黄芪-甘草配伍对大鼠肝CYP450酶mRNA表达的调控作用

贾旭爽，陈宇杨，鲍慧玮，张亚杰(长春中医药大学·吉林 长春·130117)

黄芪-甘草药对始载于《太平惠民和剂局方·卷五治诸虚》，由黄芪-甘草两味药组成[1]，黄芪甘温，补脾肺、升清阳，为补气要品;甘草甘平，补脾胃，益中气。两药相须配伍，取甘以守中，使补中益气之力增强[2]。本课题以甘草、黄芪为研究对象，通过逆转录聚合酶链反应检测5种酶的mRNA表达，以此为甘草、黄芪药对的临床合理联合用药提供实验依据。

1 实验材料

1.1 药品与试剂

甘草与黄芪两种饮片均购自吉林省宏检大药房有限公司；RNA提取试剂盒(Biomed公司)；逆转录酶及QSCR扩增试剂购自TransGen公司；2 xTaqPCR Master Mix(北京天根生物科技有限公司);Fast Quant第一链合成试剂盒(批号:KRR121221，北京天根生物科技有限公司);RNA提取试剂盒(TaKaRa公司)。

1.2 仪器设备

台式低温高速离心机(上海飞鸽仪器厂);实时定量PCR仪（赛默飞世尔）；酶标仪(伯乐生命医学产品(上海)有限公司)。

1.3 实验动物

雄性Wistar大鼠，体重180～220g，由长春市亿斯实验动物技术有限责任公司提供。这批大鼠的实验动物合格证号SCXK(吉)2020-0002。大鼠喂饲标准饲料和水，饲养于长春中医药大学动物中心、12h日夜节律。

2 方法

2.1 药物的制备与配制

按《医林改错》中载黄芪和甘草的规定的剂量黄芪10g、甘草2.5g进行换算，取甘草、黄芪，浸泡1h，8倍水小火煎煮30min，过滤后滤渣6倍水再煎煮30min，两次滤液经70℃浓缩，最终得黄芪-甘草组浓度为0.14g/mL生药。甘草、黄芪单煎液的浓度为0.14g/mL生药、0.028g/mL生药。

2.2 动物分组及给药

实验动物随机分为空白对照组、甘草组、黄芪组、甘草-黄芪组，每组5只，灌胃给药，14 d后，处死动物并提取部分动物肝脏-80℃保存，以备RNA检测。

2.3 RT-PCR技术测定大鼠肝脏mRNA表达

肝 脏 中CYP1A2，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6，CYP2E1酶基因的表达是通过反转录聚合酶链式反应来被量化。使用Trizol试剂盒从肝脏组织中提取总RNA,RNA含量通过260nm波长处的吸光度来测量。每只大鼠肝药酶的RNA样品纯度为A260/A280比值范围在1.8～2.2。随后，提取的肝药酶的RNA在FastQuant第一链合成试剂盒的作用下转变为cDNA，加入2 x TaqPCR Master Mix和特异性引物以及ddH2O进行cDNA扩增，将5种肝药酶和内参基因CYC用1.2%琼脂糖凝胶电泳进行分离辨认，在凝胶成像系统中对各个条带亮度进行测定，计算CYP1A2，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6，CYP2E1和CYC基因扩增条带表达量像素灰度值比值[3]。

2.4 数据处理及统计分析

3 结果

3.1 甘草-黄芪及单药对大鼠肝脏5种肝药酶mRNA基因表达的影响

与空白对照组比，甘草、甘草-黄芪对CYP1A2 mRNA的表达具有显著的上调作用(P＜0.05)，而黄芪具有上调趋势,结果见图1;甘草、黄芪、甘草-黄芪CYP2C19 mRNA的表达都具有显著的下调作用(P＜0.01)，结果见图2;各组对CYP2D6 mRNA的表达无影响，结果见图3；各组对CYP2E1 mRNA的表达都具有显著的上调作用(P＜0.01)，结果见图4；甘草、黄芪、甘草-黄芪对CYP2C9 mRNA的表达都具有显著的下调作用(P＜0.05)，结果见图5。

图1 甘草-黄芪以及2味单药对大鼠肝脏CYP1A2酶mRNA表达影响（±s，n=5）Fig.1 Effects oflicorice–astragalus and its two componts drugs onmRNA expression of CYP1A2 enzyme in rat liver（±s，n=5）

图2 甘草-黄芪以及2味单药对大鼠肝脏CYP2C19酶mRNA表达影响（±s，n=5）Fig.2 Effects of licorice–astragalus and its two componts drugs on mRNA expression of CYP2C19 enzyme in rat liver（±s，n=5）

图3 甘草-黄芪以及2味单药对大鼠肝脏CYP2D6酶mRNA表达影响（±s，n=5）Fig.3 Effects of licorice–astragalus and its two componts drugs on mRNA expression of CYP2D6 enzyme in rat liver（±s，n=5）

图4 甘草-黄芪以及2味单药对大鼠肝脏CYP2E1酶mRNA表达影响（±s，n=5）Fig.4 Effects of licorice–astragalus and its two componts drugs on mRNA expression of CYP2E1 enzyme in rat liver（±s，n=5）

图5 甘草-黄芪以及2味单药对大鼠肝脏CYP2C9酶mRNA表达影响（±s，n=5）Fig.5 Effects of licorice–astragalus and its two componts drugs on mRNA expression of CYP2C9 enzyme in rat liver（±s，n=5）

4 讨论

药对是中医用药的的常见方式，药对有的是来源于古代经典名方的配伍，也可以是现代医家的临床经验的总结，药对在用药过程中可以单用，也是某些复方的组成单位。甘草和黄芪药对既可以单独成方“黄芪甘草汤”，也可以和其他药物配成复方，不同药物配伍使用的过程中会发生相互作用，其中一种可能是对肝药酶产生诱导或抑制作用，从而使药物的疗效和损害作用产生影响，研究药物对肝药酶的影响可以为临床高效低毒用药提供参考。

本研究从对肝药酶活性、mRNA表达的层面来阐述甘草、黄芪配伍对CYP450酶的影响。结果显示，甘草-黄芪能诱导CYP1A2酶和CYP2E1酶，抑制CYP2C19,CYP2C9酶。因此，如果治疗过程中需要合用黄芪甘草汤或含有甘草-黄芪药对的复方时，要注意药物的减量或增量，提高药物的治疗效果，降低药物治疗的不良反应发生率。