清蒸法对四年生九华黄精饮片质量的影响

鲍康德，秦宇雯,2#，赵 祺,，宋大伟，范欣荣,4，朱 强，姜程曦,4*

（1.温州医科大学药学院，温州325035；2.安徽济人药业有限公司，亳州236800；3.池州市九华山黄精研究所，池州247100；4.安徽省九华山佛教医药研究所，池州247100）

黄精为百合科植物滇黄精Polygonatum kingianum Coll. et Hemsl.、黄精Polygonatum sibiricum Red. 或多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua 的干燥根茎[1]。《名医别录》[2]首次记载正名“黄精” 及其功效。 《中国道地药材论丛》[3]将安徽九华山所产黄精（安徽省“三珍” 之一[4]）列为上品，取名为“九华黄精（多花黄精）[5-6]” 以突出地方特色，现已成为国家地理标志农产品。 现代已有研究证明，其化学成分主要有多糖类、皂苷类、黄酮类等；具有降糖降脂、改善记忆力、增强免疫力、抗衰老、抗抑郁、抗疲劳等作用[6]。

钱枫等[7]研究发现产于皖南的多花黄精中多糖含量最高；陈菁瑛等[8]证实多花黄精2～4 年龄节间多糖积累较快，3～4 年龄节相对稳定，之后多糖积累随多花黄精的生长明显下降；黄俊学[9]等发现4 年生黄精总糖和还原糖含量相对较高。然而将黄精的年份与其对应龄节比较并将该龄节单独炮制的研究，国内外鲜见报道。 因此，本研究选择4 年生九华黄精及其第4 龄节为研究对象，研究不同清蒸法对其质量的影响，比较4 年生九华黄精及其第4 龄节之间的异同，为九华黄精的炮制工艺研究及其产业化开发提供科学依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

紫外-可见分光光度计（UV-1800PC，上海美普达仪器有限公司）；箱式电阻炉（SX2-2.5-102，上海博讯实业有限公司医疗设备）；真空烘箱（DZG-6050SBD，上海森信实验仪器有限公司）；电子调温电热套（DZTW，上海邦西仪器科技有限公司）；电子分析天平（SQP，赛多利斯科学仪器北京有限公司）；恒温水浴锅（HWS，上海一恒科学仪器有限公司）；循环水真空泵（SHZ-Ⅱ，上海亚荣生化仪器厂）； 粉碎机 （HL-500A， 上海塞耐机械有限公司）；超声波清洗机（JP-100S，深圳市洁盟清洗设备有限公司）。

1.2 材料

蒽酮、3，5-二硝基水杨酸、香草醛、丙三醇、苯酚、高氯酸、甲醇、正丁醇、乙醇、甲苯、硫酸、盐酸、冰醋酸、氢氧化钠，以上试剂均为分析纯；D(+)-无水葡萄糖标准品、人参皂苷Rb1 标准品。

2 方法与结果

2.1 样品采集

2018 年9 月至10 月，在安徽池州九华山黄精研究所种植基地随机选取种植4 年生的九华黄精新鲜根茎样品，经过温州医科大学药学院中药教研室姜程曦教授鉴定为多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua 的新鲜根茎，并将其分成整体4 年生九华黄精和第四龄节九华黄精，详见表1。

表1 样品采集信息记录表Table 1 Sample collection information recording table

2.2 样品处理

九华黄精经炮制后可除去麻感，在蒸、晒、焖、润等加工过程中，其毒性逐渐削弱甚至完全清除；脱水后更便于贮存，防止霉变、虫蛀等。 因此，黄精的炮制过程至关重要。 本研究采用七种清蒸法炮制九华黄精，具体工艺详见表2。

表2 不同清蒸法的炮制工艺Table 2 Processing technology of different steaming methods

2.3 性状观察

本品性状符合《中国药典》（2020 年版）一部黄精项下多花黄精性状规定[1]，发现生品黄精表面淡黄或黄棕色，不规则厚片，表面粗糙略呈角质样可见清晰筋脉小点香气微弱，质稍硬而韧味微甜，无苦味咀嚼有些黏性刺激喉咙，麻痹舌头。 蒸过的黄精内外均漆黑，外表光泽透亮如琥珀软，糯，黏，味甜，无苦味香气浓郁类似酱香。

