不同孕期单胎孕妇血清维生素E水平分布范围的调查

王 鹏， 泰淑红， 孟祥颖， 牛 超， 李松磊， 袁恩武

（河南省妇幼保健院 郑州大学第三附属医院检验科，河南 郑州 450052）

维生素E（vitamin E，Vit E）是人体内主要脂溶性维生素之一，是最重要的脂溶性抗氧化剂，参与了多种基因表达的调控[1]，其摄入量异常可导致疾病的发生[2]。孕期女性全身各系统会产生一系列生理变化，使母体能适应胎儿生长发育的需要。目前，国内对于孕期Vit E水平的研究主要集中在妊娠期的早期、中期、晚期[3-4]，缺少细分孕期血清Vit E水平连续变化的相关数据。另外，血清Vit E的参考区间为5～20 mg/L[2]，是正常非孕成人的标准，不符合妊娠期的代谢特点，不适合作为孕妇Vit E水平是否异常的判断标准。孕妇的代谢情况与正常女性的差异较大，对营养的需求较高，营养补充不足会影响胎儿发育。孕妇Vit E水平降低会导致自由基过量积聚，引起血管内皮损伤、胎盘老化，从而增加妊娠期高血压疾病的风险和不良妊娠率；自由基过量积聚还会引起胎膜损伤，增加胎膜早破的发生风险[5-6]。Vit E过量则可能会增强胎儿的血液凝集性、增加新生儿高胆红素血症及核黄疸的发生率[7]。因此，了解不同孕期女性血清Vit E水平的变化特征及其正常分布范围有重要意义。本研究以4周为1个周期[8]，观察不同孕期单胎女性血清Vit E水平的变化情况，并确定其分布范围，为了解孕期女性Vit E代谢、研究其与各种妊娠期疾病的关系提供依据。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2015年9月—2020年2月在河南省妇幼保健院进行孕前体检的女性483名，纳入标准：身体健康，年龄20～35 岁，正常饮食，无药物服用史，本人知情同意。根据Vit E检测结果剔除5个异常离群值，共入组478名（未孕组）。选取同期在河南省妇幼保健院进行围产保健的孕妇3 610例，纳入标准：单胎妊娠，年龄20～35岁，无既往疾病史，无妊娠期疾病和并发症，胎儿发育正常，正常饮食，无药物服用史，本人知情同意。根据Vit E检测结果剔除52个异常离群值，共入组3 558例，根据孕期分为孕6～8周（358例）、孕9～12周（400例）、孕13～16周（400例）、孕17～20周（400例）、孕21～24周（400例）、孕25～28周（400例）、孕29～32周（400例）、孕33～36周（400例）及孕37～40周（400例）9个组。

1.2 样本采集

采用含有分离胶及促凝剂的真空采血管采集所有对象空腹静脉血2 mL，1 728×g离心10 min，分离血清，4 ℃冷链运输，24 h内送至北京和合医学检验所进行检测。溶血、脂血样本需重新采集。样本的采集、处理、保存、运送严格按照实验室标准操作规程执行。

1.3 方法

采用高效液相色谱法测定血清Vit E水平，基本步骤：将血清样本经除蛋白及杂质处理后，加入正己烷萃取有效成分，取上清液，吹干，复溶后上样检测，以视黄醇乙酸酯和α-生育酚乙酸酯为内标。检测仪器为LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津公司）。严格按实验室标准操作规程进行检测。每个检测批次室内质控均在控。实验室每年参加国家卫生健康委临床检验中心室间质评，成绩均合格。

1.4 统计学方法

采用SPSS 24.0软件进行统计分析。离群值的判断采用箱式图法。采用K-S检验进行正态性检验，组间比较采用秩和检验。采用Spearman相关分析评估血清Vit E水平与孕期的相关性。采用百分位数法[P50（P2.5～P97.5）]确定不同孕期Vit E的分布范围。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 未孕组不同年龄女性血清Vit E水平的分布

K-S检验结果显示，未孕组部分年龄段女性血清Vit E水平不符合正态分布（P＜0.05）。未孕组不同年龄段女性血清Vit E水平差异均无统计学意义（P＞0.05）。见图1。

图1 未孕组不同年龄段女性血清Vit E水平分布

2.2 不同孕期女性血清Vit E水平分析

2.2.1 未孕组及不同孕期各组孕妇血清Vit E水平分析 除未孕组、孕6～8周组和孕9～12周组之间以及孕29～32周组、孕33～36周组和孕37～40周组之间血清Vit E水平差异均无统计学意义（P＞0.05）外，其他孕期各组血清Vit E水平随孕期的延长逐渐升高，各组间差异均有统计学意义（P＜0.05、P＜0.01）。见图2。

