β-连接蛋白在鉴别浸润性小叶癌和浸润性导管癌中的诊断意义

蒋炜杰

简阳市人民医院 病理科(简阳 641400)

乳腺浸润性小叶癌(invasive lobular carcinoma，ILC)是第二常见的乳腺恶性上皮性肿瘤，仅次于非特殊类型浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma, IDC), 约占浸润性乳腺癌的5%～15%[1]。与IDC相比，ILC临床表现与影像学检查多不明显，且具有特发性和双发性，虽淋巴结转移较IDC少见，但更倾向于发生肺、骨、胃肠道、子宫、卵巢及脑膜转移[2]，因此准确的诊断对于ILC患者的治疗策略制定具有重要的意义。然而有时组织学形态上ILC和IDC两者较易混淆，因此选择有效的免疫组织化学标记物检测对于鉴别IDC和ILC至关重要。E-钙粘蛋白(E-cadherin)及P120连接蛋白是目前临床上常用的辅助鉴别指标，两者在IDC中均表达于肿瘤细胞膜上，而在ILC中E-cadherin往往表达缺失，P120阳性部位在细胞质内。然而，约10%的ILC可出现E-cadherin的表达，且有时P120膜质定位难以判别，因此，急需新的标记物用以辅助IDC和ILC的区分[3]。

Wnt信号通路参与了多种肿瘤的增殖、迁移和转化过程，其中β-连接蛋白(β-catenin)是Wnt通路活化的关键调控因子。同时，β-catenin与E-cadherin和P120在细胞膜上可相互结合构成复合物来维持细胞间连接的稳定性，是调控细胞间黏附能力改变的重要因子[4]，然而β-catenin在IDC和ILC的表达中是否也具有差异罕见文献报道。本研究采用免疫组织化学染色法观察β-catenin在IDC和ILC中的表达，并结合E-cadherin和P120的表达模式评价其辅助诊断价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

本研究收集了四川省简阳市人民医院 2011年1月至2017年12月手术切除的乳腺癌病例51例为研究对象，全部患者均为女性，年龄32～63(45.00±2.48)岁，均因发现乳腺肿块就诊。其中IDC 32例，ILC 11例， 混合型癌(IDC+ILC)8例。所有病例术前均未进行化疗或放疗。

1.2 试剂与方法

组织标本常规 10% 中性福尔马林固定， 石蜡包埋以4 μm厚度切片。免疫组化技术采用 EnVision 两步法，染色步骤按说明书进行。即用型一抗及其来源详细信息如下表(表1)。EnVision 免疫组化试剂盒和 DAB 酶底物显色液均购自福州迈新生物技术有限科技公司。PBS 代替一抗作为阴性对照。

表1 一抗及其来源

1.3 染色结果判定

β-catenin正常表达于细胞膜，以细胞膜出现黄色或棕黄色染色为阳性细胞；β-catenin异常表达于细胞质和核，以细胞质和核出现黄色或棕黄色染色为阳性细胞。E-cadherin和P120 表达于细胞膜或质，以细胞膜或质出现黄色或棕黄色染色为阳性细胞。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 β-catenin在正常乳腺组织和IDC中的表达

在全部32例IDC、11例ILC和8例混合型癌的癌旁和肿瘤中残存的正常乳腺组织中，β-catenin在上皮细胞膜上呈连续的强阳性表达，阳性率100.0%。在32例IDC中，20例β-catenin呈细胞膜强阳性表达(图1A)，阳性率62.5%，12例表现为细胞质和细胞核棕黄色着色的异常表达，阳性率37.5%(图1B)；在8例混合型癌的IDC成分中，4例β-catenin呈细胞膜强阳性表达，阳性率50.0%；4例表现为细胞质/核的异常表达，阳性率50.0%。β-catenin在IDC和混合型癌IDC组织中的表达情况比较，差异无统计学意义(P>0.05)(表2)。

注：A:β-catenin在IDC中呈细胞膜强阳性表达；B:β-catenin在IDC中部分病例表现为细胞质和细胞核棕黄色着色的异常表达

表2 β-catenin在IDC和混合型癌IDC组织的表达情况比较[n(%)]

2.2 β-catenin在ILC中的表达

用免疫组化检测法观察了11例ILC和8例混合型癌的ILC成分中β-catenin的表达，发现11例ILC β-catenin全部表达阴性，即表达缺失，阴性率100.0%；而在混合型癌的ILC部分，与IDC和正常乳腺导管上皮相比，β-catenin表达明显缺失，阴性率100.0%。β-catenin在ILC和混合型癌ILC组织中的表达情况比较，差异无统计学意义(2=0.000，P=1.000)。但β-catenin在IDC和ILC组织中表达情况比较，差异有统计学意义(P<0.05)(图2、表3)。

