使用金标免疫层析法检测儿童腹泻粪便标本轮状病毒的结果分析

何达辉

深圳龙岗区第三人民医院检验科(深圳 518100)

小儿腹泻是临床常见儿科疾病，该病严重影响患儿的身心健康。腹泻的病因呈多样化复杂性，如若未及时进行处理，极可能转变为慢性腹泻，同时还会伴有发育不良、营养不良等并发症的发生，严重者甚至危及生命[1-2]。轮状病毒(rotavirus，RV)是一种双链核糖核酸病毒，主要通过感染患儿的小肠上皮细胞，造成的小儿腹泻，临床主要表现为急性肠胃炎，多以重症腹泻为主，据相关统计发现全球大约每年有33～59万儿童因轮状病毒致死[3]。目前，临床上仍然缺乏较为直接而又有效的治疗方法，故积极开展预防和控制措施对该病具有重要意义[4]。轮状病毒的检测方式众多，如金标免疫层析法(gold immunochromatographic assay, GICA)、免疫荧光法、免疫电镜法、核酸聚丙烯胺凝胶电泳法、酶联免疫吸附法等[5-7]，检测方法各有优缺点，但早期诊断轮状病毒漏诊率较大。为寻求流行病学特征，本文中现将轮状病毒的检测结果进行分析汇总。

1 资料与方法

1.1 资料来源

资料来源于本院2020年1月—2021年1月收治的86例儿童腹泻者的粪便标本，其中男49例，女37例；年龄2个月～5岁，平均年龄(2.58±0.5)岁。其中74例患儿入院时即出现轮状病毒的症状，表现为腹泻、发热、腹痛，常伴有呕吐，而且患儿的粪便呈现蛋花样，少部分病例患儿出现等渗性脱水。

1.2 仪器

仪器选取北京万泰生物科技有限公司提供的A群轮状病毒胶体金检测试剂盒，主要组成成分：检测卡、铝箔袋、干燥剂、样本稀释管。检测卡主要成分：塑料卡、塑料底板、吸水滤纸、硝酸纤维素膜、金垫，样本稀释管内样本稀释液，含NaCl的稀释液。

1.3 金标免疫层析法

1.3.1 检测方法

试剂盒以双抗体夹心法为主，打开标本收集器，采用盖子上附带的取标本棒挑取粪便标本，大约60 mg粪便样，如粪便稀薄可采取塑料吸管进行取样，大约50 mL样本量放置于收集器内，加入9倍生理盐水稀释后混匀，离心后取上层粪便清液，将粪便上清液滴入试剂条内，10 min后观察结果。如果粪便样本中含有A群RV，则检测卡会出现一条红色线，此状况为阳性，如果未发现含有A群RV，则检测卡内不会有变化，此状况判为阴性。

1.4 统计学分析

文中统计学分析以SPSS 20.0统计学软件进行处理，计数资料采用百分比表示，以P<0.05表示有统计学差异。

2 结 果

2.1 金标结果与RT-PCR结果比较

86例儿童腹泻感染经金标免疫检测为阳性者有80例；同时将86例粪便标本送往本市疾控中心采用RT-PCR检测验证有70例阳性，其中合并感染诺如病毒、星状病毒、腺病毒各占9.30%(8例)、17.44%(15例)、24.42%(21例)。RT-PCR检测出轮状病毒阳性率为81.39%，金标免疫检测出轮状病毒阳性率为93.02%，两种检测方法相比，金标免疫检测结果其准确度更高。

2.2 年龄与季节的构成比

由表1可见，年龄构成比中，1岁以下的婴幼儿为31例，占38.75%，较为多见，其次为1岁、2岁的儿童，各占23.75%、25.00%。季节性以秋季和冬季为轮状病毒的高发期，11-12月份36例，占45.00%，1-2月、9-10月18例、16例，占22.50%、20.00%。

表1 年龄与季节的构成比 (n,%)

2.3 不同性别患儿的轮状病毒检测情况

经研究发现，男童检测RV阳性为45例，占56.25%，女童检测RV阳性为35例，占43.75%，男女性别中阳性率比较，经统计学分析无差异性(χ2=2.500,P>0.05)。

3 讨 论

肠道不仅仅是人体的消化系统，而且还是人体重要的免疫器官。在婴幼儿时期小儿腹泻最为常见，也是急性胃肠道紊乱性疾病，主要以腹泻、脱水等症状为主，小儿腹泻的发病机制复杂多样化，因个体差异又存在明显的不同，如有患儿发生牛奶过敏导致的腹泻，还有患儿因胰岛素功能发生障碍导致的腹泻。婴幼儿多是因为消化道尚未发育成熟，正常肠道菌群防御能力尚未建立完全，另人工喂养也是该病的易感因素[8]。婴幼儿腹泻的首要考虑因素是RV感染，在临床又称之为婴幼儿秋季腹泻，常伴有大便性状的改变和大便次数增加，因粪口为RV的主要传播途径，主要感染小肠上皮细胞引发腹泻，患儿发病后潜伏期一般为1～3 d，如未及时处理，极易诱发更多的并发症，如消化道感染、中毒性感染、营养不良等，影响患儿的身心健康[9]，更严重者甚至造成患儿的死亡。大多数患儿发病因素均因手接触到污染物或者受污染的食物直接侵袭肠道，加之身体抵抗力较弱，最后导致发生腹泻。RV一旦侵袭患儿的胃肠道功能，则极易损伤肠道的功能和结构性，导致胃肠道功能紊乱，最终造成腹泻，其病程时间多在一周左右，如不及时治疗，则会加重患儿的脱水症状，更严重者甚至威胁到患儿的生命，故早期实施有效的诊断和治疗至关重要。