2.4 检查

2.4.1 水分测定

按《中国药典》（2020 年版）一部黄精项下水分测定法：甲苯法（通则0832）[1]，平行3 次，测定结果均≤15%，符合规定；测定16 批样品的折干率：4 年生九华黄精折干率24.79% (n=8)，其第4 龄节折干率26.58% (n=8)，详见表3。

2.4.2 灰分测定

2.4.2.1 总灰分

按《中国药典》（2020 年版）一部黄精项下总灰分测定法（通则2302）[1]，平行2 次，测定结果均≤4%，均符合规定，结果见表3。

2.4.2.2 酸不溶性灰分

按《中国药典》（2020 年版）一部黄精项下酸不溶性灰分测定法（通则2302）[1]，平行2 次，测定结果均≤1%，符合规定，结果见表3。

表3 九华黄精不同炮制品检查Table 3 Inspection results of different processed products of Polygonatum sibiricum Hua

2.4.3 浸出物

按《中国药典》（2020 年版）一部黄精项下醇溶性浸出物测定法 （通则2201）[1]， 平行2 次， 测定结果均≥45%，符合规定，结果见表5。

2.5 含量测定

2.5.1 黄精多糖

按《中国药典》（2020 年版）一部黄精项下多糖含量测定法[1]，平行3 次。 得回归方程，详见表4；测定结果均≥4%，符合规定，结果见表5。

2.5.2 还原糖

2.5.2.1 标准曲线制备

精密量取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 ml，分别置10 ml 具塞刻度试管中，各加水至4 ml；以空白溶液为对照，照UV-Vis（通则0401），在540 nm 处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线[10-12]，得回归方程，详见表4。

2.5.2.2 溶液制备

对照品溶液：取经105 ℃干燥至恒重无水葡萄糖对照品50.0 mg，精密称定，置50 ml 容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得[10,13]。

空白溶液：加水至4 ml，加入5 ml DNS 溶液，摇匀后置沸水浴中加热6 min， 冰浴冷却至室温， 加水至刻度，摇匀，即得[10-12]。

供试品溶液： 取黄精样品200 g，60 ℃干燥至恒重，粉碎，过80 目筛，备用。 取黄精样品粉末1.00 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加80 %乙醇100 ml，水浴回流提取1h，趁热过滤，滤渣用80%乙醇洗3 次，每次10 ml，取滤液，挥尽乙醇，转移至250 ml 容量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取1.0 ml 定容至50 ml，备用。 精密量取上述溶液4 ml，同“2.5.2.1” 项下操作[10,13]，平行3 次。 实验结果见表5。

2.5.3 小分子总糖

2.5.3.1 标准曲线制备

精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml，分别置50 ml 容量瓶中，加水至刻度，摇匀，分别精密量取上述稀释后的对照品溶液各1 ml， 置10 ml 具塞试管中，加水至2 ml，摇匀，以空白溶液为对照，同“2.5.2.1” 项下标准曲线绘制（λ=490 nm），得回归方程[10-12]，详见表4。

2.5.3.2 溶液制备

对照品溶液：同“2.5.2.2” 项下的对照品溶液制备[10,13]。

空白溶液：加水至2 ml，加5%苯酚溶液1 ml，加浓硫酸溶液7 ml，混匀，静置5 min，水浴加热20 min，冰浴冷却至室温，摇匀，即得[10-12]。

供试品溶液：同“2.5.2.2” 项下的供试品溶液制备。精密量取上述溶液1 ml，同“2.5.3.1” 项下操作[11-13]，平行3次。 结果见表5。

2.5.4 总皂苷

2.5.4.1 标准曲线制备

取对照品溶液10、20、40、80、120、160、200 μL，置10 ml 具塞试管中， 挥尽溶剂， 以空白溶液为对照，同“2.5.2.1” 项下标准曲线绘制(λ=550 nm)，得回归方程[10-11]，详见表4。

表4 多成分标准曲线的回归方程、线性范围和相关系数Table 4 regression equation, linear range and correlation coefficient of each component standard curve