注：A:在ILC中 β-catenin全部表达阴性:B:混合型病例的ILC成分β-catenin表达缺失，箭头所示为正常导管上皮细胞表达为细胞膜的强阳性

表3 β-catenin在IDC和ILC组织的表达情况比较[n(%)]

2.3 β-catenin与E-cadherin和P120表达的相关性

51例乳腺癌癌旁和残存的正常乳腺组织上皮细胞中，E-cadherin和P120均为连续的细胞膜染色强阳性，阳性率100.0%；在32例IDC和8例混合型癌的IDC成分中，E-cadherin和P120均为连续的细胞膜染色强阳性，阳性率100.0%。两者与β-catenin的阳性表达程度呈正相关(r=0.832，P<0.001)。而在11例ILC和8混合型癌的ILC部分中，E-cadherin表达均表现为不同程度的减弱，甚至缺失，与β-catenin的缺失表达程度呈正相关(r=0.727，P<0.001)；然而，与在IDC和正常乳腺上皮细胞的细胞膜表达模式不同，P120在这些ILC及混合型癌病例中均表现为细胞质棕黄色着色， 而β-catenin表达缺失，两者的表达情况比较，差异有统计学意义(P<0.05)(图3、表4)。

注：A、B:在IDC中E-cadherin(A)和P120(B)均为连续的细胞膜染色强阳性表达模式； C :在混合型病例中β-catenin表达部分缺失，附同一病变区域内E-cadherin表达下调，表现为包膜的不连续着色或者表达缺失；D：ILC中P120表达模式为细胞质棕黄色着色

表4 不同蛋白在ILC和混合型癌ILC组织的表达情况比较[n(%)]

3 讨论

ILC是第二常见的乳腺肿瘤，主要表现为肿瘤细胞失黏附，呈印度列兵样或围绕导管靶环状排列生长，缺乏明显管腔形成。然而乳腺癌是一个异质性肿瘤，同种类型甚至同一病例的乳腺癌组织形态也会有较大差异，临床工作中经常可遇到具有小叶特征的IDC，组织结构、细胞形态和激素表达谱都具有高度相似性，此类IDC往往肿瘤细胞体积稍大，可形成小的巢团，但仍可表现为失黏附性的细胞形态，肿瘤细胞呈印度列兵样或者靶环样排列，与经典的ILC难以区分。尽管两者都可表达ER，对内分泌治疗敏感，但ILC常为多中心性，判断切缘时ILC及混合型癌的标准比非特殊类型的IDC更要严格。此外，ILC更倾向于肺、骨、胃肠道、子宫、卵巢及脑膜的转移[2]，因此准确的鉴别IDC和ILC对于治疗选择和预后评估具有至关重要的价值。目前较公认的是根据E-cadherin和P120的表达模式区分IDC和ILC[5]，在IDC中E-cadherin和P120均表现为连续的细胞膜着色，而在ILC中E-cadherin常常表达下调或缺失，P120则表现为细胞质着色。然而在实际工作中，E-cadherin的表达强弱有时很难判断，且P120细胞质和细胞膜着色也常因人工问题很难区别，因此急需找到一个新的标记物辅助临床诊断。

β-catenin是1989年被Nagafuchi等首先报道的，其基因CTNNB1 位于人染色体 3p21，长23.2 kb，包含16个外显子，编码蛋白大小92 KD[6]。β-catenin是经典Wnt信号通路中重要的转录激活因子，在胚胎发育、器官形成和肿瘤发生中均发挥重要的作用[7]。当Wnt通路激活时，糖原合成酶激酶-3β发生失活，β-catenin不能被降解并进入细胞核，与转录因子相互作用启动转录过程，调控相应基因的表达并进一步导致肿瘤的发生。同时，β-catenin是一类非常重要的黏附因子，可协助E-cadherin和α-catenin蛋白连接，维持组织结构的完整性和极性[7]。本研究结果显示，在正常乳腺组织中，β-catenin定位于细胞膜并呈弥漫性的线性强阳性表达，而在IDC中，尽管全部病例都表现为β-catenin阳性，但37.5%的病例表现为细胞质和核的异常表达，表明Wnt通路可能参与了乳腺癌的发生发展。与正常乳腺组织和IDC不同，11例ILC标本和8例混合性癌中的ILC成分中β-catenin全部表达阴性，同时E-cadherin表达缺失伴P120细胞质表达，与既往研究[5]结果一致的，这可能是由于E-cadherin基因突变或者甲基化导致表达下降从而失去与β-catenin的连接造成的，具体分子机制需要进一步的深入研究。

综上所述，β-catenin是Wnt信号通路的重要组成部分，并与E-cadherin共同作用维持正常细胞的黏附性。ILC中β-catenin表达缺失有利于与IDC鉴别，是辅助E-cadherin和P120诊断的重要标记物，对乳腺癌的分类和治疗方法的选择及预后评估均具有显著意义。