方正银鲫的人工繁殖技术

王卫义1 王红卫2 王世恒3*

（1.哈尔滨水产良种场 哈尔滨150076；2.中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室 江苏无锡214081；3.哈尔滨市鱼苗繁育试验场 哈尔滨150059）

1、研究的目的与意义

方正银鲫（Founder auratus gibelio Bloch）原种产于黑龙江省的方正县双凤水库，是我国特有的三倍体鲫鱼之一。为了保护好这一宝贵的名优鲫鱼，我国已将方正县双凤水库确定为国家级方正银鲫的原种生产基地。方正银鲫体侧扁而比普通鲫高，体型短。头小，吻钝。口端位，下唇厚，唇后沟仅限于口角，无须。眼小，位于头侧上方。背鳍具硬刺，外缘平直，后缘锯齿粗，排列稀。胸鳍不达腹鳍。尾鳍分叉浅，上下叶末端尖。体色背部黑灰色，背鳍和臀鳍与背部色同，体侧深银白色，体侧的每个鳞片边缘或多或少显示出饰边。背鳍硬刺3（4）；背鳍分枝鳍条数：16～19，多数为17。第一鳃弓外侧鳃耙数：44～54，多数为49。侧线鳞29～32，多数为30～31。脊椎骨总数为颅后椎数、腹椎数、尾椎数之和，即：30～31＝4＋（12～13）＋14。肝脏肥大、柔软、褐红色，几乎覆盖整个肠脏，其重量占体重的6.5%～7.4%。其食性为杂食性。

方正银鲫属鲤形目、鲤科、鲫属。方正银鲫的性成熟年龄，不管在自然水体或池塘人工养殖条件下，一般都在1龄，但繁殖都要到第2年。方正银鲫在自然水体中雄鱼所占比例约为4.1%。在池塘养殖条件下，当年自交子代雄鱼所占比例平均为14.1%。方正银鲫雌鱼与鲤、鲫等雄鱼交配子代的雄鱼所占比例，与所选交配雄鱼的亲缘关系远近有一定关系。方正银鲫的绝对怀卵量，随着体长、体重的增长而增加。如体重16g个体的绝对怀卵量仅为3360粒，而体重达到400g的绝对怀卵量可达到8万～9万粒。方正银鲫在双风水库的产卵期，约在5月中旬到6月初。

水温达到14℃以上时就可产卵，在池塘条件下其产卵期一般在5月中旬前后，在长江以南地区产卵期可提前到3月底到4月初。自然水体条件下方正银鲫分批产卵，产卵期较长，可能要1个月左右。方正银鲫在人工催产条件下，需要1～2d将卵巢中的卵产出，而在人工挤卵情况下可以像鲤鱼、鳊鱼和鲢鱼那样一次将卵全部排出，即使这样，挤出的卵也仅占卵巢的1/3～1/2。方正银鲫有着自身的繁殖特性，是两性型的雌核发育种群，当银鲫卵子与同种或异种（鲤、鲫）精子受精，精子进入卵细胞内刺激卵细胞的发育，但精子的头部并不进一步形成有功能性的雄性原核，结果只在一个雌性原核的参与下卵子进一步发育形成后代。但进入卵内的精子是卵细胞发育的必要条件。在天然水体，方正银鲫依靠同种雄鱼繁殖后代，在人工条件下，方正银鲫可与鲤、鲫等异种雄鱼繁殖后代，且后代大都为雌鱼。

2、实验材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 实验地点

黑龙江省方正县双凤水库孵化车间1号2号孵化池。

2.1.2 亲鱼来源

亲鱼取自双凤水库5号亲鱼池。

2.1.3 实验设备

产卵池、孵化池、亲鱼夹、注射器（1mL、5mL、10mL）、注射针头（6、7、8号）、马来酸地欧酮（DOM）和促黄体素释放激素A2（LRH-A2）、消毒锅、镊子、研钵、量筒（10mL、50mL）、温度计、秤、托盘天平、解剖盘、面盆、毛巾、纱布、药棉、人工鱼巢（钢筋框架，0.5m×2m）、氧气泵、pH计、筛绢网等设备和器具。