2.5.4.2 溶液制备

对照品溶液：取人参皂苷Rb1 对照品11.3 mg，精密称定，加甲醇溶解，定容至10 ml，摇匀，即得[11-12]。

空白溶液：加5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 ml（新鲜配制），冰浴时加高氯酸0. 8 ml，混匀，60 ℃水浴加热15 min，冰浴2 min，加冰醋酸5 ml，混匀，静置5 min，即得[10-11]。

供试品溶液： 取黄精样品各200 g，60 ℃干燥至恒重，粉碎，过80 目筛，备用。取黄精样品粉末1.00 g，精密称定，加14 倍量水饱和正丁醇（约17.3 ml），40 ℃超声提取50 min，过滤，滤渣再提取一次，合并两次滤液，置25 ml 容量瓶中，加水饱和正丁醇至刻度，摇匀。 精密量取上述溶液100 μL，挥尽溶剂，同“2.5.4.1” 项下操作[10,14]，平行3 次。 结果见表5。

2.5.5 方法学考察

取同一备用样品分成5 份，按各自“供试品溶液制备” 操作，测其精密度及重复性；量取适量各自对应的对照品溶液，分别加入上述5 份样品中，测其回收率；取同一供试品溶液5 份， 以相应试剂为空白， 分别于0、20、40、60、80、100、120 min 时， 在各自波长下测其稳定性[7,15]。 考察后发现该仪器精密度良好，该法重复性良好、回收性良好，经显色后2 h 内吸光度较稳定。

2.6 综合评价

九华黄精不同炮制品的评价指标为： 醇溶性浸出物、糖类成分、总皂苷的含量，通过综合评分法评定其优劣。 醇溶性浸出物、多糖、还原糖、小分子总糖、总皂苷的测定结果及黄精的总糖、非还原性低聚糖含量的计算结果[10]，详见表5。 先将实验数据进行归一化处理（各个实验数值的最高数值为参照），由浸出物、糖类成分、总皂苷的成分和加工方法的重要性决定，分别给予各个指标的加权系数是0.3、0.4、0.3，最后求和得综合评分[10,13]，计算公式如下：

表5 不同炮制品主要成分含量测定Table 5 Determination of effective components in different processed products

计算结果如表6 所示。

表6 不同炮制品的综合评分Table 6 Comprehensive scoring results of different processed products

3 讨论

本研究基于九华黄精道地产区的样品采集、炮制工艺（气候、工具、方法、人员）等因素下，得出重蒸法Ⅱ及九蒸九晒法Ⅱ较优，其第4 龄节质量略优的结论，其正确与否尚需通过HPLC 进一步验证；不同炮制品之间主要成分含量有所差异，其转化过程也有待深入研究。 从表2、 表5、 表6 及图1 可以看出： “重蒸法Ⅱ” 样品（20180930E-CZⅡ）表面棕黑色、无光泽，中心棕色，其综合评分是最高的(87.53)；20180930H-JZJSⅡ样品内外均漆黑，外表光泽透亮如琥珀，其综合评分(87.19)，仅次之。 与生品比较，具有极显著差异性（**P＜0.01，***P＜0.001）；炮制品的醇浸出物、黄精多糖、小分子总糖（除20180930H-JZJSⅡ外）、非还原性低聚糖、总糖的含量均下降，而还原糖和总皂苷的含量均增加。 与其第4 龄节比较，均具有显著差异性（#P＜0.05，##P＜0.01）；发现4 年生样品多糖、还原糖、小分子总糖及总皂苷含量均略低于其第4 龄节样品。 综上，重蒸法Ⅱ及九蒸九晒Ⅱ下的样品综合评分较高， 可视为九华黄精的较优炮制方法，其第4 龄节可作为九华黄精的产品开发优选材料。

图1 不同样品多指标综合评分Fig.1multi-indexcomprehensivescoreofdifferentsamples

九华黄精作为典籍记载的历代延年益寿、辟谷长生之“仙药”，也是现代药食同源物质之一，其养生保健功效值得深度挖掘。通过九华黄精炮制工艺方法的不断完善，为今后九华黄精的产业化开发提供科学依据。