可被上游的启动子激活，经切割、剪切等方式作用于相应的底物，使其发生化学生物反应，参与细胞凋亡的执行［7］。Caspase－3还能直接作用于细胞，瓦解细胞核结构、水解构成细胞骨架的相关蛋白质，造成细胞周期阻滞等，引起染色体固缩、细胞解体而形成“凋亡小体”，影响细胞凋亡执行。

综上所述，大肠埃希菌、B族链球菌、白假丝酵母是PROM并发宫内感染的主要病原菌类型，可能通过影响胎膜组织中Bcl－2、Caspase－3、AIF表达促使生产过程的提前启动，进而诱发PROM，其机制有待进一步研究。