尿石康颗粒提取工艺的研究

赵天宇，赵凡荻，王法宇，孟宪峰，佟志刚，李庆杰,*

（1.长春中医药大学，长春 130117；2.北京医药集团职工大学，北京 100079；3.长春中医药大学附属医院，长春 130021）

尿石康颗粒是由金钱草、莱菔子、牛膝、赤芍等中药经提取制得的颗粒剂。本方剂是根据中国历代医家的大量临床实践经验和现代药物标准所研究出的临床经验方，主要针对于输尿管镜术后患者具有缓解病症、降低血尿、缩减住院时限、降低残石率的效果[1]。本研究拟采用颗粒剂代替临床应用时的汤剂，其显著优势不仅在于汤剂吸收快，显效迅速[2]，可以使本方中各类药物的提取效率提高，从而加强尿石康颗粒的产品质量以及经济效益。还可以保证在药材前处理和提取工艺不变的基础上，对尿石康方中药材的提取工艺进行优化，以确定最佳的提取条件。

1 仪器和试药

1.1 仪器

岛津高效液相色谱仪LC-20A（日本岛津株式会社）；电子天平赛多利斯BSA224S-CW(220g)（广州市深华生物技术有限公司）。

1.2 试药

金钱草、甘草等十二味药材均购于长春市宏检大药房；槲皮素对照品（批号VIP(IR)113901，纯度HPLC≥98%），山奈酚对照品（批号VIP(AL)079，纯度HPLC≥98%）购于四川省维克奇生物科技股份有限公司；甲醇为色谱纯（购于美国菲世尔公司），其他试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 水煎煮工艺条件的考察

影响水煎煮法提取药物的原因主要分为三个，分别为：煎煮次数、煎煮时间、加水用量[3]。故使用正交表L9(34)设计试验，每个因素三个水平,详见表1。

表1 水煎煮的因素水平表

考察指标：以醇溶性浸出物量槲皮素、山奈酚加权后的综合评分为考察指标。

2.2 正交试验方法

称取9份2倍于本方用量的原药材饮片（每份174）。照影响因素水平表的条件，对药材按顺序实施了下列实验过程，包括：过滤、收集提取液、减压浓缩并干燥，最后称重。测定干浸膏重量和出膏率。

2.3 醇溶性浸出物测定方法

按照2020版《中国药典》四部通则下，对醇溶性浸出物检验法的主要内容进行了操作。

2.4 槲皮素、山奈酚的含量测定

色谱条件：以Dima C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）为固定相；通过对甲醇-0.1%磷酸水溶液（60∶40）[4]，甲醇-0.2%磷酸水溶液（65∶35）[5]，甲醇-0.4%磷酸水溶液[6]，甲醇-0.4%磷酸水溶液（50∶50）[7]，乙腈-0.1%磷酸水溶液[8]等不同的流动相体系进行考察，当甲醇-0.4%磷酸水溶液(50∶50)作为流动相时，出峰的峰型及对称性好，故以此为流动相；流速1.0 ml/min；进样量10μl；检测波长360 nm，柱温25℃。

对照品溶液的制备：在精密称量后的适量槲皮素、山奈酚对照品中，加一定量甲醇制得槲皮素、山奈酚对照品溶液，要求浓度为0.005mg/ml和0.02mg/ml。供试品溶液的制备：取供试品颗粒研细，称取1.5g，加80%甲醇50ml，然后称重。再加热回流1h，放冷，再称定重量后，用80%甲醇补足，摇匀，再滤过。精密量取续滤液25ml，精密加入盐酸5ml，90℃水浴加热水解1h，取出，迅速冷却。转移至50ml容量瓶，用80%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液做为供试品溶液。