2.1.4 水源

水源来自方正县双凤水库自然水体。

2.2 实验方法

2.2.1 成熟度鉴定

成熟雌鱼头稍大而体较狭长，个体比同龄雌鱼小，腹部膨大柔软。腹部朝上，可见卵巢流动状。胸鳍光滑无追星，泄殖孔突出有红点。雄鱼头稍大而体较狭长，个体比同龄雌鱼小，狭窄，轻压腹部有精液流出，胸、腹鳍和鳃盖粗糙，有追星，内凹，无红点。方正银鲫亲鱼的鉴别见表1。

表1 方正银鲫亲鱼雌、雄鉴别标准

2.2.2 扎制鱼巢并消毒

方正银鲫产粘性卵，需要有附着物（鱼巢），以便受精卵粘附在上面发育。扎制鱼巢的天然材料，只要质地柔软，纤细须多，在水中易散开不易腐烂的均可应用，多用棕榈皮。棕榈皮必须经过水煮0.5h以上，除去单宁酸等有毒物质，使用前再用0.01%的亚甲基蓝消毒1h以上，然后用清水反复冲洗将药物洗去后晾干备用。鱼巢为钢筋框架，每片1m2（0.5m×2m），2片为一组，将消毒过的棕榈皮缝在60目的筛绢上。

鱼巢设置的方式，将带棕榈皮的筛绢网片铺在孵化池的底部以全部覆盖池底为标准，四周用网片竖立，并用带棕榈皮竹竿漂浮在孵化池水面，使亲鱼在跳跃授精时能使受精卵产在鱼巢上。

2.2.3 亲鱼的催产

在自然条件下，当水温上升到16℃时，方正银鲫就可以产卵，但由于其产卵为分批性，所以很难依靠自产形成规模生产。因此，必须集中催产。集中催产的好处是可形成生产规模，出苗齐，鱼苗体质健壮。

2.2.3.1 选择的药物及剂量

催产剂选用鲤、鲫鱼的脑下垂体，每kg亲鱼用脑下垂体5～6mg，使用时用研钵将脑下垂体研成粉末，加入0.7%生理盐水，配制成注射液；或用鲤、鲫鱼脑下垂体1mg和LRH-A230～35ug的合剂或促黄体素释放激素A2（LRH-A2）4ug和马来酸地欧酮（DOM）2mg的合剂。

2.2.3.2 催产方法

雌鱼采用的是在亲鱼胸鳍基部一次性注射到胸腔的方法。注射鱼胸鳍基部的无鳞凹陷处，注射高度以针头朝鱼体前方与体轴呈45～60°角刺入，注意针不要扎得太深，约1.2cm～1.5cm，以免伤及心脏。雄鱼采用的是肌肉注射的方法。注射时用亲鱼夹夹住亲鱼并使其侧卧在水中，将鱼的背部露出水面，在侧线与背鳍间的背部肌肉进行注射。注射时，把针头向头部方向稍挑起鳞片刺入2cm左右，然后把注射液徐徐注入。注射完毕后迅速拔出针头。

催产的效应时间为8～12h。注射催产剂的时间一般选在17：00～18：00，这样，第二天清晨即可产卵，有利于接卵、换巢和人工授精。考虑到方正银鲫的产卵特点和实际生产需要，方正银鲫早期的催产成功率高，到后期（6月初）由于水温过高，卵巢过熟等种种原因，催产率明显降低。因此，应根据苗种的需要量，集中催产3～4批，每批间隔时间不超过3～4d，在15～20d内争取催产全部结束。

