分泌型卷曲相关蛋白5与2型糖尿病大血管病变相关性研究

李兰芳 曾姣娥

(1.长江大学医学院临床医学系，湖北 荆州 434020；2.荆州市中心医院内分泌科，湖北 荆州 434020)

分泌型卷曲相关蛋白5与2型糖尿病大血管病变相关性研究

李兰芳1曾姣娥2

(1.长江大学医学院临床医学系，湖北 荆州 434020；2.荆州市中心医院内分泌科，湖北 荆州 434020)

目的 观察2型糖尿病大血管病变患者血清分泌型卷曲相关蛋白5(Sfrp5)、白介素-10(IL-10)水平的变化，探讨其在T2DM大血管病变中的临床意义。方法 150例T2DM患者分为实验组和对照组，实验组为T2DM合并大血管病变(IMT≥0.90 mm)患者100例；对照组为T2DM无大血管病变(IMT<0.90 mm)患者50例。另选取50例正常健康人作为正常组。分别检测各组血清Sfrp5、IL-10含量，同时测定各组空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、糖化血红蛋白(HbA1c)等指标。结果 与正常组相比，实验组、对照组血清Sfrp5、IL-10水平显著降低(P<0.01，P<0.05)，且实验组低于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。相关分析显示，Sfrp5、IL-10分别与TC、TG、LDL-C、FBG、HBA1c、糖尿病病程、BMI呈不同程度负相关(r=-0.336、-0.256、-0.293、-0.455、-0.653、-0.667、-0.72，P均<0.01；r=-0.219、-0.242、-0.208、-0.417、-0.543、-0.305、-0.392，P均<0.01 )，而Sfrp5、IL-10之间呈正相关(r=0.347P<0.01)。结论 T2DM大血管病变患者的血清Sfrp5、IL-10水平降低，并与T2DM大血管病变呈负相关。检测Sfrp5、IL-10水平可作为诊断T2DM大血管病变的新指标。

2型糖尿病大血管病变 ； 分泌型卷曲相关蛋白5； 白介素-10

2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大血管病变主要是指脑动脉、颈动脉、冠状动脉、下肢动脉等大血管粥样硬化，是T2DM致死、致残的主要原因。其病理学变化基础是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)。AS是多种因素参与的慢性炎症反应过程。分泌型卷曲相关蛋白5(secreted frizzled related protein 5,Sfrp5)是Ouchi等[1]于2010年发现的一种抗炎脂肪因子, 作为wnt信号通路的抑制剂，可通过竞争结合wnt信号胞外配体wnt5α蛋白，调节脂肪细胞分化、减轻肥胖、改善脂代谢紊乱及胰岛素抵抗、抵抗炎症反应等起到抗AS的作用。近年来，白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)被认为是一种抗炎细胞因子，在粥样硬化病变形成和稳定方面有重要作用。本研究通过观察T2DM大血管病变患者血清中Sfrp5和IL-10水平变化，探讨其在T2DM大血管病变中的临床意义。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选择2015年3月至2015年7月于华中科技大学同济医学院附属荆州医院内分泌科门诊及住院部收治的T2DM患者150例，其中男性75例，女性75例；年龄25～70岁，平均(53.98±10.27)岁。根据IMT检测结果分为两组：实验组为T2DM合并大血管病变(IMT≥0.90 mm)100例，年龄26～70岁，平均(56.30±9.16)岁；对照组为T2DM无大血管病变(IMT<0.90 mm)50例，年龄25～70岁，平均(49.34±10.88)岁。纳入标准：(1)符合2型糖尿病诊断标准(按1999年WHO专家委员会公布的糖尿病诊断和分型标准)；(2)年龄25～70岁，性别不限；(3)病程5～20年；(4)糖化血红蛋白7%～11%；(5)BMI20～30kg/m2；(6)无吸烟史。排除标准： 1型糖尿病及继发性糖尿病；糖尿病急性并发症；育龄期或哺乳期妇女；严重心肝肾功能不全；精神行为障碍；有肿瘤、器官移植及获得性免疫缺陷综合征病史；糖尿病及大血管病变外的其它潜在炎性反应相关因素：各种急、慢性感染。另选取来自华中科技大学同济医学院附属荆州医院体检中心健康体检者50名作为正常组，性别不限，年龄25～63岁，平均(45.12±8.53)岁，无糖尿病、高血压病、冠心病等其它慢性病史和吸烟史，IMT检测正常。实验组、对照组、正常组平均年龄差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 指标检测

1.2.1 一般指标检测 固定专人采用同一测量工具测量身高、体质量,并计算体质量指数BMI(BMI=体质量/身高2)，根据2000年 WHO 推荐的亚洲成年人肥胖诊断标准，BMI≥25为超重，BMI≥28为肥胖，BMI<25为正常。研究对象禁食8～12 h，于次日清晨抽肘静脉非抗凝血5 mL。标本送我院检验科应用全自动生化分析仪测定FBG、HbAlC、TC、TG、LDL-C水平，其中TC、TG、LDL-C采用酶法测定，HbA1C采用高效液相色谱法测定。

