肺炎克雷伯菌在医院环境中的分布及耐药性分析

仇广翠，　孙明忠，　邵良荣，　金　浩，　陆　强

(东南大学医学院附属盐城医院检验科，江苏 盐城 224001)

肺炎克雷伯菌在医院环境中的分布及耐药性分析

仇广翠，孙明忠，邵良荣，金浩，陆强

(东南大学医学院附属盐城医院检验科，江苏 盐城 224001)

摘要：目的了解江苏盐城地区三级医疗机构环境中肺炎克雷伯菌的分布和耐药性，为加强控制医院内感染和临床合理使用抗菌药物提供依据。方法采用法国生物梅里埃公司的VITEK-32全自动微生物仪对627例标本进行肺炎克雷伯菌鉴定。并用纸片扩散法(K-B)进行药物敏感性试验检测，采用美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的标准纸片扩散法检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)。结果从627例标本中共检出213株肺炎克雷伯菌，检出率为33.97%。肺炎克雷伯菌在医院环境中的分布以内科病房最高为66.67%，其次为妇产科病房及治疗室分别为43.84%、43.08%；肺炎克雷伯菌对青霉素类氨苄西林和阿莫西林耐药率高达96.70%和99.73%；产ESBLs菌株占34.27%(73/213)。结论医院环境中肺炎克雷伯菌污染较重，耐药率高，耐药谱广。应加强医院环境消毒，加强监测，严格控制院内感染的发生与流行。

关键词：肺炎克雷伯菌；医院环境污染；耐药性；产超广谱β-内酰胺酶

中图分类号：

文章编号：1673-8640(2015)02-0160-04R446.5

文献标志码：码：A

DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.02.014

Abstract:ObjectiveTo investigate the distribution and drug resistance of Klebsiella pneumoniae in the three-tier medical institutes of Yancheng city, in order to provide the reference for the prevention of nosocomial infection and the rational use of antibiotics. MethodsKlebsiella pneumoniae was determined by VITEK-32 automatic microorganism analyzer, which was produced by France BioMerieux Company. A total of 627 samples were used for Klebsiella pneumoniae determination. Drug sensitivity test of Klebsiella pneumoniae was performed by disk diffusion (K-B ) method. Standard disk diffusion method suggested by the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) was employed to conduct the extended-spectrum beta lactamase (ESBL) test. ResultsA total of 213 Klebsiella pneumoniae positive samples were determined from the 627 samples. The positive rate was 33.97%.The highest prevalence of Klebsiella pneumoniae positive samples was observed in the ward of Internal Medicine Department (66.67%), followed by Department of Obstetrics and Gynecology (43.84%) and Treatment Room (43.08%).The resistance rates of Klebsiella pneumoniae to ampicillin and amoxicillin were 96.70% and 99.73%, respectively. A total of 34.27% (73/213) of the determined Klebsiella pneumoniae was ESBL-produced Klebsiella pneumoniae. ConclusionsThe pollution of Klebsiella pneumoniae is common in medical environment with high resistance rate. In order to control the nosocomial infection of Klebsiella pneumoniae, hospital environment disinfection and inspection for Klebsiella pneumoniae pollution are needed to be further strengthened.

作者简介：仇广翠，女，1976年生，学士，副主任技师，主要从事微生物、临床基因诊断和免疫检验工作。

收稿日期：(2014-10-30)

The distribution and drug resistance analysis ofKlebsiellapneumoniaein hospital environmentQIUGuangcui,SUNMingzhong,SHAOLiangrong,JINHao,LUQiang.(DepartmentofClinicalLaboratory,YanchengHospital,SoutheastUniversityMedicalCollege,JiangsuYancheng224001,China)

Key words:Klebsiellapneumoniae; Hospital environmental pollution; Drug resistance; Extended-spectrum beta lactamase

肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae， KPN)是引起临床感染和院内感染的重要条件致病菌[1]，其耐药机制主要与产质粒介导的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)有关。随着广谱抗菌药物特别是第三代头孢菌素的广泛应用，肺炎克雷伯菌在临床标本中分离率逐年增加。尤其是产ESBLs肺炎克雷伯菌，对抗菌药物不但具有很高的耐药性，而且多重性、广谱性耐药的菌株也明显增加，可同时存在多种耐药机制，多重耐药和广泛耐药肺炎克雷伯菌不断增加，易造成医院感染的流行与暴发[2-3]。为了解盐城地区肺炎克雷伯菌在医院环境中的分布特征及耐药趋势， 我们于2011年至2013年对江苏盐城地区选定的医院医疗环境进行肺炎克雷伯菌监测，分析其分布特征及耐药性情况，为制订合理的措施以有效控制本地区肺炎克雷伯菌所致院内感染的发生与流行提供依据。

材料和方法

一、标本来源

我们从江苏盐城地区的三级医院、二级医院、一级医院分别随机抽取了三家医院，对选定医院的病房、手术室、输液室等物体表面和医护人员的手部皮肤，进行采样，并进行肺炎克雷伯菌培养分离。

二、方法

1.仪器菌株鉴定采用法国生物梅里埃公司的VITEK-32全自动微生物仪,所有微生物鉴定卡由生物梅里埃公司提供。

2.药物敏感性试验采用纸片扩散法(K-B)；M-H培养基琼脂纸片由英国Oxoid公司提供。药敏试验结果按2009年版美国临床实验室标准化协会(CLSI)的标准进行判读，质控菌株为大肠埃希菌(ATCC 25922)和肺炎克雷伯菌(ATCC 700603)均由卫生部临床检验中心提供。

3.ESBLs菌株分型ESBLs检测按CLSI推荐的标准纸片扩散法。头孢他啶-克拉维酸与头孢他啶抑菌圈直径相比≥5 mm，或头孢噻肟-克拉维酸与头孢噻肟抑菌圈直径相比≥5 mm，可确证为ESBLs菌株。

三、统计学方法

采用SPSS 16.0统计软件进行统计分析。百分率用于计数资料的描述，不同组别率的差异采用比较χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

结果

一、2011至2013年不同级别医院环境中的肺炎克雷伯菌的检出率

从2011至2013年，三类医院医疗环境采集的627例标本中检出肺炎克雷伯菌213株，总检出率为33.97%，并呈逐年增加趋势。三级、二级和一级医院3年中的总检出率分别为30.71%(78/254)、31.67%(76/240)、44.36%(59/133)。一级医院的肺炎克雷伯菌检出率明显高于三级医院和二级医院，差异有统计学意义(P<0.05)，而二级和三级医院之间检出率差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1　2011至2013年不同级别医院环境中的肺炎克雷伯菌检出率

二、213株肺炎克雷伯菌在医院环境中的分布

从医院病房、治疗室、输液室等的物体表面627例标本中共检出213株肺炎克雷伯菌，检出率为33.97%，见表2。

三、肺炎克雷伯菌的耐药性检测

213株肺炎克雷伯菌对青霉素类氨苄西林和阿莫西林耐药率高达96.70%和99.73%；对第一、三代头孢菌素类头孢唑啉、头孢他定和头孢曲松耐药率为61.88%、54.24%和62.14%；对氨苄西林、复方磺胺甲口恶唑和诺氟沙星的耐药率分别为96.7%、48.83%和96.33%。对氨基糖苷类、磺胺类和喹诺酮类抗菌药物亦有不同程度的耐药。213株肺炎克雷伯菌仅对亚胺培南、亚胺硫霉素、美罗培南药物有较低的耐药率，分别为4.04%、0.52%和1.78%，见表3。

213株肺炎克雷伯菌中， ESBLs阳性的有73株，占检出菌株数的34.27%。与ESBLs阴性菌株相比，除氨苄西林、美罗培南、环丙沙星、亚胺硫霉素等几种抗菌药物外，对其它抗菌药物的耐药率ESBLs阳性菌均明显高于ESBLs阴性菌株(P<0.05)。

