抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体自动化检测的性能验证

刘凤莲， 丁志芳

（江苏大学附属人民医院检验科，江苏 镇江 212000）

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种慢性、系统性自身免疫性疾病，主要病理特征为对称性、侵蚀性关节炎[1-2]，发病率为0.5%～1.0%[3]。目前，RA的诊断除依靠临床症状、X线检查外，还需结合血清学指标。有研究结果显示，血清抗突变型瓜氨酸波形蛋白（mutated citrullinated vimentin，MCV）IgG抗体与RA患者病情活动程度及影像学改变密切相关[4]。及时、准确、高效地检测抗MCV IgG抗体浓度对于RA的早期筛查及疾病活动度监测至关重要。目前，针对临床化学定量分析的方法学评价已较为成熟，但酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）属于免疫学检测方法，有不同于临床化学定量分析的特点。因此，本研究参考美国临床实验室标准化协会（the Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）相关文件[5-9]和我国卫生行业标准WS/T 494—2017[10]，对江苏大学附属人民医院检验科引进的Alegria全自动自身免疫分析仪及配套试剂（ELISA）组成的检测系统（简称Alegria系统）定量检测抗MCV IgG抗体进行性能验证。

1 材料和方法

1.1 样本来源

收集2019年1—3月江苏大学附属人民医院检验科检测抗MCV IgG抗体且符合实验要求的样本，制备混合血清。同时收集20份健康体检者血清样本。所有样本均按要求离心分离血清后置于-20 ℃保存待用。所有样本均无明显溶血、脂血、黄疸等。

1.2 仪器与试剂

Alegria全自动自身免疫分析仪（德国ORGENTEC公司）及配套抗MCV IgG抗体测定试剂盒（ELISA）、校准品。由于每个检测条均自带质控孔，因此每次测试只要仪器报告“passed”，即可判定质控合格。每次检测时只有质控通过方可判定测定结果有效。

1.3 性能验证

1.3.1 精密度验证 根据CLSI EP15-A2文件[7]要求，对高值[（500±40）U/mL]样本、低值[（40±5）U/mL]样本连续重复测20次，用于评估批内精密度[用变异系数（coefficient of variation，CV）表示]；每天对高、低值样本重复检测4次，连续检测5 d，用于评估批间精密度（CV）。如精密度符合厂商声明（CV≤10%），则验证通过。

1.3.2 正确度验证 参考CLSI EP15-A2文件[7]要求，每天重复测定2次高值（300 U/mL）、低值（40 U/mL）定值标准品，连续测定5 d，计算检测结果的x、s及验证区间。

1.3.3 线性范围验证 参考CLSI EP6-A文件[8]要求，取高值[（500±40）U/mL，标记为H]和低值[（40±5）U/mL，标记为L]混合血清各1份，按照5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H的比例配成6个系列浓度样本（标记为S1～S6）。分别对S2、S4进行10次检测，计算x，根据公式计算低值样本和高值样本的预期浓度值：L=（3×S2-S4）/10；H=（2×S4-S2）/5。按比例关系计算其他样本的预期浓度值。将6个系列浓度样本随机重复检测5次，计算x，作为各自的实测值。以预测值为横坐标、实测值为纵坐标绘图，进行回归分析，计算各样本预期值与实测值的相对偏移，相对偏移（%）=（预测值-实测值）/预测值×100%。如结果满足r2≥0.99且相对偏移＜15%，则线性范围验证通过。

1.3.4 参考区间验证 参考CLSI C28-A3文件[9]要求，选取江苏大学附属人民医院健康体检者20名，其中男10名、女10名，年龄21～76岁。严格按标准操作规程，采用Alegria系统检测抗MCV IgG抗体。如检测结果有≤10%在厂商声明的参考区间外，则参考区间验证通过。

2 结果

2.1 精密度验证结果

Alegria系统检测高、低值样本的批内CV分别为6.50%、4.39%，批间CV分别为7.32%、5.42%，均低于厂商声明的精密度（CV≤10%），精密度验证通过。见表1。

表1 精密度验证结果

2.2 正确度验证结果

低值定值标准品的实测值为40.71 U/mL，s为1.01 U/mL，验证区间为37.43～43.99 U/mL；高值定值标准品的实测值为289.78 U/mL，s为4.36 U/mL，验证区间为275.63～303.93 U/mL。高、低值定值标准品的验证区间均包含定值，且相对差值均＜15%，正确度验证通过。

2.3 线性范围验证结果

线性回归方程为Y=1.027X-5.17（r2=0.993），实测值与预期值的相对偏移均＜15%，厂商声明的线性范围（89.2～726.6 U/mL，r2≥0.95）验证通过。见表2、图1。

表2 6份系列浓度样本检测结果

图1 Alegria系统检测抗MCV IgG抗体的线性拟合曲线

2.4 参考区间验证结果

20名健康体检者的血清抗MCV IgG抗体检测结果仅有1名超出厂商声明的参考区间（0～20 U/mL），参考区间验证通过。

3 讨论

检测系统良好的性能是保证检验结果准确的前提[11]。本研究参考CLSI相关文件[5-9]和我国卫生行业标准WS/T 494—2017[10]，对Alegria系统检测抗MCV IgG抗体的精密度、正确度、线性范围及参考区间进行了验证。结果显示，Alegria系统检测抗MCV IgG抗体高、低值样本的批内精密度分别为6.50%、4.39%，批间精密度分别为7.32%、5.42%，符合厂商声明的精密度要求。高、低值定值标准品的验证区间均包含定值，且相对差值均＜15%，正确度验证通过。线性回归方程为Y=1.027X-5.17（r2=0.993），实测值与预期值的相对偏移＜15%，厂商声明的线性范围（89.2～726.6 U/mL）验证通过。20名健康体检者的血清抗MCV IgG抗体检测结果仅有1名超出厂商声明的参考区间（0～20 U/mL），参考区间验证通过。

Alegria系统与其他自身免疫项目检测系统相比，具有以下几大优势：（1）检测项目广，可检测包括抗MCV IgG抗体在内的80余种免疫学项目；（2）自带温控温育系统，稳定性、重复性均较好；（3）通量高，90 min可检测30份不同的样本；（4）样本用量少，灵敏度和抗干扰能力均较强[12]。

综上所述，Alegria系统检测抗MCV IgG抗体的精密度、正确度、线性范围、参考区间均符合要求，具有良好的检测性能，可用于临床检测。