1.2.2 Sfrp5、IL-10指标检测 研究对象禁食8～12 h，于次日清晨抽肘静脉5 mL放入常规试管静置1 h，3 000r/min离心10 min后取血清2 mL，测定Sfrp5、IL-10含量。Sfrp5采用ELISA法测定(美国TSZ公司试剂盒，日本西门子BEP3全自动酶标仪)，IL-10采用电化学发光法(美国TSZ公司试剂盒，罗氏电化学发光分析仪 cobas e601)。

1.2.3 影像学指标检测 采用美国西门子S2000型彩色多普勒超声仪行颈动脉超声检查，探头频率8.0 MHz，所有入选人员均由同一超声检查医师检查。受检者取平卧头仰位，头偏向对侧，充分暴露受检者颈动脉部位。对受检者双侧颈动脉进行测量，纵向观察包括左右两侧颈总动脉主干段(分叉前2 cm处)、颈动脉分叉部及颈内动脉(分叉前l cm处)；动脉后壁表现为“双线型”图像，内线为内膜与管腔的分界线，外线为中外膜分界线，其间距离即为内膜中层厚度。左右两侧共6点的平均值作为颈动脉内膜中层厚度(carotid intima-media thickness IMT)，结果进入数据分析。根据2010年《中国高血压防治指南》，将数值≥0.90 mm诊断为IMT增厚，≥1.3 mm定义为斑块形成，<0.90 mm为正常，测量3次，取平均值。

1.3 统计学处理

2 结 果

2.1 一般指标比较

实验组、对照组FBG、TG、TC、LDL-C、HbAlc水平均高于正常组(P<0．01)；实验组FBG水平高于对照组(P<0.01)，实验组与对照组相比TG、TG、TC、HbAlc、BMI水平差异无统计学意义(P>0.05)，结果见表1。三组实验对象中，超重或肥胖患者血清Sfrp5水平低于正常患者血清Sfrp5水平(P<0.01)，结果见表2。

表1 各组一般指标比较

注：与正常组比较，aP<0.01；与对照组相比，bP>0.05，cP<0.01。

表2 BMI不同受试者Sfrp5、IL-10水平比较

2.2 三组Sfrp5、IL-10水平比较

实验组血清Sfrp5、IL-10水平均低于正常组(P<0．01)，对照组血清Sfrp5、IL-10水平均低于正常组(P<0．05),实验组血清Sfrp5、IL-10水平均低于对照组(P<0.01)。见表3。

表3 三组Sfrp5、IL-10水平比较

注：与正常组比较，aP<0.05；与正常组比较，bP<0.01；与对照组比较，cP<0.01。

2.3 相关性分析

数据整理后发现，Sfrp5水平与TC、TG、LDL-C、FBG、HBA1c、糖尿病病程、BMI呈不同程度负相关(r值分别为-0.336、-0.256、-0.293、-0.455、-0.653、-0.667、-0.72，P均<0.01)；IL-10与TC、TG、LDL-C、FBG、HBA1c、糖尿病病程、BMI呈不同程度负相关(r值分别为-0.219、-0.242、-0.208、-0.417、-0.543、-0.305、-0.392，P均<0.01)；Sfrp5与IL-10呈正相关(r=0.347，P<0.01)。

3 讨 论

T2DM大血管病变是多重因素相互作用的结果。T2DM患者的肥胖、糖脂代谢异常、胰岛素抵抗、炎症反应等均是T2DM大血管病变的促发因素，其中通过调节因子增强炎症信号表达而触发的血管炎症反应是引起大血管病的关键环节。

Sfrp5是继脂联素后被发现的又一重要的具有抗炎作用的脂肪因子，其生物学作用主要是通过与wnt相互作用或与Frizzled受体竞争结合wnt蛋白形成无功能的复合体实现的[2-3]。研究显示，Sfrp5在肥胖动物模型脂肪组织中表达水平下调[1]。肥胖患者体质量减轻后血清Sfrp5含量明显升高[4]。Lv等[5]发现，高胰岛素水平能抑制Sfrp5表达。本研究结果显示，在实验组和对照组中，BMI≥25患者血清Sfrp5水平明显低于BMI<25患者血清Sfrp5水平(P<0.01)，说明肥胖患者血清Sfrp5水平是降低的，这与前人研究结果一致。同时，与正常组相比，实验组、对照组血清Sfrp5水平均降低(P<0.01，P<0．05)，说明2型糖尿病患者的胰岛素抵抗能抑制Sfrp5表达，亦与前人研究结果一致。本研究还发现，与对照组相比，实验组血清Sfrp5水平降低(P<0．05)，进一步相关性分析显示Sfrp5与糖尿病病程、BMI、FBG、HbAlC、高脂血症呈不同程度负相关，说明Sfrp5的变化与糖尿病大血管病变相关。它可能是通过肥胖、胰岛素抵抗、高胰岛素血症、脂代谢紊乱、炎症反应等机制引起或加重糖尿病大血管病变。推测其可能的分子学机制是Sfrp5拮抗wnt5参与的Wnt/Ca2+/pkC信号通路的激活，降低炎症因子的表达，减轻血管内皮细胞的损伤而发挥抗AS的作用[6]。

