炉甘石乳膏中苯酚的含量测定研究

徐伟娜，刘葵葵，颜 红，刘 林，杨清华

（山东省药学科学院 山东省化学药物重点实验室，山东 济南250101）

炉甘石为临床常用的外用药，其主要成分为碳酸锌及少量的氧化钙、氧化镁、氧化铁等。炉甘石最常见的剂型为洗剂，是《中国医院制剂规范》收载的品种，已有长时间的临床应用，在治疗皮肤瘙痒、溃疡和红肿方面有良好的效果[1-3]。但炉甘石洗剂由于含药粉末较多，放置易出现沉淀、结块、不易摇匀等现象，影响药物分剂量的准确性和临床疗效。为此可将其制成凝胶或乳膏，使其具备稳定性良好，易于涂布，方便携带等优点。苯酚是炉甘石乳膏中重要的成分之一，可起到抑菌、杀菌、止痒作用。迄今为止，炉甘石乳膏中苯酚的含量测定未见报道。本文研究炉甘石乳膏中苯酚的提取方法，建立高效液相色谱法（HPLC）测定炉甘石乳膏中苯酚的含量。测定了3批自制样品中苯酚的含量，并与原研产品含量进行比较。该方法简单、方便，准确性高，可为炉甘石乳膏中苯酚的含量测定提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津高效液相色谱仪（日本岛津）；BT125D电子天平（Sartorius）；台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；KQ200B型超声波清洗器（昆山超声仪器公司）。

1.2 试药

苯酚对照品（国家标准物质中心，批号A1705109）；甲醇（国药集团）；炉甘石乳膏原研产品（批号：1L，The Boots Company PLC Nottingham）；炉甘石乳膏（自制，批号171101，171102，171103）；炉甘石乳膏阴性对照（自制，不含苯酚）；水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

采用Agilent XDB C18（250 mm × 4.6 mm，5 μm）色谱柱，以甲醇-水（40:60）为流动相，流速1.0 ml/min，检测波长271 nm，柱温30 ℃，进样体积50 μl。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取苯酚对照品20 mg，精密称定，置入100 ml量瓶，甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为贮备液；精密移取贮备液2.5 ml至100 ml量瓶，流动相定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品约0.5 g，精密称定，置入具塞锥形瓶，精密加入流动相 40 ml，超声5 min，至软膏在溶液中分散均匀。3000 r/min离心5 min，取上清，0.45 μm滤膜过滤，精密量取续滤液2 ml至10 ml量瓶，流动相定容至刻度，摇匀。

2.2.3 阴性对照液的制备 取炉甘石乳膏阴性对照约0.5 g，精密称定，按2.2.2项方法操作，制备阴性对照液。

2.3 方法学试验

2.3.1 专属性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照液各50 μl，注入液相色谱仪，结果见图1～3。结果表明，基质峰与溶剂均不干扰苯酚的测定。

图1 对照品溶液HPLC图谱

图2 供试品溶液HPLC图谱

图3 阴性对照溶液HPLC图谱

2.3.2 检测限和定量限 精密称取苯酚适量，甲醇溶解，加流动相定量稀释成不同倍数的系列溶液，按2.1项色谱条件测定。测得苯酚的定量限为3.12 ng（S/N≈10），检测限为0.94 ng（S/N≈3）。

2.3.3 溶液稳定性试验 取对照品溶液和供试品溶液分别于0，2，4，6，8，12，18，24 h进样，考察对照品溶液和供试品溶液的稳定性，结果表明，24 h内对照品和供试品溶液均稳定，峰面积的RSD分别为1.21 %和0.78 %。

2.3.4 线性试验 分别精密移取2.2.1项下对照品贮备液1，2，2.5，3，5，6 ml至100 ml量瓶，流动相定容至刻度，摇匀，以浓度对峰面积做线性回归，得回归方程：A=43 439x-6628.8，r=0.9993。结果表明，苯酚浓度在2.058～12.348 μg/ml范围内线性关系良好。