表2　213株肺炎克雷伯菌在医院不同环境中的检出率

表3　213株肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物的耐药率(%)

讨论

医院环境中肺炎克雷伯菌的污染，是引起院内感染发生甚至暴发流行的重要危险因素之一。由于肺炎克雷伯菌往往对多种抗菌药物耐药，其引发院内感染时如抗菌药物选择不当可导致患者感染得不到有效控制、病情加重、甚至出现败血症，因此，患者病死率较高。本研究对随机抽取的江苏盐城地区三级医疗机构的2011至2013年3年的院内标本(采集自各类病房、治疗室和输液室等物体表面和医务人员手部)进行了肺炎克雷伯菌检测，结果显示送检的627例标本中，213株肺炎克雷伯菌检出阳性，检出率为33.97%(213/627)，表明该地区医院环境中肺炎克雷伯菌污染较为普遍。对2011至2013年不同级别医院环境中的肺炎克雷伯菌检出率结果显示，一级医院肺炎克雷伯菌检出率达40%以上，显著高于三级医院和二级医院(P<0.05)，导致一级医院肺炎克雷伯菌污染较严重的主要原因可能包括基层医务人员院内感染意识淡薄，医院硬件及卫生条件较差、消毒条件受限等因素。从213株肺炎克雷伯菌在医院不同环境中检测结果分析，不同级别医院的内科病房、治疗室、妇产科病房、输液室物体表面检出率较高，均达25.00%以上，外科病房、儿科病房等检出率在23%~33%，医务人员手也有一定程度的污染，达5.00%。因此，医院管理机构应加强对基层医务人员院内感染业务培训，合理用药，强化消毒意识，加大硬件设施的投入和改进，切实防止院内感染的发生与流行。

鉴于耐药肺炎克雷伯菌所致院内感染的危害性，近年来国内、外研究者对肺炎克雷伯菌耐药状况进行了深入调查与分析，证实其耐药率高，耐药谱广[4-5]。随着第3代头孢菌素的广泛应用，产ESBLs的肺炎克雷伯菌检出率亦逐年升高[6-7]。本研究结果显示213株肺炎克雷伯菌中，多重耐药率(耐4种药物以上)为100.00%。对青霉素类药物氨苄西林和阿莫西林耐药率分别为96.70%和99.73%，对第一代和第三代头孢耐药率54.24%~62.14%，对美罗培南、头孢哌酮-舒巴坦、亚胺硫霉素等几种抗菌药物的耐药率较低(<10%)。肺炎克雷伯菌对氨苄西林、复方磺胺甲口恶唑和诺氟沙星耐药率分别为96.70%、48.83%、96.33%，表明肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类、喹诺酮类和磺胺类也有不同程度的耐药。

综上所述，肺炎克雷伯菌存在多种耐药机制，

其产ESBLs的同时，也可产AmpC酶、碳青霉烯酶等，还可伴有其它耐药机制，导致对各类抗菌药物出现不同程度耐药，乃至多重耐药和广泛耐药。因此，医务人员合理使用抗菌药物，提高院内感染意识，注意病室通风，加强医院环境重点科室肺炎克雷伯菌的监测，尤其是产ESBLs的肺炎克雷伯菌监测，对控制与防止肺炎克雷伯菌院内感染发生和流行是非常必要的。

参考文献

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[3]GIAMARELLOU H．Multidrug resistance in Gram-negative bacteia that produce extended-spectrum beta-lactamases(ESBLs) [J].Clin Microbiol Infect,2005,11(Suppl 4):1-16.

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[7]卜劲松.201株肺炎克雷伯菌耐药性分析及其gyrA基因分析[J].中华医院感染学杂志,2012,22(1): 9-11.

(本文编辑：储怡星)