枯草芽孢杆菌对鲫鱼机体免疫力的影响

摘要：試验旨在研究在鲫（Carassius auratus）的饵料中添加不同水平的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），探究枯草芽孢杆菌对其机体免疫功能的影响。试验选择体质健康、规格均匀、体重约为5g的鲫320尾，随机分成4个处理组，每组4个重复，每个重复20尾鲫鱼。对照组鲫投喂基础饵料，试验组鲫分别投喂添加0.1%、0.2%和0.4%的枯草芽孢杆菌的基础饵料。试验鲫驯养2周后进行8周的正式试验。试验结束后，每组挑选20尾鲫采集血液，检测血清免疫指标。结果表明，与对照组相比0.2%组和0.4%组的枯草芽孢杆菌可以使鲫的血清中溶菌酶活性显著提高8.77%和8.50%（P<0.05），碱性磷酸酶活性显著提高了20.04%和23.05%（P<0.05），超氧化物歧化酶活性显著提高了9.93%和13.15%（P<0.05），丙二醛水平显著降低了27.36%和33.79%（P<0.05），过氧化氢酶活性显著提高了23.74%和30.55%（P<0.05）。综上所述，在鲫养殖中饵料中添加0.2%和0.4%的枯草芽孢杆菌可以提高鲫机体的非特异性免疫功能，且综合数据结果，在鲫的养殖中使用0.2%的枯草芽孢杆菌即可。

关键词：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）；鲫（Carassius auratus）；免疫功能

中图分类号：S965.117文献标志码：A

随着中国鲫养殖规模逐渐壮大，养殖密度提高，导致鲫的机体免疫力低下，生长性能受阻，机体健康严重受到影响[1]。2020年7月开始禁止在动物饲料端添加具有促生长、预防疾病的抗生素后，寻找具有抗生素功能，安全、高效、绿色、无残留、无耐药的饲料添加剂已成为养殖行业的研究重点。其中，微生态制剂是一种可以调节动物肠道菌群结构、改善肠道健康的活菌制剂，在替代抗生素方面具有显著的效果[2]。而枯草芽孢杆菌属于芽孢杆菌属的一种，在腐败的有机物、土壤、动物肠道中分布较为广泛[3]。目前，枯草芽孢杆菌在畜禽及水产生物养殖中均有较为广泛的应用研究成果，如于道德等[4]研究表明，在凡纳滨对虾养殖生产中使用适量的枯草芽孢杆菌可以提高对虾机体的免疫力及抗病力，进而改善生长性能。赵峰等[5]研究发现，在罗非鱼生产中添加0.2%的枯草芽孢杆菌可以改善肠道健康，调节血脂平衡，提高机体免疫力，进而促进生长。但目前枯草芽孢杆菌在鲫鱼养殖生产中的应用研究结果比较少见，因此，该试验探讨不同剂量的枯草芽孢杆菌对鲫鱼机体免疫力的影响，为枯草芽孢杆菌在水产动物养殖中的应用及提高水产动物机体健康提供参考依据。

1  材料与方法

1.1 枯草芽孢杆菌和鲫

该研究使用的枯草芽孢杆菌由中国水产科学院淡水渔业研究中心提供，其有效活菌数为1.0×108CFU/g。鲫由山东省泰源水产养殖有限公司提供。

1.2 试验设计

试验选择体质健康、规格均匀、体重约为5g的鲫320尾，随机分成4个处理组，每组4个重复，每个重复20尾鲫。对照组鲫投喂基础饵料，试验组鲫分别投喂含有0.1%、0.2%和0.4%的枯草芽孢杆菌的基础饵料。试验鲫驯养2周后进行，正式试验为期8周。试验结束后，每组挑选20尾鲫采集血液，检测血清免疫指标。试验设计如表1所示。试验鲫基础饵料配方见表2。

1.3 鲫的养殖管理

正式试验开始前，鲫驯养2周适应养殖环境，之后从中挑选320尾体质健壮、规格均匀、体重约为5g的鲫进行正式试验。试验选用16个规格为（长0.8m×宽0.5m×高0.8m）玻璃缸，每缸放鱼20尾。

每日各组鲫分别在8：00、12：30和18：30投喂3次，投喂量约为鲫体重的3.5%。养殖水中连续充气，水温约为22.5℃，pH值约为8.0，溶解氧浓度大于6mg/L，氨氮浓度小于0.1mg/L，亚硝酸盐浓度小于0.03mg/L。

1.4 免疫指标的测定

试验结束后，从每组中挑选20尾鲫鱼尾静脉采血，使用离心机4000r/min离心5mins，收集血清用于检测血清中的溶菌酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶及丙二醛等免疫指标。检测步骤及方法参考试剂盒说明书，试剂盒由南京建成生物工程研究所生产。

1.5 数据分析

免疫指标数据使用SPSS22软件进行t检验分析，组间数据两两比较使用LSD方法，结果以平均值呈现，P<0.05表示数据具有显著性差异。

2 结果

枯草芽孢杆菌对鲫血清免疫指标的影响见表3，在鲫的饵料中添加0.2%和0.4%的枯草芽孢杆菌可以有效增强机体的免疫力。与对照组相比，溶菌酶活性分别显著提高了8.77%和8.50%（P<0.05），碱性磷酸酶活性分别显著提高了20.04%和23.05%（P<0.05），超氧化物歧化酶活性分别显著提高了9.93%和13.15%（P<0.05），丙二醛水平分别显著降低了27.36%和33.79%（P<0.05），过氧化氢酶活性分别显著提高了23.74%和30.55%（P<0.05）。