测定方法：分别在液相色谱仪中加入精密吸取的对照品溶液与供试品溶液各10μl，得出结果后按下面公式计算槲皮素、山奈酚的转移率。

转移率%=A2/A0×C0×D÷E×F÷W1÷Y÷1000×100，其中：A2为供试品峰面积；A0为对照品峰面积；C0为对照品溶液浓度（mg/ml)；D为供试品液总体积（ml）；E为供试品称样量（g）；F为每组正交实验样品得到的干浸膏重量（g）；W1为每组正交实验样品中金钱草药材投药量（g）；Y为金钱草药材中槲皮素、山奈酚含量（%）。

线性关系的考察：分别吸取容量梯度为2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、15.0μl，浓度为0.005mg/ml、0.02mg/ml的对照品溶液，通过高效液相色谱仪进行含量分析。测定该容量下的峰面积，并将对应容量下的色谱图进行记录。以槲皮素、山奈酚进样量为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，求得标准曲线，并计算回归方程。得y=21978x-1323.8.R2=1,y=66673x-4294.6.R2=1。结果表明，当进样量在0.008～0.06μg之间时，槲皮素进样量与对应的峰面积之间，有良好的线性关系。当进样量在0.04～0.3μg之间时，山奈酚进样量与对应的峰面积之间，具有良好的线性关系。

以出膏率占40%，转移率各占30%进行加权，以醇溶性浸出物、槲皮素、山奈酚转移率和综合评分为指标进行分析，计算正交试验结果。

3 实验结果

3.1 正交试验结果（表2、表3、表4）

表2 正交试验数据及综合评分

表3 正交试验[L9(34)]及结果

表4 方差分析结果表

通过表4（方差分析）和表2（直观分析）可知，以综合评分为指标，因素A（加水量）无显著性、因素B（提取时间）无显著性，因素C（煎煮次数）无显著性。结合吸水率实验同时兼顾节能的原则，确定将A3B2C2作为最佳的提取条件组合，即加水煎煮2次，第一次加方中原药材饮片10倍量的水，第二次加方中原药材饮片8倍量的水，每次2h。

3.2 工艺验证试验

按照表4试验结果，分别考量了3种不同的提取条件组合后，以10倍、8倍于方中原药材饮片的加水量煎煮二次，2h/次。验证结果表明，各工艺之间未见显著性差异。确定最优提取工艺为：加水煎煮2次，第一次加水量为方中原药材饮片的10倍，第二次加水量为方中原药材饮片的8倍，提取时间为2h/次。

4 结论与讨论

4.1 结果

本研究通过正交试验法充分考虑煎煮次数、煎煮时间、加水用量影响煎煮效果的三个因素之间的相互影响，进行探究，以出膏率、槲皮素、山奈酚转移率和综合评分为指标进行分析，以充分寻求优势区间范围。通过试验操作所得出的数据分析，并结合产品使用的方便和高效特性，最终确定最优提取工艺是：分别添加10倍量和8倍量的水，煎煮2次，每次时间2h。

4.2 讨论

中药方剂的组成药物种类繁多，成分复杂，其疗效大多是方中诸多中药共同作用的结果。本文通过单因素考察，确定了影响尿石康方中各药物提取效率的主要因素，采用正交试验探索出了最佳提取工艺条件。但在生产时对原料药物采用的传统水煎煮提取方式，普遍存在有效成分提取率低，杂质含量高，水煎液久放易变质等弊端。所以是否可用乙醇代替水作为提取溶剂对药物进行提取，不仅可以增加药材的提取效率，而且还可节约药材用量的同时保持药效，达到节约药材资源的目的。所以进一步改进的试验思路仍有待于研究。此外，本试验仅对水煎煮过程中的提取工艺进行了优化，而在中药颗粒剂后续加工过程中，水煎液提取物仍需涉及诸多工艺流程。包括提取液的纯化，辅料的选择，制软材时软材的软硬程度，制粒方法的确定，以及最后干燥的温度等相关颗粒剂后续加工流程并未涉及，所以仍需进一步研究探讨。

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