中医清泻法治疗大鼠梗阻性黄疸肠源性内毒素血症的研究

丁宪群 杨胜波 杨媛媛 梅小才 张礼涛

（贵阳中医学院第二附属医院肝胆外科，贵州 贵阳550001）

肠 源 性 内 毒 素 血 症 （intestinal endotoxemia，IETM）是梗阻性黄疸（obstructive jaundice，OJ）最常见的并发症之一，可造成全身多器官、多系统形态和功能的改变，尤其是需要手术治疗者，术后易发生出血等多种并发症，影响疗效［1］。大量基础及临床研究发现，OJ能导致肠道黏膜的屏障发生损伤，受损后肠道内的细菌、内毒素更容易通过肠道黏膜进入血液循环，发生肠道内的细菌和内毒素移位［2］，此结果会激发患者发生全身炎症反应综合征的机率，进一步发展为多器官功能障碍综合征，重者甚至发生死亡。梗阻性黄疸病人内毒素血症（ETM）的高发生率是其术后高并发症和高死亡率的主要原因［3］。目前临床常用的治疗IETM的西药有乳果糖、多粘菌素等，这些药物常因疗效不确切等原因而限制了其临床应用。因此中医药对IETM的研究受到医学界关注［4］。本研究运用清热解毒、泻下通腑的中药汤剂配合治疗大鼠OJ时IETM，观察此法对IETM的疗效。

1 材料与方法

1.1 实验动物

成年SD（sprgue-dawley）大白鼠，雄性，体质量180～200g，购自昆明医学院实验动物中心。

1.2 试剂及药品

内毒素试剂盒由上海医学化验所提供，TNF-a试剂盒由解放军总医院科技开发中心放免研究所提供。实验药物：将自拟清泻汤中药煎剂浓缩，生药含量0.82g／mL，灭菌冷藏灌胃用。50%乳果糖购自本院药房。

1.3 中药煎剂制备

清泻法自拟方药购自本院中药房，先用5倍的冷水浸泡30min后分别加水3倍煎煮两次，大黄、芒硝后下，合并两次过滤，进一步加热浓缩至170mL，生药含量为0.82g／mL，4 ℃冰箱保存待用。

1.4 实验方法

1.4.1 分组 将大鼠适应性饲养1周后，随机分为空白组、模型对照组、模型清泻法组、模型西药组共四组，每组10只。

1.4.2 造模 模型对照组和模型两组参照文献建立模型，采用10%水合氯醛0.4mL／100g腹腔内注射麻醉，取经右上腹直肌切口入腹，沿肝十二指肠韧带游离并结扎胆总管造模，空白组仅游离牵拉胆总管即可，不结扎。

1.4.3 给药 在造模成功后分别按比例灌胃，清泻法组给自拟清泻汤20mL／kg·d－1灌胃，西药组给西药50%乳果糖20mL／kg·d－1灌胃；模型对照组及空白组在造模的同时分别予生理盐水20mL／kg·d－1灌胃，连续7d。

1.5 观察项目及方法

1.5.1 一般情况观察 包括大鼠的外观、活动、黄疸、饮水及二便等情况。外观指毛色是否光泽及黏膜颜色是否黄染；活动包括纳呆、嗜睡、懒动；饮水量及食量，每日上午9：00给予一定的水（量筒测量）及鼠食（固体，天平称量），至次日上午9：00测定剩余量，两者差值与大鼠数目的比值即为每只大鼠每日饮水量及食量。

1.5.2 实验室指标 给药7d取材。取材前禁食8h，无菌条件下股静脉取血、送检，测定血清内毒素（LPS）、肿瘤坏死因子（TNF-a）、肝功能（ALT）水平。

1.6 统计学处理

采用SPSS 11.0for Windows统计软件及人工处理。所有数据用平均数±标准差（±s）表示。组间计量资料间比较采用F检验—单因素方差分析；两两比较方差齐性时采用q检验，方差不齐性时采用DunnettT3检验；各组治疗前后比较采用t检验。

2 结 果

2.1 一般情况观察

空白组大鼠在术后1d即恢复如术前，整个实验期间毛色有光泽，双眼灵活有神，行动敏捷，对周围变化反应灵敏。模型组和模型对照组术后毛色逐渐失去光泽，眼球光泽差，懒动、纳呆，饮水量减少，术后第1天小便发黄，逐渐加深，术后第5天耳尖及尾巅出现黄疸。第7天制模成功。分组灌胃7d后，模型对照组毛色枯槁无光，消瘦、懒动、纳呆，饮水量减少，小便浓茶样改变，治疗3d后死亡2只；西药组毛色无光泽，萎靡、消瘦、懒动、纳呆，饮水量减少，小便浓茶样改变，治疗5d后死亡1只；清泻法组治疗3d，其症状较模型对照组有改善，毛色无光泽，稍懒动、纳呆，饮水量减少，小便浓茶样改变，治疗第1天死亡1只，考虑为个体因素，衰竭死亡。各组饮水量、进食量测定结果见表1。

表1 日均饮水量、进食量测定结果（±s）

表1 日均饮水量、进食量测定结果（±s）

注：造模期与治疗期比较，＊P＜0.05，△△ P＜0.01；模型对照组与给药组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与西药组比较，☆P＜0.05

组 别 日均饮水量（mL）造模期 治疗期日均进食量（g）造模期 治疗期空白组 11.71±0.95 12.99±3.85 11.95±1.28 11.46±3.43模型对照组 6.31±1.08△△ 4.82±0.93△△ 5.91±1.28△△ 4.98±0.75△△西药组 6.12±1.08△△ 5.01±1.25△△ 5.96±1.02△△ 5.78±1.17△△清泻法组 6.08±0.81△△ 7.57±0.58＊△☆ 6.07±1.05△△ 7.41±1.26△☆