3 讨论

鲫机体的免疫力关系到机体健康及养殖生产的经济效益。邵林等[6]在鲫鱼养殖中，在水中添加100mL的枯草芽孢杆菌，可以有效提高血清中溶菌酶、超氧化物歧化酶及碱性磷酸酶活性，降低了丙二醛含量。谢少林等[7]在鲫鱼养殖中，在饵料中添加适量的枯草芽孢杆菌可以有效提高鲫鱼血清中超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性。以上研究结果与该研究结果类似。

该研究中，使用0.2%和0.4%的枯草芽孢杆菌可以使鲫的血清中溶菌酶活性显著提高了8.77%、8.50%；碱性磷酸酶活性显著提高了20.04%、23.05%；超氧化物歧化酶活性显著提高了9.93%、13.15%；丙二醛水平显著降低了27.36%、33.79%；过氧化氢酶活性显著提高了23.74%、30.55%。表明枯草芽孢杆菌有效改善了鲫机体的非特异性免疫力。枯草芽孢杆菌提高鲫鱼机体免疫力主要是由于枯草芽孢杆菌可以抑制养殖中对机体有害的微生物（如弧菌、大肠杆菌和杆状病毒等）；枯草芽孢杆菌可以能分泌几丁质酶，可以将水中的有毒有害物质、残饵、粪便等分解，净化水质；枯草芽孢杆菌具有较强的消化酶活性（蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶），可以使水产动物采食饵料后，对饵料中营养物质充分消化吸收，供机体利用。

4 結论

该试验中，在鲫的饵料中添加适量的枯草芽孢杆菌可以显著提高血清中溶菌酶、超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶、过氧化氢酶活性，有效降低了脂质氧化物丙二醛的水平，改善了机体的非特异性免疫力，且枯草芽孢杆菌的最适添加水平为0.2%。

参考文献：

[1]刘晓东.鲫鱼高效养殖技术要点[J].特种经济动植物，2021，24（08）：38-39.

[2]孙远远，管剑峰，黄晓慧，等.微生态制剂在水产养殖水质调控中的应用[J].水产养殖，2022，43（11）：15-17+31.

[3]吴孔阳，娄亚芳，杨同香，等.枯草芽孢杆菌功能及相关机制研究进展[J].黑龙江畜牧兽医，2020（23）：55-58.

[4]于道德，陈胜林，郭少菁，等.饲料中添加枯草芽孢杆菌HSP05对凡纳滨对虾生长性能、抗病力和非特异性免疫力的影响[J].动物营养学报，2022，34（10）：6634-6642.

[5]赵峰，陆娟娟，夏中生，等.果寡糖、枯草芽孢杆菌和金霉素对奥尼罗非鱼生长性能、血清生化指标和肠道菌群的影响[J].饲料研究，2019，42（04）：123-128.

[6]邵林，李璟，乐露，等.枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌对鲫鱼免疫机能的影响及其代谢产物的抑菌活性研究[J].黑龙江畜牧兽医，2018（20）：176-178.

[7]谢少林，王超，李正光，等.饲料中添加枯草芽孢杆菌对彭泽鲫生长、免疫的影响[J].水产科技情报，2015，42（05）：268-271.

Effect of Bacillus subtilis on the immunity of Carassius auratus organism

DU Hongyi

（Dongming County Fisheries Service Centre， Dongming 274500， Shandong China）

Abstract：The experiment aimed to investigate the effect of Bacillus subtilis on the immune function of Carassius auratus by adding different levels of Bacillus subtilis to their baits. The test was conducted on 320 healthy， uniformly sized Carassius auratus weighing about 5g， randomly divided into 4 treatment groups with 4 replicates of 20 carp each. The control Carassius auratus were fed with basal bait and the test Carassius auratus were fed with basal bait supplemented with 0.1%， 0.2% and 0.4% of Bacillus subtilis respectively. The test Carassius auratus were domesticated for 2 weeks and then subjected to a formal trial for 8 weeks. At the end of the trial， blood was collected from 20 Carassius auratus in each group and serum immunological parameters were tested. The results showed that Bacillus subtilis in the 0.2% and 0.4% groups significantly increased the serum lysozyme activity of the Carassius auratus by 8.77% and 8.50% （P<0.05）; alkaline phosphatase activity by 20.04% and 23.05% （P<0.05）; superoxide dismutase activity by 9.93% and 13.15% （P<0.05）; malondialdehyde level significantly decreased by 27.36% and 33.79% （P<0.05）; catalase activity significantly increased by 23.74% and 30.55% （P<0.05）. In conclusion， the addition of 0.2% and 0.4% Bacillus subtilis to the bait in Carassius auratus culture could improve the non-specific immune function of the Carassius auratus organism. According to the comprehensive data results， 0.2% Bacillus subtilis can be used in Carassius auratus culture.

Keywords：Bacillus subtilis; Carassius auratus; immune function

作者简介：杜洪义（1970.9- ），男，汉族，山东东明人。山东省东明县水产服务中心高级工程师。主要从事淡水养殖、渔业病害防治、水生动物营养与饲料加工、水产品质量安全检测员等技术工作。