琥珀酸索利那新对女性膀胱过度活跃症患者生长相关蛋白-43及尿动力学影响研究

黄毅 刘春晓 高虹 邹红东 何江波 陈定华

(1.贵阳市第四人民医院泌尿外科，贵州 贵阳550002；2.南方医科大学附属珠江医院泌尿外科，广东 广州 510515)



琥珀酸索利那新对女性膀胱过度活跃症患者生长相关蛋白-43及尿动力学影响研究

黄毅1刘春晓2高虹1邹红东1何江波1陈定华1

(1.贵阳市第四人民医院泌尿外科，贵州 贵阳550002；2.南方医科大学附属珠江医院泌尿外科，广东 广州 510515)

目的 探讨琥珀酸索利那新对女性膀胱过度活跃症患者生长相关蛋白-43及尿动力学影响效果。方法 选取我科收治的女性膀胱过度活跃症患者60例，随机分为两组。对照组30例，予常规异搏定80 mg加生理盐水80 mL配置的无菌溶液进行膀胱灌注，每次保留1 h，并每15 min变换体位，2次/周，1周为1个疗程，治疗4个疗程。实验组30例，予琥珀酸索利那新5 mg晚睡前口服，1周为1疗程，治疗4个疗程。正常组30例，选取健康女性，不予任何治疗手段。治疗结束后，对比各组患者生长相关蛋白-43及尿动力学水平变化情况，并通过PCR逆转录聚合酶链反应检测各组生长相关蛋白-43基因表达水平。结果 (1)经治疗，两组患者生长相关蛋白-43及磷酸化生长相关蛋白水平不同程度降低，实验组较对照组生长相关蛋白-43明显降低(P<0.05)；(2)治疗后两组患者尿动力学均不同程度恢复，实验组尿量、最大尿流率、残余尿量、初始尿意容积较对照组明显改善(P<0.05)；(3)治疗后，两组生长相关蛋白-43及磷酸化蛋白水平均不同程度改善，实验组PCR、生长相关蛋白-43、磷酸化蛋白较对照组明显降低(P<0.05)。结论 琥珀酸索利那新能够明显改善女性患者膀胱过度活跃症状，降低生长相关蛋白-43水平，并抑制相关蛋白磷酸化程度，从而改善膀胱刺激症状，降低膀胱内壁敏感性，改善尿动力学水平。

琥珀酸索利那新； 女性膀胱过度活跃症； 生长相关蛋白-43； 尿动力学

膀胱过度活跃症是一种常见的以尿道—膀胱功能障碍为主要表现的女性泌尿外科疾病[1]，尿动力学检查为检测膀胱过度活跃症的金标准。口服琥珀酸索利那治疗膀胱过度活跃症，可明显降低生长相关蛋白-43水平，从而减轻膀胱内膜神经突出异常兴奋症状，并改善尿动力学，降低残余尿量及日排尿次数等。笔者通过观察对比各组患者生长相关蛋白-43水平及尿动力学状况，并通过PCR逆转录聚合酶链反应检测各组生长相关蛋白基因表达水平，旨在探究琥珀酸索利那新对女性膀胱过度活跃症患者的治疗效果，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2010年1月至2014年1月于我院以膀胱过度活跃症为诊断住院的女性患者60例，以随机数字表法分为实验组30例，平均病程(5.5±2.1)年，平均年龄(50.2±1.8)岁；对照组30例，平均病程(4.9±2.4)年，平均年龄(52.5±1.4)岁；正常组30例，平均年龄(49.9±1.9)岁。两组患者的一般资料相仿，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：符合《中华医学会泌尿外科分会尿控学组》[2]的诊断标准，尿频、尿急、急迫性尿失禁等症侯，可以单独出现，也可以任何复合形式出现；尿动力学可见膀胱贮尿期出现膀胱逼尿肌不自主收缩，从而引起膀胱内压升高，患者感到尿意，有尿急感觉；也可以为其他形式的尿道-膀胱功能障碍；成人排尿次数达到24 h 排尿>8 次，夜间排尿>2 次，每次尿量<200 mL。患者自愿参与实验，并签署知情同意书。方案获得我院伦理委员会批准并全过程跟踪。排除标准：肝、胆严重疾病、恶性肿瘤、神志异常患者、尿路结石、梗阻等造成的膀胱刺激征者。

1.3 治疗方法 对照组参照临床用药指南，予常规盐酸维拉帕米缓释片(德国 Abbott GmbH &制药公司，注册证号：H20080326，商品名 缓释异搏定，0.24 g)80 mg加生理盐水80 mL所配置的无菌溶液进行膀胱灌注，灌注后每15 min变换体位1次，以仰卧、俯卧、左右侧卧为主，每次保留1 h，膀胱容量小者可分段灌注，2次/周，1周为1疗程，治疗4个疗程。实验组30例，予琥珀酸索利那新片(荷兰 Astellas Pharma Europe B.V.生物制药公司，国药准字J20090109，商品名 卫喜康，5 mg)5mg晚睡前口服，正常组30例，选取健康女性，不予任何治疗手段。治疗结束后，对比各组患者生长相关蛋白-43及尿动力学水平变化情况，并通过PCR逆转录聚合酶链反应检测各组生长相关蛋白-43基因表达水平。注意事项：治疗期间禁食生冷等刺激性食物，戒烟酒，保持情绪稳定。

