紫外分光光度法测定眼用固体脂质纳米粒中氟比洛芬含量

赵亚鑫 汪海洋 姚庆强

（1山东省医学科学院药物研究所，山东 济南250062；2济南大学山东省医学与生命科学学院，济南250200）

氟比洛芬（Flurbiprofen）是一种新型的丙酸类非甾体抗炎镇痛药，主要通过抑制前列腺素合成酶起作用［1－2］。眼科临床使用的制剂为氟比洛芬钠滴眼液（0．03%，w／v），用于抑制内眼手术时缩瞳及术后抗炎［3］。普通滴眼液存在一定的刺激性，且眼部给药后滞留时间短，需频繁给药［4］。

固体脂质纳米粒（solid lipid nanoparticles，SLN）是以固态合成或天然类脂如三酰甘油、单硬脂酸甘油酯、卵磷脂等为载体材料，将药物包埋或夹嵌于类脂核内制得的固体胶粒递药系统，是20世纪90年代初发展起来的一种可替代脂质体、乳剂和聚合物纳米粒的新型胶体递药系统［5－6］。将氟比洛芬制备成固体脂质纳米粒，可以降低对眼部的刺激，并具有延长眼部滞留及减少给药次数等优点。

本文在制备氟比洛芬固体脂质纳米粒滴眼剂的基础上，建立了利用紫外分光光度法测定固体脂质纳米粒制剂中氟比洛芬含量的方法，旨在为该制剂的进一步研究提供实验依据。

1 仪器与试药

EL204型电子天平（梅特勒托利多仪器有限公司仪器公司）；TU－1901型双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；DF－101S集热式恒温加热磁力搅拌器（郑州长城科工贸有限公司）。氟比洛芬原料药（湖北远成赛创科技有限公司，含量＞99%）；单硬脂酸甘油酯（天津市博迪化工有限公司）；聚乙二醇－15羟基硬脂酸酯（Solutol® HS 15，巴斯夫（中国）有限公司）；其他试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。

2 方法与结果

2．1 氟比洛芬固体脂质纳米粒的制备

称取处方量药物和单硬脂酸甘油酯置烧杯中，80℃加热搅拌作为油相。另将含有处方量Solutol®HS 15的20ml水溶液加热至80℃，作为水相。在磁力搅拌下，将油相迅速滴加到水相中，继续搅拌10min，制得初乳。超声处理得氟比洛芬SLN混悬体系，4℃保存备用［7］。

2．2 供试溶液的制备

对照品溶液的制备。精密称取已干燥至恒重的氟比洛芬原料药10mg，置于100ml量瓶中，用乙醇定容至刻度，摇匀制得质量浓度为100μg／ml的标准贮备溶液。供试品溶液的制备：精密移取SLN混悬剂1ml，置于50ml容量瓶内，加入适量无水乙醇超声处理10min，待自然冷却到室温后用乙醇定容至刻度，摇匀后用0．22μm微孔滤膜过滤即得。同法制得空白固体脂质纳米粒溶液。

2．3 方法学建立

2．3．1 最佳测定波长的选择 取适宜浓度氟比洛芬溶液、空白固体脂质纳米溶液，以蒸馏水作为空白，在200～400nm波长范围内扫描紫外光谱。结果显示，氟比洛芬在247nm波长处有最大吸收，而空白固体脂质纳米粒在247nm波长处无吸收。因此，选择247nm波长为最佳测定波长。见图1。

图1 紫外吸收光谱图

2．3．2 标准曲线的绘制 精密称取干燥到恒重的氟比洛芬对照品10．0mg，置于100ml容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，得100μg／ml的标准贮备液。

分别精密移取标准储备液0．5、1．0、2．0、3．0、4．0ml，分别置于50ml容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为1．0、2．0、4．0、6．0、8．0 μg／ml的对照品溶液。以无水乙醇作空白，测定247nm波长处吸光度值，以吸光度值（A）对质量浓度（C）进行线性回归，其回归方程为A＝0．0784 C＋0．0079（r＝0．9992）。结果表明，氟比洛芬浓度在1．0～8．0μg／ml范围内，吸光度值与浓度的线性关系良好。

