自制与原研消旋卡多曲颗粒体外溶出度的对比研究

王 芳，宋 莉，郭 琪，于 亮，刘玉黔，梁大连**

（1. 山东省药学科学院 山东省化学药物重点实验室，山东 济南 250101；2. 青岛市妇女儿童医院，山东 青岛266071）

消旋卡多曲（thiorphan，结构式见图1）是由法国Bioprojet公司开发的一种特异性的脑啡肽酶抑制剂，可延长内源性脑啡肽的抗分泌作用[1]，是目前唯一的抗分泌药。临床作为口服补液或静脉补液的辅助治疗，用于1月以上婴儿和儿童的急性腹泻[2]。

目前，消旋卡多曲颗粒已过专利保护期。在国内，有2家药厂生产，2015年版中国药典增加了该制剂的质量标准。对比该品种2015年版中国药典中的溶出度执行标准和进口药品注册标准JX20070085的溶出条件[3]发现，2015年版中国药典的溶出度执行标准中的色谱条件与有关物质的测定条件相同，均为梯度，而进口药品注册标准JX20070085中的溶出度测定的色谱条件与含量测定的条件相同为等度，通过试验发现HPLC测定本品的溶出度时，只有主成分，没有干扰峰，且主药消旋卡多曲出峰时间较短，因此进口药品注册标准JX20070085中的溶出度测定的色谱条件较简单合理。本研究根据“消旋卡多曲散进口药品注册标准JX20070085”中溶出度的测定方法结合自研制剂的性质优化其溶出条件，以法国Bioprojet公司生产的Tiorfan®作为原研制剂，采用适合本品种的4 种溶出条件进行试验研究，考察自制与原研制剂样品在4 种不同溶出介质：2 % SDS水溶液、0.2 mol/L盐酸溶液（pH 1.2）、pH 4.5和pH 6.8磷酸盐缓冲液中溶出曲线的一致性，为研发出与原研药质量一致性的仿制药及后续该品种的一致性评价奠定基础。

图1 消旋卡多曲的化学结构式

1 仪器与材料

METTLER AE240电子天平，LC-10T 高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司），ZRS-4 智能溶出仪（天津大学无线电厂）。

消旋卡多曲对照品（批号Y0000896，EP），自制品（规格10 mg，批号F20140102）， Tiorfan®（规格10 mg，批号SXN300，法国Bioprojet公司），市售消旋卡多曲颗粒（规格10 mg，批号120911，四川百利药业）。磷酸二氢钾、十二烷基硫酸钠、磷酸氢二钾、（国药集团化学试剂有限公司）、盐酸（天津大茂化学制剂厂），纯净水（杭州娃哈哈公司），甲醇（山东禹王），乙腈（美国Fisher 公司）。

2 溶出度测定方法

2.1 色谱条件

色谱柱：Thermo BDS C18（4.6 mm×250 mm，5 µm）；流动相：水-乙腈-甲醇（体积比40:38:22）；流速：1.0 ml/min；检测波长：231 nm；进样量：20 μl；柱温：30 ℃。

2.2 溶液配制

对照溶液：精密称取消旋卡多曲对照品25.23 mg，置入25 ml量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1 ml，置入100 ml量瓶，用溶出介质稀释至刻度，摇匀，得对照溶液。

供试品溶液：量取经脱气处理的溶出介质2.0 % SDS 1000 ml，置溶出杯内，开启溶出仪使桨板转速稳定在75 r/min，待溶出介质温度恒定在（37±0.5）℃后，取供试品1袋，投入溶出杯内，记时；在60 min取溶液滤过，取续滤液作为供试品溶液。

空白辅料溶液：取除消旋卡多曲以外处方量的其他辅料，按消旋卡多曲制备工艺制成不含消旋卡多曲的阴性制剂。同供试溶液制备项下操作，得空白辅料溶液。

2.3 溶出度测定法

取样品12袋，采用溶出度测定法（中国药典2015 年版四部溶出度与释放度测定）第二法（桨法）的装置，以水1000 ml （含2 % SDS）为溶出介质，转速为75 r/min，依法操作，分别在5，10，15，20，30，45 和60 min取溶液10 ml，同时补液10 ml，滤过，续滤液作为供试品溶液。另取“2.2”项下的对照品溶液。分别精密量取供试品溶液与对照品溶液20 μl注入色谱仪，记录色谱图。计算每袋在不同时间的累计溶出量。

3 方法与结果

3.1 溶出度测定验证（溶出介质：2.0% SDS水溶液）

图2 消旋卡多曲的HPLC 色谱图

3.1.1 专属性考察 分别取溶出介质、2.2项下的空白辅料溶液、对照溶液和供试溶液各20 µl注入液相色谱仪，在2.1项色谱条件下进样分析，记录色谱图。结果表明，辅料和溶出介质对消旋卡多曲出峰无干扰。结果见图2。

3.1.2 线性与范围 精密称取消旋卡多曲对照品25.23 mg，置入25 ml量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；然后精密移取1 ml置入10 ml量瓶，用溶出介质稀释至刻度，作为贮备液；分别精密移取贮备液0.1，0.25，0.5，0.7，1.0，1.2 ml置入10 ml量瓶，用溶出介质稀释至刻度，摇匀，分别精密量取20 μl注入液相色谱仪，分别在2.1项色谱条件下进样分析，记录色谱图。以峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标，进行线性回归，得回归方程：A=13.628C+2.6515，相关系数r=0.9999，结果表明，消旋卡多曲对照品在1.01～12.11 mg/L浓度范围内呈良好线性关系。