2.3.5 精密度实验 取2.2.1项下对照品溶液，连续进样6次测定，计算苯酚的峰面积RSD为0.70 %，表明仪器精密度良好。

2.3.6 重复性实验 取供试品（批号171101）约0.5 g，精密称定，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，平行配制6份，分别取50 μl注入液相色谱仪，考察方法的重复性，计算含量RSD为1.02 %，表明方法重复性良好。

2.3.7 中间精密度实验 取供试品（批号171101）约0.5 g，精密称定，按2.2.2项方法制备供试品溶液，平行配制6份，分别取50 μl注入液相色谱仪，外标法计算苯酚含量；取同一批号（批号171101）样品约0.5 g，精密称定，另一名分析员独立建立系统，在不同仪器、不同日期进行含量测定研究。按2.2.2项下方法平行配制6份供试品溶液，分别取50 µl注入液相色谱仪，外标法计算苯酚含量。12次进样结果的RSD为1.52 %，表明含量测定的中间精密度良好。

2.3.8 回收率试验 取3份已知苯酚含量的炉甘石乳膏（批号171101），每份约0.5 g，精密称定，每份分别精密加入含1 mg/ml的苯酚溶液0.8，1.0，1.2 ml，按2.2.2项方法制备供试品溶液，每个浓度平行制备3份溶液，按2.1项色谱条件测定苯酚含量，并计算加样回收率。苯酚的平均回收率为100.2 %，RSD为0.98 %。

2.3.9 耐用性试验 比较不同厂家的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（Agilent XDB 250 mm×4.6 mm，5 μm；Kromasil 250 mm×4.6 mm，5 μm；Alltima 250 mm×4.6 mm，5 μm），不同的色谱柱对苯酚含量测定没有较大影响。微调流动相比例，不同柱温（25，30，35 ℃），不同流速（0.8，1.0，1.2 ml/min），苯酚的保留时间略有变化，对苯酚含量测定没有较大影响。乳膏超声提取时间（2，5，8 min）不同，超声提取时间为2 min，乳膏分散不均匀，苯酚不能从乳膏中充分提取；超声提取时间为5 min和8 min，苯酚可达到充分提取，因此选择超声提取时间为5 min。

2.3.10 样品测定 分别取自制样品和原研产品，按2.2.2项方法制备供试品溶液，测得3批样品中苯酚的含量分别为2.04，2.07，2.06 mg/g，原研产品的含量为2.02 mg/g，原研产品与自制样品中苯酚含量相差不大，说明本测定方法准确可行。

3 讨论

在炉甘石乳膏中加入苯酚可延长制剂使用的有效期限，保持制剂稳定，同时增强其杀菌、抑菌、止痒作用[4]，但有文献报道苯酚浓度在0.5 %～1.5 %即会对皮肤黏膜有强烈刺激性及腐蚀性[5]，需对苯酚浓度进行监测，防止苯酚浓度过高对皮肤产生损害。苯酚含量的测定方法很多，2015版中国药典中苯酚含量测定方法为滴定法，文献报道有紫外分光光度法[6-7]、毛细管气相色谱法[8]及HPLC[9-12]等。采用滴定法测定含苯酚制剂的含量，操作复杂、花费时间长，不易判断终点颜色变化；炉甘石乳膏基质成分复杂，毛细管气相色谱法不适合本品中苯酚的含量测定。我们采用HPLC测定乳膏中苯酚的含量，方法准确、简单。

根据苯酚的特性，我们采用流动相溶液经超声提取乳膏中的苯酚，超声使乳膏均匀分散，苯酚溶解在甲醇-水溶液中。本法操作简便、快捷，准确性高、重复性好，基质对苯酚含量测定无干扰。因此，可作为炉甘石乳膏中苯酚含量测定的方法。