IL-10是一类由活化的单核细胞、T2型T细胞和B细胞等分泌的多功能高活性蛋白质多肽分子，是细胞因子网络的枢纽之一。研究[7]已证实IL-10在人类AS斑块中定位及表达，且能有效阻断AS的发生发展。它能从以下几个方面调节和控制炎症反应, 减轻炎症损伤, 从而发挥对血管内皮和心脏的保护作用:(1)抑制单核细胞、巨噬细胞等炎症细胞产生IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ、MCP-1等促炎细胞因子[8]；(2)通过下调黏附分子CD18和CD62L表达，从而抑制单核黏附血管内皮细胞[9]；(3)下调IL-6诱发的前凝血剂活性剂，抑制外周血单核细胞组织因子(TF)的表达及活性, 从而防止血栓形成[10]；(4)抑制巨噬细胞分泌的基质金属蛋白酶(MMPS)9活性, 增加基质金属蛋白酶组织抑制剂1(T1MP-1)水平,起到稳定斑块的作用[9]。本研究结果显示，与正常组相比，实验组、对照组血清IL-10水平显著降低(P<0.01，P<0.05)，且实验组低于对照组(P<0.05)；相关分析显示IL-10与TC、TG、LDL-C、FBG、HBA1c、糖尿病病程、BMI呈不同程度负相关。说明血清IL-10水平与T2DM大血管病变的发生密切相关，而Sfrp5与IL-10之间呈正相关。

综上所述，Sfrp5、IL-10在T2DM大血管病变的形成过程中具有重要作用，均参与了T2DM大血管病变的发生、发展，T2DM患者血清Sfrp5、IL-10水平的降低促进了T2DM大血管病变的进程。因而联合测定Sfrp5、IL-10有可能成为预测T2DM大血管病变的新指标，为临床有效防治T2DM患者的大血管病变提供依据；但还需大样本进一步研究证实。

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[5] Lv C,Jiang Y,Wang H,et al.Sfrp5 expression and secretion in adipocytes are up-regulated during the differentiation and are negatively correlated with insulin resistance[J].Cell Biol Int,2012,36(9):851-855.

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Correlative research between Sfrp5 and macroangiopathy in type 2 diabetes

LiLanfang1,ZengJiaoe2.

1.ClinicalMedicalCollege,YangtzeUniversity,Jingzhou434020,China. 2.DepartmentofEndocrinology,JingzhouCentralHospital,Jingzhou434020,China.

Objective To investigate the expression levels of serum Secreted frizzled related protein 5(Sfrp5), interleukin-10 (IL-10) in type 2 diabetes mellitus (T2DM) with macroangiopathy, and to carry out clinical significance. Methods 150 patients with type 2 diabetes were selected. According to carotid intima-media thickness (IMT)examination, which were divided into xperimental group (IMT≥0.90mm)100 cases and control group(IMT<0.90mm)50 cases. Other 50 normal persons were normal group. The levels of Sfrp5, IL-10, fasting plasma glucose (FBG), cholesterol (TC), triglycerides (TG), Low density lipoprotein (LDL), glycated hemoglobin (HbA1c) were investigated. Statistical comparison was performed by single-factor analysis of variance and linear correlation analysis. Results The levels of serum Sfrp5 and IL-10 in xperimental group and control group were significantly lower than those of control group(P<0.01,P<0.05). The levels of serum Sfrp5 and IL-10 in xperimental group were significantly lower than those of normal group (P<0.01). Correlation analysis showed that plasma levels of sfrp5 and IL-10 were negatively correlated with TC, TG, LDL-C, FBG, HBA1c, the courses of T2DM and BMI(r=-0.336, -0.256, -0.293, -0.455, -0.653, -0.667, -0.72，P<0.01；r=-0.219, -0.242, -0.208, -0.417, -0.543, -0.305, -0.392，P<0.01). Sfrp5 was positively correlated with IL-10(r=0.347P<0.01). Conclusion The levels of serum Sfrp5 and IL-10 in T2DM macroangiopathy are significantly decreased, and they are negatively correlated with T2DM macroangiopathy. The measurement of them may be a new indicator of T2DM macroangiopathy, the therapy foucs on these two cytokines can provide new clinical evidence for the prevation and treatment of macroangiopathy in T2DM.

T2DM macroangiopathy; Secreted frizzled related protein 5; Interleukin-10

R587.1

A

1000-744X(2016)02-0149-04

2015-11-13)

△通信作者,E-mail:nfmzeng@163.com