丹酚酸B对小鼠的急性毒性试验

凌 真，董登存，李倚云，闻琍毓

(扬州药品检验所，江苏 扬州 225009)

丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)为唇形科鼠尾草属植物干燥的根及根茎，具有活血调经、祛瘀止痛、凉血消痈、清心除烦和养血安神的功效，现代药理学研究表明，丹参具有抗心肌缺血、脑缺血、血栓，改善微循环、促进组织再生及抗菌、抗炎等作用［1］。丹参的有效成分主要分为水溶性和脂溶性，其中水溶性成分中活性较强的有丹酚酸B，是目前研究较多的丹参活性成分之一［2～5］。

目前，对于丹酚酸B的毒性研究方面的文章还较少，本文采用一次性尾静脉注射的方法，考察丹酚酸B对小鼠的急性毒性作用，为后续研究作参考。

1 试验材料

1.1 受试物 丹酚酸 B原料，批号:110620，含量:99.4%，浅黄褐色粉末，由上海医药工业研究院提供。临用前用0.9%的氯化钠注射液配制至所需浓度。

1.2 试验动物 清洁级ICR小鼠(由扬州大学比较医学中心提供，生产许可证号:SCXK(苏)2007－0001)，体重18～21 g，数量70只，雌雄各半;小鼠雌雄分开饲养于屏障环境内(使用许可证号:SYXK(苏)2009－0006)，饲喂小鼠配合饲料(购自南京安立默科技有限公司)，自由饮水和摄食。

1.3 仪器与试剂 CP225D电子分析天平(赛多利斯，德国)，1mL一次性医用注射器(江阴市医疗器械有限公司)，0.9%的氯化钠注射液(江苏亚邦药业集团股份有限公司)。

2 方法与结果

2.1 预试验 探索丹酚酸B原料溶液对小鼠尾静脉注射给药的100%致死量(LD100)和0%致死量(LD0)。结果为丹酚酸B原料溶液的100%致死量为800mg·kg－1，0%致死量为500mg·kg－1。

2.2 正式试验 用丹酚酸B原料溶液作为供试液，按改良寇氏法［6］进行LD50的测定。根据预实验的结果确定正式实验，分为生理盐水对照组和6个剂量组，为500、540、570、600、700和750mg·kg－1。实验动物随机分为七组，每组10只，雌雄各半，根据预试验的结果设计给药剂量，分组。

根据《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则》(以下简称《指导原则》)，给药前，小鼠禁食12 h，自由饮水。实验采用尾静脉单次注射给药方式给药，给药容积为20mL·kg－1，给药时间在30 s完成。4 h内严密观察，第2天起，每天观察2次，连续观察14 d，隔天称量动物体重，记录动物的饮食、外观、行为、分泌物、排泄物、毒性反应和死亡情况。对濒死及死亡动物进行大体解剖，其他动物在观察期结束后进行大体解剖，肉眼观察主要脏器的改变。统计各组小鼠的死亡数，计算LD50值和95%的可信限。

2.3 毒性反应 给药后，部分小鼠在20～30 s即出现活动减少、呼吸急促、抽搐、震颤等症，在注射30 s～2min内死亡，极个别动物在1～24 h内出现死亡。将死亡小鼠进行解剖，肉眼观察小鼠的心、肝、脾、肺、肾等脏器，均未见异常改变。其余小鼠先出现活动减少、呼吸急促等现象，但持续几十秒至1 h后恢复。观察14 d后，除750mg·kg－1组外，各剂量组存活动物体重均有增长，并与生理盐水组基本一致，实验结束后，存活小鼠颈椎脱臼处死，立即剖检尸体，肉眼观察小鼠的心、肝、脾、肺、肾等脏器，均未见异常改变;750mg·kg－1组的仅存活一只动物，体重增加较大，腹腔有部分积液，可能为体重增长较多的原因(见表1)。

表1 丹酚酸B静脉注射小鼠的体重变化

2.4 LD50及LD50的95%可信限 根据动物死亡数，用Bliss法计算半数致死量，LD50=636.8909mg·kg－1，LD50的 95%可信限为:617.2255 ～657.1828mg·kg－1(见表2)。

3 结论与讨论

丹参是临床防治动脉粥样硬化(AS)的常用药物，含有多种有效成分，丹酚酸B是其多种有效成分中的一种，具有很强的抗氧化作用，是目前已知的抗氧化作用最强的天然产物之一，对心、脑、肝、肾等器官均具有重要的药理作用，是目前研究较多的丹酚酸有效成分。

表2 Bliss法计算LD50值

关于丹酚酸B的急性毒性试验结果未见文献报道，对丹酚酸B的毒性研究也较少。本文对丹酚酸B进行了急性毒性试验，结果表明，实验小鼠尾静脉注射过量的丹酚酸B后会出现一定的中毒现象，其半数致死量为636.8909mg·kg－1，LD50的 95% 可信限为 617.2255 ～ 657.1828mg·kg－1。生存的小鼠体重增加与生理盐水组基本相同，将存活小鼠处死后，肉眼观察未见主要脏器病理改变。以上结果显示，丹酚酸B的毒性较低，临床应用比较安全。

由于对丹酚酸B的毒性研究未见报道，本文对丹酚酸B的急性毒性做了初步的研究，对丹酚酸B的进一步研究、开发和临床的安全应用提供一定的参考。

［1］王蓉，愿永芳.丹酚酸B药理作用的研究概况［J］.中医药导报，2011，17(4):130 －132.

［2］汪芸.丹酚酸B对心脑血管疾病药理作用的研究进展［J］.现代中西医结合杂志，2010，19(35):4634 －4637.

［3］林治荣，陈程，田登科，等.丹酚酸A与丹酚酸B抗大鼠心肌缺血再灌注损伤的比较研究［J］.时珍国医国药，2011，22(2):412 －414.

［4］Han X，Liu JX，LI XZ.Salvianolic acid B inhibits autophagy and protects starving cardiac myocytes［J］.Acta Pharmacol Sin，2011，32(1):38 －44.

［5］姜希娟，赵桂峰，卢斌，等.丹参单体对TNF－α诱导大鼠动脉平滑肌细胞MCP－1和IL－1β的影响［J］.中华现代中医学杂志，2006，2(7):583 －586.

［6］徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学［M］.第2版.北京:人民卫生出版社，1991:201.