由表1可见，模型对照组、西药组、清泻法组经开腹胆总管结扎法造模后，与空白组比较，日均饮水量、进食量明显减少（P＜0.01），而此三组间日均饮水量、进食量差异无统计学意义（P＞0.05）。在治疗期，模型对照组、西药组、清泻法组经相应治疗后，与空白组比较，日均饮水量、进食量仍差异显著（P＜0.01）；清泻法组经相应治疗后，与模型对照组比较，日均饮水量、进食量明显恢复（P均＜0.05）；西药组与模型对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；清泻法组与西药组比较，日均饮水量差异有统计学意义（P＜0.05），而日均进食量差异无统计学意义 （P＞0.05）；清泻法组治疗前后日均饮水量差异有统计学意义 （P＜0.05），日均进食量差异无统计学意义（P＞0.05），而西药组治疗前后日均饮水量、进食量差异均无统计学意义 （P＞0.05）。

2.2 实验室检测指标

由表2可见，模型对照组、西药组经开腹胆总管结扎法造模及相应的治疗后与空白组比较，LPS、ALT、TNF-a水平差异均有统计学意义（P＜0.01）；西药组与模型对照组比较LPS、ALT差异有统计学意义（P＞0.05，P＜0.01，P＜0.05），TNF-a差异无统计学意义；清泻法组与模型对照组比较，LPS、ALT水平差异有统计学意义（P＜0.01），TNF-a差异亦有统计学意义（P＜0.05）；清泻法组与西药组比较，LPS、ALT差异无统计学意义（P＞0.05），TNF-a差异有统计学意义（P＜0.05）。

表2 各组大鼠LPS、ALT、TNF-a含量比较（±s）

表2 各组大鼠LPS、ALT、TNF-a含量比较（±s）

注：与空白组比较＊P＜0.05，＊＊ P＜0.01；与模型对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与西药组比较，☆P＜0.05

组 别 n LPS（EU／mL） ALT（U／L） TNF-a（ng／mL）10 0.58±0.03 46.70±12.20 0.70±0.20模型对照组 10 12.26±0.23＊＊86.18±23.86＊＊1.32±0.31＊＊西药组10 0.77±0.01＊△△67.06±9.93＊△1.33±0.50＊＊清泻法组 10 0.66±0.07△△56.27±6.39△△ 0.95±0.24空白组△☆

3 讨 论

OJ可以造成多种并发症，其中IETM是术后产生并发症的重要诱因［5］。本实验对三组大鼠结扎胆总管后造模形成OJ，致使胆红素水平早期开始升高，胆汁不能进入肠道，肠道失去胆汁成分对肠黏膜完整性及通透性的保护作用，导致肠黏膜免疫系统受到抑制，LPS吸收入门静脉血后又导致全身免疫功能抑制，从而加重ETM对机体的损害。临床工作中，因结石、肿瘤引起的OJ病人，围手术期处理时常因缺乏有效的治疗手段而使部分患者承受痛苦，医生在治疗上有时也因个体原因而难以选择。因此，寻求多种有效的治疗方法尤为必要。

本研究通过观察清泻法自拟汤治疗OJ时IETM的疗效，是源于中医基础理论认为，黄疸的形成与肝胆和脾胃关系密切，OJ病位在肝胆，病因病机多数医家及学者普遍认为多以湿邪、热邪为主，以脾胃为病变中心，湿热蕴结于肝胆，肝郁失于疏泄，脾虚失于运化，导致气机失畅，气滞湿停，胆汁下行，通降失司，最终致使因胆汁排出障碍而引发黄疸。其治法以清热利湿、泻下通降为主，兼以疏肝理气、活血祛瘀、通阳泻浊、温补脾肾等辩证治疗。本研究采用中医清泻法治疗大鼠梗阻性黄疸IETM，其中清泻法包括清法和泻法，清法重于清热，泻法重于泄邪，二者可取长补短，标本兼治［6］；本方通过中药泻下通腑、清热解毒，既能排出肠道内的细菌也能排出细菌所产生的毒素的机理而设计，疗效与西药乳果糖相似，并有优于乳果糖的趋势。我们体会，在OJ时IETM的治疗中，应根据病人的具体情况，采取中西医结合疗法，取长补短，提高疗效。本方法为临床治疗OJ时IETM提供了一种有效的选择。

［1］ 石景森，王丙煌.外科黄疸疾病诊断治疗学［M］.北京.人民军医出版社，2003：115-116.

［2］ Pain JA，Bailey ME.Measurement of operative plasma endotoxin levels in j-aundice and non-jaundiced patients［J］.Eur Surg Res，1987，19：207-216.

［3］ 黄自强.黄自强胆道外科［M］.济南：山东科学技术出版社，1999：175-176.

［4］ 张青云.茵陈蒿汤为主治疗肝内胆汁淤积症10例［J］.浙江中医杂志，2001，36（3）：100.

［5］ 姜旭，翟晓芳，李哲浩.梗阻性黄疸大鼠小肠组织表达与专化生长因子－β、白介素-8mRNA与内毒素血症的关系［J］.中国现代医学杂志，2012，22（29）：46-48.

［6］ 许正锦，陈进春，邱晓山.国医大师朱良春应用“清泻法”的经验［J］.中华中医药杂志，2011，26（7）：1526-1528.