2.2.4 亲鱼的自然受精

将人工催产完成的亲鱼按雌雄1∶1的比例放入产卵池内，产卵池事先布置好鱼巢，控制好水温（23℃左右）、pH（7～8）和溶氧（6～8mg/L），并用小型水泵配合施以流水刺激，等待亲鱼自然产卵排精。产后捕捞亲鱼检查产卵情况并计算催产率。

催产率%=（产卵雌鱼数/催产雌鱼数）×100。

2.2.5 受精卵的孵化过程及管理

2.2.5.1 受精卵的孵化过程

孵化是指受精卵经胚胎发育至孵出鱼苗为止的全过程，这一时期叫胚胎前期。此时的胚体结构与成体相比，差异较大，体内和体表都有一些器官，如鳔、鳍等没有形成，必须在脱膜以后继续形成。以后的发育生长属于胚后期。这个时期，胚体进一步增长，胸鳍长出，鳔管由中肠背壁细胞分化形成鳔，体表色素细胞逐渐增多，卵黄囊体积缩小最终消失，口张开主动摄食，并自由游动。方正银鲫卵的孵化过程（胚胎发育）的长短与水温有密切关系。在水温15℃时，孵化需140h左右；水温20℃时，需91h；水温25℃时，需49h；水温30℃时，需43h。水温超过30℃以上，对胚胎发育极为不利，畸形怪胎较多。当水温过低，则孵化时间延长，也会引起胚胎发育不正常。

根据观察，在水温17～19℃时，方正银鲫胚胎发育过程为：卵受精后吸水膨胀，约1h25min形成胚盘，胚盘形成后5min开始细胞分裂。受精后4～5h发育到囊胚前期，从囊胚前期到囊胚末期需较长的时间，约需10h左右，从囊胚期到原肠期则需6h。胚轴形成后，眼及背部肌节出现，继之耳囊形成，胚胎的各部器官渐趋完善。受精后4昼夜，胚胎活动加强，尾部摆动频繁，不久破卵膜孵出。

2.2.5.2 受精卵的孵化期间管理

方正银鲫孵化与四大家鱼和鲤鱼等相似，也要求在良好的环境条件下孵化，这些条件有水温、溶解氧、水质、生物等。

（1）水温

前已提到，温度是鱼类胚胎发育的重要因素，它直接影响孵化进程的长短。方正银鲫的孵化时间要比四大家鱼长，适宜孵化水温在18～25℃之间，最适水温为22℃左右。水温低于18℃或高于25℃以上，都会引起胚胎发育的停滞或胚胎不健全。

（2）溶氧量

试验证明，方正银鲫在胚胎期尾芽出现后，耗氧量明显增加，为早期的2倍多，到孵化期，其耗氧量达到最高峰，为早期的8倍左右。这说明水中溶解氧对胚胎发育极为重要。它们不能忍受较低的溶解氧（1.6mg／L以下），当水中溶解氧不足，局部地区鱼卵过密，都能引起局部缺氧死卵，而死卵腐烂到卵膜消失，耗氧要比胚胎发育耗氧较高时呼吸的氧量大9倍以上。因此，应严格掌握鱼卵放置密度。孵化的溶解氧，一般要求不要低于4～5mg／L。

（3）水质

要使用未被污染的水源。现在不少的江河水被工业废水污染，使用前要进行水质分析。因此，目前以应用地下水较好，但用前也要进行水质分析。使用时要先经曝气、增氧和升温。孵化用水应过滤，防止敌害生物及污物进入。

（4）清除敌害生物

小鱼、蝌蚪、桡足类等对鱼卵和鱼苗都有严重的危害。防治办法为：用水时严格过滤，如敌害生物混入后则用网捞除，或用90%的晶体敌百虫使孵化用水呈0.2mg／L浓度，或使水源水成1mg／L，以杀灭虾类和桡足类。

