大鼠终体重对尿促性素效价测定的影响

李 惠，丁晓爽，田恩圣*

（淄博市食品药品检验研究院，山东 淄博 255086）

尿促性素（menotropin）为绝经妇女尿中提取的促性腺激素，主要含卵泡刺激性素（folliclestimulating hormone，FSH）与黄体生成素（luteinisting hormone， LH），主要通过补充患者促性腺激素不足以促进卵泡成熟，刺激排卵及加快黄体发育，临床用于治疗不孕不育症已有40多年历史[1-3]。研究认为尿促性素较大剂量使用易导致多胎妊娠和卵巢过度刺激综合征的发生，主张尽量降低尿促性素的用量[4-5]。因此尿促性素生物效价的准确测定，对其临床用药有重要的指导意义。本实验室近两年按《中国药典》2015年版多次测定注射用尿促性素效价，发现大鼠解剖时的终体重可能对其效价测定产生影响。已有文献指出雌性大鼠初始体重对尿促性素中卵泡刺激素效价测定有影响[6]。但未见大鼠终体重对尿促性素效价测定影响的报道。本文对14次尿促性素效价测定数据进行统计分析，探究大鼠终体重对尿促性素效价测定的影响。

1 仪器、材料与动物

1.1 仪器

BT124S型电子天平（赛多利斯）；HCB20002型电子天平（慈溪华徐衡器）

1.2 材料

尿促性素标准品（中国食品药品检定研究院，批号：150524-201504，规格：FSH 247 IU/支，LH 202 IU/支）；注射用尿促性素（烟台东诚北方制药）；牛血清白蛋白（MP Biomedicals，LLC，批号：9651J，CAT号：103703）；氯化钠注射液（辰欣药业）。

1.3 动物

SD大鼠，SPF级，由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供，许可证号：SCXK（鲁）20140007。本单位实验动物使用许可证号SYXK（鲁）20130004。

2 方法

本实验严格按照《中国药典》2015年版四部通则1216 FSH生物测定法和1217 LH生物测定法进行[7]。

2.1 动物分组

大鼠初始体重按要求，应在36～60 g，且相差不得超过15 g。本实验中，为统计的合理性，减小初始体重对终体重的影响，选择初始体重均为37～47 g，相差不超过10 g大鼠的实验数据。

2.2 溶液的配制

FSH溶液按规定，配制为高剂量组（4 IU/ml），中剂量组（2 IU/ml），低剂量组（1 IU/ml），相邻两浓度之比值均为0.5的溶液。LH溶液按规定，配制为高剂量组（10 IU/ml），中剂量组（6 IU/ml），低剂量组（3.6 IU/ml），相邻两浓度之比值均为0.6的溶液。本实验室溶液剂量均使低剂量组卵巢/精囊明显增重，高剂量组卵巢/精囊增重不致达极限。

2.3 效价测定

按规定方法皮下注射后，将动物处死，称重，解剖，摘出卵巢/精囊，称重。以每10 g动物体重的卵巢/精囊毫克数作为反应值，用bs2000生物系统软件中量反应平行线3.3法计算生物效价。实验可靠性测验均通过[F检验：回归项显著（P＜0.01），偏离平行、二次曲线和反向二次曲线不显著（P＞0.05）]，FSH可信限率（FL%）小于45 %，LH可信限率（FL%）小于35 %。

2.4 数据处理

注射用尿促性素为样品组，尿促性素标准品为对照组。为进行数据比较，按以下公式计算相对反应值。

式中反应值为每10 g动物体重的卵巢毫克数/精囊毫克数，对照组的反应值系数为1，样品组的反应值系数为其测得的相应效价。统计14次注射用尿促性素效价测定实验中所有相对反应值，其中大鼠终体重每5 g为一区间，低、中、高3个浓度分别统计，将各体重区间样品组的相对反应值与对照组相对反应值两两进行t检验。若P＜0.05，则表明该体重区间的样品组的相对反应值与对照组的相对反应值差异有统计学意义，该体重区间的大鼠终体重对其生物效价测定有影响。

3 结果

3.1 雌性大鼠终体重对FSH效价测定的影响

结果见表1。由表1可见，雌性大鼠各体重区间样品组的相对反应值与对照品的相对反应值两两进行t检验，差异有统计学意义的组数为8组，占对照品总组数的38.10 %，差异有统计学意义的数量为477只，占对照组总数量的41.41 %，而一般生物测定误差为20 %左右[8]，表明雌性大鼠终体重对FSH的相对反应值有影响。进一步综合分析低、中、高3个剂量，当雌性大鼠终体重为50～55 g和70～75 g时差异均无统计学意义，但70～75 g体重区间的标准差（s）小于50～55 g，个体间变异更小。综上，70～75 g为雌性大鼠卵泡刺激素效价测定的最佳终体重。