GICA是一种新型的免疫检测技术，主要以胶体金标为示踪物。本文中86例儿童腹泻感染经金标免疫检测为阳性者80例；同时本市疾控中心采用RT-PCR检测验证阳性者70例，其中合并感染诺如病毒、星状病毒、腺病毒各占9.30%(8例)、17.44%(15例)、24.42%(21例)。RT-PCR检测出轮状病毒阳性率为81.39%，金标免疫检测出轮状病毒阳性率为93.02%，两种检测方法相比，金标免疫检测结果准确度更高，值得在医院内长期使用。80例阳性率者在年龄构成比中发现，主要以5岁以下的儿童居多，其中1岁以下的婴幼儿为31例，占38.75%，较为多见，其次为1岁、2岁的儿童，各占23.75%、25.00%。其主要原因是婴幼儿年龄较小，自身的免疫功能没有完全发育成熟，加之肠道负荷过重，极易发生感染，但随着儿童的成长，年龄越大，其发病的病例数量也是越来越少。 消化道的感染是RV 的主要感染途径，而且多发生于寒冷的季节[10]，本文中研究发现，秋季和冬季为高发期，主要为11-12月份38例，占44.19%，其次是1-2月、9-10月18例、16例，占22.50%、20.00%。炎热的夏季不利于RV生存，RV在秋冬季节较为活跃，可通过污染的水、食物、衣物、玩具等间接传播，故应加强冬季对儿童的保护措施，注意卫生，养成饭前便后勤洗手的好习惯[11-14]。文中男女性别比未见明显统计学差异。

GICA于八十年代初期出现，由科学家Taylov和Faulk发明，其核心技术就是以相同条状纤维层析，使样品标记物发生免疫反应。免疫层析技术按原理可分为两大类，第一类以酶为标记物，用于吗啡、茶碱等小分子类药物检测，第二类以乳胶颗粒、胶体金等着色标记物，根据显色条带进行定量。胶体金免疫层析法主要用于检测病毒抗原-抗体的标记，以胶体金为标记物，目前在临床被广泛应用，近几年也广泛应用于药物残留、寄生虫、早孕等各项检测中，属于新型的免疫检测技术。该类方法其操作简单，而且成本较低，只需几分钟就可取得结果。本文中86例儿童腹泻感染经金标免疫检测有80例为阳性，阳性率为93.02%。目前金标免疫也被广泛应用于临床各种免疫学的检测中。由此可见，金标免疫层析法有利于早期诊断小儿腹泻，临床推广性较强。

目前，我国临床上尚未将轮状病毒的疫苗列为计划性免疫，对于防治轮状病毒的措施首选为口服接种疫苗，通过吸管吸取疫苗，每人口服剂量为3 mL,忌开水送服。口服疫苗可有效降低感染率[15-18]。6～18月龄是轮状病毒的高发年龄，但据相关资料显示，儿童接种率并不高，可能与父母对儿童的防护意识有关。轮状病毒属于二类疫苗，大多数家长仅了解一类免费强制性的疫苗，往往忽略了二类，而且该类疫苗还有时间限制，许多家长往往在打与不打间做挣扎，导致错过最佳的接种时间点。故应多开展关于预防接种轮状病毒的宣传教育工作，降低疾病的感染率。虽多数病例仅为轮状病毒的感染，但还应更加重视合并有其他病原菌的感染[19-25]。如果暂时未接种疫苗，应该重视手的卫生习惯，大多数孩子都有吃手的小习惯，应该告知家长将其手洗干净，让病毒远离。全国儿童预防接种日是每年的4月25日，世界卫生组织建议，应从6周龄开始尽早进行轮状病毒疫苗的接种，做到早预防早保护。总之明确病原菌，加强防护并采取及时有效的治疗措施，可明显提高患儿的治疗效果。

综上所述，儿童在幼儿期就应饭前、便后勤洗手，讲卫生，勤通风，勤剪指甲，而且家长也应重视对其餐具的的消毒，从而减少儿童腹泻的发生率，加强防护工作。轮状病毒多以5岁以下的婴幼儿为主，秋冬季节较为常见，使用金标免疫层析法检测儿童腹泻粪便标本轮状病毒，其操作简单，可快速准确地检测出轮状病毒。