2.2.2 血清Vit E水平与孕期相关性分析 K-S检验结果显示，不同孕期各组部分女性血清Vit E水平不符合正态分布（P＜0.01）。Spearman相关分析结果显示，血清Vit E水平与孕期呈正相关（r=0.66，P＜0.01）。

2.3 不同孕期血清Vit E水平分布范围的确定

合并血清Vit E水平差异无统计学意义的孕期组，采用百分位数法确定不同孕期女性血清Vit E水平的分布范围，见表1。孕21周后各孕期Vit E水平分布范围上限均高于正常非孕成人参考区间上限（20 mg/L）。

表1 不同孕期孕妇血清Vit E水平的分布范围 mg/L

3 讨论

Vit E又称生育酚，在抗氧化、抗衰老、抗癌变、抗自由基、提高机体免疫功能等过程中发挥重要作用[9]。有研究结果显示，妊娠期Vit E水平与妊娠糖尿病、妊娠期高血压疾病及子痫前期有关[10-11]。由于目前尚缺乏关于各孕期血清Vit E水平连续变化的研究数据，因此本研究以4周为1个周期，探讨不同孕期单胎孕妇血清Vit E水平连续变化的情况。

目前，检测项目参考区间的建立一般采用美国临床实验室标准化协会推荐的直接法[12]，即根据特定标准募集参考人群，规范采样、检测，采用统计分析方法建立参考区间。但直接法需消耗大量人力、物力，持续时间长，过程繁琐，可操作性较差，尤其对于特殊人群，如儿童、老年人、孕产妇，建立参考区间的难度非常大。近年来，有较多学者探讨了间接法建立参考区间的准确性和重复性，他们认为，从现有的检测数据中获得参考区间是一种较为有效的方法[13-14]。间接法建立参考区间具有数据量大，结果较为准确，数据来源的人群可以是孕妇、儿童等直接法难以操作的特殊群体，易于操作，可在数日之内得到结果等优点；但存在不能对人群进行问卷调查和体格检查，不能完全排除“异质”个体的缺点。

本研究在间接法的基础上，通过详细筛选患者资料，排除疾病、异常饮食和药物补充对结果的干扰，制定了“单胎妊娠，年龄20～35岁，无既往疾病史，无妊娠期疾病和并发症，胎儿发育正常，正常饮食，无药物服用史”的入选标准。考虑到部分孕妇可能存在添加配方奶粉或辅食的情况，本研究认为该类食品的配置原则是营养的全面和均衡，是孕妇日常饮食的一部分，且孕妇也应在孕期加强营养，注意各种营养均衡摄取，因此纳入标准中未单独区分。口服Vit E在临床上主要用于心、脑血管疾病及习惯性流产、不孕症的辅助治疗，在纳入标准中已经制定了“无既往疾病史，无妊娠期疾病和并发症”和“无药物服用史”的标准，因此未单独强调。本研究同时采用大样本量“稀释”可能存在的“异质”个体，确保结果的可靠性。

本研究结果显示，20～35岁各年龄段健康女性血清Vit E水平差异均无统计学意义（P＞0.05），提示在20～35岁女性中，年龄的增长不会影响血清Vit E水平。而在孕妇中，血清Vit E水平随孕期的延长而升高，二者呈正相关（r=0.66，P＜0.01）。以往研究结果也提示孕晚期Vit E水平最高，孕早期最低[3-4]。该现象可能与孕妇体内脂类代谢的变化有关。有研究结果显示，三酰甘油可增加Vit E的吸收，血清Vit E水平与总脂肪含量高度相关[2]。孕妇的血脂水平从孕9～13周开始升高，且随孕期的延长而逐步升高，在孕31～36周达到高峰并维持至分娩[15]，妊娠晚期三酰甘油水平可达非妊娠状态的3倍[16]。本研究采用百分位数法确定了不同孕期孕妇血清Vit E水平的分布范围，结果显示，孕21周后各孕期Vit E水平分布范围上限均高于正常非孕成人参考区间的上限（20 mg/L）[2]。

综上所述，单胎孕妇血清Vit E水平在孕13～28周时随孕周的增长而逐步升高，孕21周后血清Vit E水平分布范围的上限高于成人参考区间上限。由于受抽样误差、统计学方法等因素影响，该分布范围能否作为参考区间使用尚需进一步研究。