藏木香中木香烃内酯、去氢木香内酯含量测定方法的建立

欧霞，莫歌，宗咏花，林朝展

（1.西藏藏医药大学，拉萨 850000；2.广州中医药大学，广州 510000）

藏木香，藏文名“玛奴”，亦为土木香，本为种在西藏及新疆地区以“土木香”之名作木香药用，为菊科植物总状土木香Inula racemosa Hook.f.的干燥根，是藏医常用药材之一。其味甘、辛、苦，性温，具有健脾和胃、行气止痛、安胎的功效，用于治疗慢性胃炎、胃肠功能紊乱、肋间神经痛、胸壁挫伤和岔气作痛、胎动不安等症[1-3]。本实验建立藏木香中木香烃内酯、去氢木香内酯含量测定方法，为藏木香的开发利用、鉴别等提供依据。

1 仪器与试药

实验室专用超纯水机Millipore（德国Merck公司）；十万分之一天平Denver TB-25（北京丹佛仪器有限公司）；安捷伦高效液相色谱仪Agilent 1260 Infinity（美国安捷伦公司）；Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱；电炉等。藏药木香6批（由西藏藏医药大学提供）；标准品木香烃内酯（纯度99.56% HPLC，批号MUST-18101308），标准品去氢木香内脂（纯度99.20%HPLC，批号MUST-18101301）由成都曼斯特生物科技有限公司和中国科学院成都生物研究所研制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：甲醇（B）-水（A），洗脱梯度0～10 min 10%～73%B，10～20 min 73%～78%B，20～25 min 78%～85%B，25～30 min 85%～100%B；流速0.6 mL/min；检测波长：225 nm；柱温箱25℃；进样量15μL。理论塔板数按照木香烃内酯、去氢木香内脂计算应不低于9000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称定木香烃内酯标准品5.43 mg，去氢木香内脂标准品5.41 mg，置于10 mL容量瓶中，加入甲醇至刻度线，摇匀，制得对照品储备液。

2.3 供试品溶液的制备

木香超声提取供试品制备：精密称定药材粉末约2 g，加入100倍量的甲醇，浸泡0.5 h后，超声提取40 min取出，过0.22 μm微孔滤膜过滤，取续滤液。

2.4 系统适应性试验

采用色谱工作站ChemStation软件处理系统适应性（仪器性能）数据报告。理论塔板数以木香烃内酯计算分别为：23043、23134、23541、23697、24222和24248，以去氢木香内脂计算分别为40846、41797、42180、43001、43256和44118，均大于9000，符合要求；木香烃内酯特征峰分离度均大于8，去氢木香内脂分离度均大于3；木香烃内酯、去氢木香内脂信噪比均大于100，符合定量检测要求。详见图1。

图1 木香烃内酯、去氢木香内脂对照品（A）和藏木香药材（B）HPLC色谱图

木香烃内酯（RT=25.904）、去氢木香内脂（RT=27.794）

2.5 线性关系及方法学考察

2.5.1 线性关系

精密吸取对照品溶液，稀释成250、125、62.5、31.3、15.63、7.81μg/mL；依选定的色谱条件分别进样测定，以峰面积（y，mAU）对进样量（x，μg）进行线性回归。回归方程分别为：木香烃内酯y=1295.9x+72.756（n=7），γ=0.9999，线性范围0.117 μg～7.5 μg；去氢木香内脂y=1787.9x+115.4（n=7），γ=0.9998，线性范围0.117 μg～7.5 μg。2.5.2精密度试验

取上述对照品溶液，按照“2.1”项下设置的色谱条件连续进样6次，分别记录色谱图，计算可得木香烃内酯、去氢木香内脂RSD分别为0.18%、0.32%，表明所用仪器在设置的条件下精密度良好。

2.5.3 重复性试验

取木香待测样品6份，按照“2.3”项下的方法制成供试品溶液，按照“2.1”项下设置的色谱条件进样测定，计算可得木香烃内酯、去氢木香内脂RSD分别为0.94%和1.43%，表明该方法重复性良好。

2.5.4 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，在室温下放置0、2、4、8、12、24 h后进行测定，计算可得木香烃内酯、去氢木香内脂RSD分别为0.49%和0.79%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.5.5 加样回收率试验

取已知含量的供试品（含木香烃内酯和去氢木香内脂）样品共6份，分别精密称定，按照“2.3”项下的方法制成供试品溶液。分别精密称定木香烃内酯和去氢木香内脂若干，加入上述供试品溶液中，按照“2.1”项下设置的色谱条件进样测定，计算回收率。详细数据见表1。

表1 加样回收率试验结果（n=6）

2.6 样品测定结果

依照已确立的方法进样测定峰面积，代入线性回归方程计算木香烃内酯、去氢木香内脂含量，结果见表2。

表2 藏木香药材中木香烃内酯、去氢木香内脂含量测定结果（n=6）

3 讨论

本实验在系统分析文献及前期化学成分研究的基础上，采用HPLC方法对藏木中木香烃内酯、去氢木香内脂含量进行检测。结果显示在木香烃内酯和去氢木香内脂含量在木香药材中分别为3.203%和1.882%，二者总量为5.08%。根据2020版中国药典一部（药材与饮片）木香【含量测定】下规定，以甲醇-水为流动相，检测波长225 nm，木香药材中木香烃内酯（C15H20O2）和去氢木香内酯（C15H18O2）的总量不得少于1.8%，川木香【含量测定】下规定以甲醇-水为流动相，检测波长225 nm，木香药材中木香烃内酯（C15H20O2）和去氢木香内酯（C15H18O2）的总量不得少于3.2%。

实验结果表明藏木香中木香烃内酯和去氢木香内酯的总量高于木香和川木香。表现出极高的药用价值和经济价值，为今后藏木香的开发利用、鉴别供科学依据。