1.4 观察指标及检测方法 (1)生长相关蛋白-43水平：治疗后，采取各组患者静脉血5～10 mL，通过生化检验仪进行化验，测量各组患者生长相关蛋白-43及磷酸化生长相关蛋白水平，记录并比对检验结果。(2)尿动力学状况：治疗前后分别嘱患者饮用1 000 mL水，当尿意最大时，测量尿动力学各项参数，包括尿量、最大尿流率，采用0.9%生理盐水灌注膀胱，检测患者膀胱充盈感觉，并记录残余尿量、初始尿意容积等情况，记录并比对检验结果。检测方法：PCR扩增反应试验，采取各组患者静脉血3 mL，加入PCV扩容剂，通过离心机15 000 r/min离心机中离心15 min，取上清液加入0.1 mol/L pH 7.2的PBS液，后1 000 r/min离心15 min，取上清液3 μL放入PCR仪器中检测。采用双巢PCR扩增反应方法检测生长相关蛋白-43基因表达水平，检测所用引物由上海英骏生物有限公司合成，上游引物：TTA ATA AGTCCTA GTG TATAACT ATG AAT，下游引物：ACT ACCTGAG CAA TTCCCTG CTC TT；并应用GAPDH管家基因作为β内参，GAPDH内参上游引物：AGA TCCA CAA CGGA TAC ATT，下游引物：TCC CTC AAGA TTGT CAG CAA。提取总蛋白基因并行双巢PCR反应，做凝胶电泳及摄影分析。用IBAS图像分析仪对PCR杂交结果进行光密度扫描，测得生长相关蛋白基因条带与GAPDH条带的峰面积积分。

1.5 统计学方法 采用SPSS19.0软件进行统计学分析，计数资料采用χ2方法检验，计量资料采用t检验方法处理，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 生长相关蛋白-43水平 治疗后两组患者生长相关蛋白-43及磷酸化生长相关蛋白水平均不同程度改善，与对照组比较，实验组生长相关蛋白-43及磷酸化生长相关蛋白水平明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 两组生长相关蛋白-43及磷酸化生长相关蛋白水平比较情况

注：治疗后，与对照组比较，△P<0.05。

2.2 两组尿动力学情况比较 治疗后两组患者尿量、最大尿流率、残余尿量、初始尿意容积均不同程度恢复，与对照组比较，实验组尿量、最大尿流率、残余尿量、初始尿意容积明显改善，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 两组尿动力学比较情况

注：治疗后，与对照组比较，△P<0.05。

2.3 各组生长相关蛋白基因表达情况及PCR试验扩增结果 实验结束后，各组均有不同程度的生长相关蛋白基因表达，与对照组比较，实验组表达水平明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。各组生长相关蛋白离心产物进行PCR扩增试验后，试验样本均显示出不同的特异性条带，于对照组比较，实验组PCR反应结果与正常组水平接近，差异有统计学意义(P<0.05)，见图1。

表3 各组生长相关蛋白基因表达比较情况

注：实验后，与对照组比较，差异有统计学意义P<0.05。

注：M.试验β内参；1.模型组 1967 bp；2.正常组 261 bp ；3.实验组 391 bp；4.对照组 1531 bp。图1 各组PCR反应扩增结果比较

3 讨 论

膀胱过度活跃症的病因较为复杂，并因人体生理构造多发于女性患者，是一种常见的急性尿路综合征疾病。临床上可见尿频、尿急、夜尿增多、膀胱残余量增加、尿意容积降低等表现为主[3]。经世界卫生组织统计，全世界尿路疾病患者中有反复发作性膀胱过度活跃症病史的占47.2%，并呈逐年上升趋势[4]。女性由于其尿道短粗直等特征，有高发的尿路感染疾病，容易导致膀胱炎症而造成膀胱内壁敏感性增强，膀胱括约肌及逼尿肌紧张度异常，从而导致尿动力学改变等情况[5]。并且多数膀胱过度活跃症患者由膀胱感染等尿路刺激征所引起，临床治疗后复发几率较高，且药物灌注膀胱治疗方法对患者影响较大、痛苦较重，往往疗效不理想。目前主要应用琥珀酸索利那新口服，其可明显降低机体生长相关蛋白-43水平[6]。研究[7]证实，其蛋白为神经突出激发冲动及增殖修复的主要引物。通过降低相关蛋白水平，抑制蛋白基因在体内的合成及表达，可降低膀胱内壁神经细胞及肌细胞的冲动敏感性，降低贮尿期患者逼尿肌异常收缩，并加强尿路括约肌的收缩力，从而改善膀胱尿动力学水平[8]。笔者为此做了相关研究，主要通过观察对比各组患者生长相关蛋白-43水平及尿动力学状况，并通过PCR逆转录聚合酶链反应检测各组生长相关蛋白基因表达水平，来探究琥珀酸索利那新对女性膀胱过度活跃症患者的治疗效果。