表1 FSH效价测定的相对反应值统计表（±s）

表1 FSH效价测定的相对反应值统计表（±s）

注：各体重区间的样品组的相对反应值与对照品的相对反应值两两进行t检验， *P＜0.05。

低剂量（1单位/ml） 中剂量（2单位/ml） 高剂量（4单位/ml）样品组 对照组 样品组 对照组 样品组 对照组n 相对反应值 n 相对反应值 n 相对反应值 n 相对反应值 n 相对反应值 n 相对反应值＜50 7 12.065±2.367 3 10.876±1.702 9 6.796±1.804 3 7.779±1.411 8 6.441±0.917* 3 4.664±0.519 50～55 50 13.702±3.038 9 12.340±1.966 43 8.652±2.877 8 7.087±1.222 45 5.847±1.046 6 5.217±0.899 55～60 98 13.193±2.673 34 12.722±2.249 104 8.923±2.605 27 8.808±1.713 110 6.318±1.235* 34 5.860±0.853 60～65 130 14.516±2.741 36 13.461±3.511 123 9.510±1.946 45 8.894±1.612 129 6.178±1.176* 42 5.671±1.099 65～70 71 14.041±2.595*21 12.562±1.991 76 9.099±2.004*19 8.046±1.092 66 6.282±1.067* 17 5.678±1.163 70～75 21 12.606±2.474 7 11.238±1.155 19 8.113±1.938 6 7.359±0.684 16 5.629±1.132 7 4.621±1.059＞75 7 12.519±1.829*2 8.880±0.227 10 8.017±1.481* 4 5.980±0.889 10 4.041±0.476* 3 3.242±0.296总体重区间 384 13.799±2.767 112 12.688±2.683 384 9.192±1.906 112 8.384±1.627 384 6.124±1.989 112 5.547±1.106大鼠终体重区间/g

3.2 雄性大鼠终体重对LH效价测定的影响

结果见表2。由表2可见，雄性大鼠各体重区间样品组的相对反应值与对照品的相对反应值两两进行t检验，差异有统计学意义的组数为6组，占对照品总组数的28.57 %，差异有统计学意义的数量为410只，占对照组总数量的47.45 %，而一般生物测定误差为20 %左右[8]，表明雄性大鼠终体重对LH的相对反应值有影响（中剂量组对照组55 g以下动物仅1只，未进行统计）。进一步综合分析低、中、高3个剂量，当雄性大鼠终体重为55～60 g和75～80 g时差异无统计学意义，但75～80 g体重区间的标准差（s）均小于55～60 g，个体间变异更小。综上，75～80 g为雄性大鼠LH效价测定的最佳终体重。

表2 LH效价测定的相对反应值统计表（±s）

表2 LH效价测定的相对反应值统计表（±s）

注：各体重区间的样品组的相对反应值与对照品的相对反应值两两进行t检验， *P＜0.05，**P＜0.01

低剂量（3.6单位/ml） 中剂量（6单位/ml） 高剂量（10单位/ml）样品组 对照组 样品组 对照组 样品组 对照组n 相对反应值 n 相对反应值 n 相对反应值 n 相对反应值 n 相对反应值 n 相对反应值＜55 4 1.061±0.147 2 0.951±0.049 3 0.876±0.071 1 0.731 3 0.571±0.015 2 0.590±0.011 55～60 31 0.961±0.150 12 0.881±0.130 25 0.741±0.135 8 0.664±0.113 16 0.575±0.061 6 0.518±0.087 60～65 65 0.952±0.170* 21 0.849±0.146 50 0.706±0.126 13 0.661±0.093 49 0.545±0.071** 19 0.477±0.074 65～70 84 0.882±0.148* 21 0.795±0.105 90 0.706±0.111 31 0.676±0.108 97 0.535±0.066** 25 0.490±0.072 70～75 57 0.935±0.159** 15 0.812±0.131 58 0.678±0.118 17 0.659±0.113 58 0.515±0.078* 16 0.466±0.085 75～80 33 0.910±0.130 9 0.838±0.140 42 0.669±0.081 11 0.622±0.042 44 0.502±0.054 13 0.471±0.045＞80 14 0.902±0.150 4 0.760±0.051 20 0.672±0.136 3 0.556±0.073 21 0.488±0.057 3 0.489±0.056总体重区间 288 0.923±0.156 84 0.831±0.128 288 0.697±0.118 84 0.654±0.106 288 0.527±0.070 84 0.484±0.073大鼠终体重区间/g

4 结论

大鼠终体重对尿促性素效价测定有影响，雌性大鼠终体重70～75 g，雄性大鼠终体重75～80 g，为其效价测定最佳终体重，对尿促性素效价测定有指导意义。