3.1.3 重复性试验 取2.2项下的消旋卡多曲对照溶液，在2.1项色谱条件下连续进样6 次，测得消旋卡多曲峰面积RSD为1.6 %（n= 6），结果表明，色谱系统重复性良好。

3.1.4 中间精密度试验 取自研制剂（批号：F20140102）6袋，改变分析设备，按2.3项下溶出度测定法操作，60 min时取样，滤过，精密量取各续滤液20 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算溶出度RSD为1.5 %，表明本法中间精密度良好。

3.1.5 溶液稳定性试验 取溶出条件下60 min溶出液，过滤后，取续滤液作为供试品溶液，在不同时间进样，记录色谱图。另取2.2项下的对照品溶液进样。结果见表1。由表1可见，本品溶出液在24 h内稳定。

表1 溶液稳定性试验结果

3.1.6 准确度试验 按处方量空白辅料9 份，分别精密加入消旋卡多曲对照品（5，7 和10 mg），依照2.2项下供试品溶液的处理方法制备各3 份样品，在2.1项色谱条件下进样分析，记录峰面积，测得消旋卡多曲的平均回收率为100.3 %，RSD为0.7 %（n=9），结果表明，方法准确度良好。

3.1.7 色谱条件变化 取2.2项下的对照品溶液，在确定的色谱条件基础上，考察分别改变流动相比例、流速、柱温、检测波长及色谱柱对测定的影响。结果见表2，由表2可知色谱条件有微小变化时，测定不受影响，表明此方法耐用性良好。

表2 色谱条件变化

3.2 市售及原研制剂溶出度比较

取市售消旋卡多曲颗粒及原研制剂，分别使用2015年版中国药典标准、进口药品注册标准JX20070085和自研标准的溶出条件（见表3），按2.3项下溶出度测定法操作。结果见图3，两者在相同的溶出条件下溶出行为不相似（f2因子＜50）。

表3 消旋卡多曲颗粒溶出度检查方法对比

图3 市售制剂和原研制剂不同溶出度检查方法的溶出曲线对比

3.3 溶出曲线测定和对比结果

3.3.1 自制与原研制剂对比 取自制和原研样品各12袋，按2.3项下溶出度测定法操作，分别各样品，在2.0 % SDS 、0.2 mol/L盐酸溶液（pH 1.2）、pH 4.5和pH 6.8磷酸盐缓冲液1000 ml 为溶出介质中的溶出曲线，按外标法以峰面积计算溶出质量浓度；根据各个时间点12 袋的平均累积释放量（%）分别绘制自制和原研制剂的溶出曲线，见图4。根据《普通口服固体制剂溶出度实验技术指导原则》[4]，采用f2相似因子评价自制与原研制剂溶出曲线的相似性[5-10]，根据文献[11]中相似因子f2的公式计算?自制和原研消旋卡多曲颗粒的f2值，结果见表4。由表4可见，在2 % SDS水溶液、0.2 mol/L盐酸溶液（pH1.2）、pH 4.5和pH 6.8的磷酸盐缓冲液中，相似因子f2均在50～100 内，表明自制和原研消旋卡多曲颗粒在不同介质中的溶出行为一致。

图4 自制消旋卡多曲颗粒和原研消旋卡多曲颗粒在4 种溶出介质中的溶出曲线

表4 自制和原研消旋卡多曲颗粒溶出曲线相似性分析结果

3.3.2 在不同溶出介质下溶出曲线对比 分别取原研及自制制剂，按2.3项下溶出度测定法操作，分别使用0.5 % SDS、1.0 % SDS、2.0 % SDS 3种不同溶出介质测定两者的溶出曲线，并采用相似性f2因子法评价不同溶出介质下自制与原研制剂溶出曲线的相似性。结果见图5。溶出介质为0.5 % SDS、1.0 %SDS、2.0 % SDS时，f2分别为66，68，76。表明不同溶出介质下自制与原研制剂的溶出行为相似（f2＞50）。但本品在0.5 %和1.0 % SDS中溶出过慢，区分能力不高，相比之下2.0 % SDS中溶出比较快，区分能力也比较强，与国外市售对照制剂溶出曲线的相似度较好。

3.3.3 在不同转速下溶出曲线对比 分别取原研及自制制剂，按2.3项下溶出度测定法操作，分别使用50，75，100 r/min 3种不同转速测定两者的溶出曲线，并采用相似性f2因子法评价不同转速下自制与原研制剂溶出曲线的相似性。结果见图5。转速为50，75，100 r/min时，f2分别为53，64，61。表明不同转速下自制与原研制剂的溶出行为相似（f2＞50）。

图5 自制与原研制剂不同溶出介质和转速下溶出曲线对比

4 结论

本实验对自研标准中的溶出条件的测定方法进行方法学验证，结果表明，该方法专属性、耐用性均良好，适合本品的溶出度测定。市售与原研制剂（Tiorfan®）无论用2015年版中国药典标准、或进口药品注册标准JX20070085及自研标准测定，溶出曲线均不一致（f2＜50），两者体内生物利用度不一致的概率也将高达90%[12]。自制与原研制剂样品溶出曲线对比试验研究可见，自制与原研制剂在4 种不同溶出介质中的溶出曲线相似，在不同转速下也相似，提示自制与原研制剂体外溶出行为一致，表明自制制剂处方合理、样品质量稳定可靠。依据新的药品研发标准和要求，对自制制剂做了上述研究，结果表明，自制消旋卡多曲颗粒与原研制剂 “质量一致”。本试验也为本品以后将要进行的一致性评价及人体生物等效性试验提供了参考依据。