本实验中：(1)两组患者生长相关蛋白-43水平比较：经治疗，两组患者生长相关蛋白-43及磷酸化生长相关蛋白水平不同程度降低，且实验组生长相关蛋白-43、磷酸化生长相关蛋白较对照组明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)，提示琥珀酸索利那新可明显改善膀胱过度活跃症而引起的膀胱内壁及相关局部肌细胞神经突出异常增殖、分化，抑制神经突出的生长，降低神经递质的释放水平，从而改善膀胱活跃程度；(2)两组尿动力学情况比较：治疗后两组患者尿动力学均不同程度恢复，且实验组尿量、最大尿流率、残余尿量、初始尿意容积较对照组尿量明显改善，差异有统计学意义(P<0.05)，琥珀酸索利那新可明显降低膀胱兴奋水平，从而改善患者尿频、尿急、尿紧迫等症状，降低逼尿肌紧张度，提高膀胱及尿路括约肌紧张程度，从而增加膀胱容积及初始尿意容积，减少尿量残留，改善尿动力学水平；(3)两组生长相关蛋白-43及磷酸化蛋白水平比较：治疗后，两组生长相关蛋白-43及磷酸化蛋白水平均不同程度改善，且实验组PCR391 bp、生长相关蛋白-43(0.24±0.17) bp、磷酸化蛋白、较对照组水平明显降低，差异具有统计学意义(P<0.05)，PCR产物通过凝胶电泳试验，可明确显示机体生长相关蛋白水平状况及含量，从而反应出膀胱内神经突出及冲动传到递质生成分泌水平，并且检测特异性较高，可更精确的反应膀胱尿动力学水平，PCR的试验方法快速、敏感、准确、特异性高，对基因水平表达研究可精确试验结果，为临床研究及应用，提供良好基础。

[1] 鲁芳.膀胱过度活跃症治疗经验介绍[J].中国泌尿学,2003,35(10):10-11.

[2] 中华医学会泌尿外科分会尿控学组. 膀胱过度活跃症诊断与防治指南[J].中华医学信息,2009,24(1):20-21.

[3] 张光欣. 膀胱过度活跃症用药治疗观察[J].中国泌尿外科学，1993,14(4):161.

[4] 罗华. 膀胱过度活跃症的中医辨证治疗[J].中华中医杂志,2002,20(1):17.

[5] 王清.治疗膀胱过度活跃症经验[J].实用临床医药杂志，2009,23(4):260.

[6] 黎兰. 膀胱过度活跃症治疗38例[J].中国泌尿系研究,2005,18(1):39.

[7] 周黎明.异搏定及琥珀酸索利那新治疗膀胱过度活跃症 100 例疗效观察[J].中国肾脏研究,2005,37(1):36.

[8] 李维健.琥珀酸索利那新治疗膀胱过度活跃症女性患者的临床治疗观察[J].临床医药实践杂志,2007,16(6):538.

Research of the effect of solifenacin succinate on growth-associated protein 43 and urodynamics of female patients with overactive bladder

HuangYi1,LiuChunxiao2,GaoHong1,ZouHongdong1,HeJiangbo1,ChenDinghua1.

1.DepartmentofUrology,theFourthPeople'sHospitalofGuiyang,Guiyang550002,China. 2.DepartmentofUrology,AffiliatedofZhujiangHospitalofSouthernMedicalUniversity,Guangzhou510515,China.

Objective To investigate the clinical effect of solifenacin succinate on growth-associated protein 43 (GAP-43) and urodynamics of female overactive bladder. Methods 60 female patients with overactive bladder were chosen and randomly divided into control group (CG) and trial group (TG), each groupn=30. CG received intravesical instillation of sterile solution (verapamil 80 mg and normal saline 80 ml), which retaining one hour in each time and changing posture per 15 minutes in this time, twice per week. TG received oral administration of solifenacin succinate (5 mg，once before bed-time). Treatment lasted for 4 weeks in both groups. 30 healthy women were chosen as normal group (NG) and no treatment was given. Changes of GAP-43 and urodynamics in three groups were compared on the end of treatment, and gene expressions of GAP-43 in three groups were detected by using reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). Results There were differently degree of depression of level of GAP-43 and phosphorylation GAP-43 (p-GAP-43) in both group patients after treatment, and level of GAP-43 in TG was markedly lower than CG, there were statistical significantly differences (P<0.05). Urodynamics in both TG and CG had different degree of recovery on the end of treatment. Urine volume, maximum urinary flow rate, residual urine volume and initial urine volume in TG showed more obviously improved and there were statistical significantly differences (P<0.05). Levels of protein expression of GAP-43 and p-GAP-43 in both groups improved in differently degree, and there were statistical significantly differences (P<0.05). Conclusion Solifenacin succinate can improve the symptoms of female overactive bladder and ameliorates urodynamics by reduced the level of GAP-43 and inhibited the degree of phosphorylation.

Solifenacin succinate； Femal overactive bladder； Growth-associated protein 43； Urodynamics

R699.7

A

1000-744X(2016)09-0919-03

2016-05-20)