2．3．3 精密度试验 将低、中、高（2．0、4．0、6．0 μg／ml）3种浓度氟比洛芬标准溶液，于室温放置，1日内连续测量5次，计算其日内精密度；相同条件连续测量5d，计算其日间精密度。结果显示，日间精密度 RSD 分别为0．86%、0．98%、1．25%（n＝3），日内精密度的 RSD分别为1．31%、1．56%、1．82%（n＝3），日间精密度及日内精密度均符合测定要求。

2．3．4 稳定性试验 将浓度为6．0μg／ml氟比洛芬标准溶液，在室温下放置 0、2、4、8、12、24h，在247nm处测定吸光度。结果其RSD为1．02%（n＝3），表明氟比洛芬在24h内其吸光度较为稳定，符合测定要求。

2．3．5 重复性试验 精密量取载药的SLN制剂5份，按“2．2”项下溶液制备方法进行操作，测定吸光度值，其RSD为0．65%（n＝5），表明本方法重复性良好，能满足分析要求。

2．3．6 加样回收率测定 精密移取1ml空白SLN混悬液9份，分别置于9个50ml棕色容量瓶，并将量瓶分为3组，每组3份。于每组量瓶中加入标准贮备液（100μg／ml）2．0、3．0、4．0ml，配得高、中、低3种不同浓度溶液。分光光度法于247nm波长处测定吸光度值，通过回归方程计算氟比洛芬回收率，结果见表1。由结果可知平均回收率为98．0%，RSD 为1．72%（n＝9），表明本分析方法符合要求。

表1 回收率试验结果（n＝9）

2．4 样品检测

制备3批载药SLN制剂，按照“2．2”项下方法制备供试品溶液。以无水乙醇为空白对照，在247 nm波长处测定吸光度值，利用回归方程得浓度C，计算SLN制剂中氟比洛芬的含量，结果见表2。

表2 SLN中药物含量测定结果（n＝3）

3 讨论

针对眼科应用的氟比洛芬滴眼剂存在的不足，本文研制的固体脂质纳米粒制剂，选择单硬脂酸甘油酯为脂质载体材料，通过其对药物的包埋负载作用，可大大降低药物本身的刺激性不良反应。固体脂质纳米粒的乳附性质，能够延长药物在眼部的滞留时间，进而提高药物的生物利用度［8］。

制备固体脂质纳米粒的乳化剂种类较多，本试验选用的Solutol®HS 15对药物含量测定无干扰。

本文建立了紫外分光光度法测定固体脂质纳米粒眼用制剂中氟比洛芬含量的方法，方法学验证结果显示本方法操作简便易行，重现性好，准确度高，结果准确可靠，可用于测定其中药物含量。

［1］ 周海波，张向荣，王岩，等．氟比洛芬羟丙基－β－环糊精包合物的研制［J］．中国医院药学杂志，2008，28（18）：1539－1541．

［2］ 彭俊杰，蔺聪聪，李江，等．氟比洛芬的大鼠在体肠吸收动力学研究［J］．药学学报，2013，48（3）：423－427．

［3］ 沈锦秋，甘勇，甘莉，等．氟比洛芬酯眼用纳米乳－离子敏感型原位凝胶的研究［J］．药学学报，2010，45（1）：120－125．

［4］ Goold Health Systems．Therapeutic class review：ophthalmic NSAIDs［R］．Wyoming Pdlac：Goold Health Systems，2009．

［5］ 索绪斌，张 涵，王文青，等．丹参酮ⅡA固体脂质纳米粒缓释凝胶骨架片的制备［J］．中国新药杂志，2015，24（5）：576－580．

［6］ 王贤儿，钟希文，梅全喜，等．固体脂质纳米粒在中药经皮给药中的研究进展［J］．中国药房，2015，26（13）：1860－1862．

［7］ Tian B C，Zhang W J，Xu H M，et al．Further investigation of nanostructured lipid carriers as an ocular delivery system：In vivo transcorneal mechanism and in vitro release study［J］．Colloids and Surfaces B：Biointerfaces，2013，102：251－256．

［8］ 丁立新，柴佳丽，李 焕，等．固体脂质纳米粒的研究新进展［J］．中国民康医学，2014，26（20）：69－71．