（5）日常管理

①测氧：每天早、晚坚持测氧，鱼苗孵出前后、午夜要加测一次。测氧水应取自表层、底层和两鱼巢之间的水样，掌握其昼夜耗氧规律，了解溶解氧最少时间，做好预测。

②调节水深和水质：鱼苗池孵化，每天鱼巢要调换地方，以防局部缺氧。孵化池孵化要根据测氧情况，适时排掉老水，注入新水。孵出前后，早、晚要各换水一次，最好有一个空池，倒池彻底换水最好。因为银鲫受精卵孵化一般要4～5昼夜，这时池底积有大量污泥、死卵，耗氧极大，因此要彻底换水，以后出苗也较干净。一些地方，先将鱼巢放在一个较大的鱼池（0.5亩左右），待到要孵出时，再移入孵化池。为提高池水温度，可利用晴天气温高，上午将池水排掉，留下30cm水浸过鱼巢，这样可较快的提高水温，促进胚胎发育，晚上再加水到一定深度以保持水温。遇到寒潮，可将池水加到最深。同时每天上午要轻轻摇动鱼巢，洗去附在卵上的污泥。

3、试验结果

本次实验历经21d，共孵化3批鱼苗。第一批出苗150万尾，第二批出苗120万尾。第三批出苗80万尾。

根据亲鱼的发情行为的开始时间判断催产的效应时间为16h，催产注射时间是在17：00进行的，到22：00有追逐行为。翌日早晨9：00产卵。催产率是90%，受精率是75.0%，孵化率是70.8%（表2至表7）。

表2 孵化用水的理化指标

表3 催产剂的效应时间

表4 催产率

表5 受精率

表6 孵化率的计算

表7 出膜鱼苗数／40h（万尾）

4 讨论

效应时间：所谓效应时间是指注射催情剂之后到开始发情产卵所需要的时间，经注射催产剂后，亲鱼受到激素的作用，产生生理反应，当逐渐出现雄亲鱼追逐雌亲鱼并且越来越兴奋的现象时，此时叫“发情”，也是效应时间的开始。

发情达到高峰时，发现雄亲鱼顶雌鱼的腹部，使雌鱼侧卧水面，腹部和尾部激烈收缩运动，有的亲鱼只在水下追逐，在同一时间雌雄亲鱼跳跃的现象。水面时常出现波纹和泡沫，随之逐渐激烈，鱼的游速加快，浮躁不安，此时为受精的高峰期。

4.1 影响效应时间的因素

在相同的鲫鱼种类，相同的注射次数，相同的水质条件下，可以看出效应时间的长短与水温呈负相关。水温高会缩短效应时间，相反水温的降低会延长效应时间。这主要是由三方面因素决定的：①水温直接作用于性腺，影响酶和激素的活性和作用。水温高酶的活性就高，反之，活性就低。②影响性腺对脑垂体分泌的促性腺激素的敏感性。水温高，敏感性高，反之则低。③影响垂体促性腺激素的合成和分泌。水温高合成和分泌加快，反之缓慢。

4.2 影响人工繁殖效果的因素

选择好亲鱼。选择体质健壮、体形肥满、无病无伤、性腺发育成熟程度好的亲鱼。本试验所用的是经过筛选的亲鱼,从而保证了人工繁殖的顺利进行。

合理布置鱼巢。鱼巢要铺在产卵池的底部并全部覆盖池底，四周也要围好，以使鱼卵能尽量多地排在鱼巢上。本试验鱼巢在摆放时有空隙，致使部分鱼卵排在了产卵池壁上，从而影响了实验结果。

亲鱼成熟度的判断要准确，以确定合适的药物剂量。雄亲鱼从头向尾方向轻挤腹部即有精液流出，若精液浓稠，呈乳白色，入水后能很快散开，为性成熟的优质亲鱼；若精液量少，入水后呈线状不散开，则表明尚未完全成熟，若精液呈淡黄色近似膏状，表明性腺已过熟。雌亲鱼腹部明显膨大，后腹部生殖孔附近饱满、松软且有弹性，生殖孔红润则表明成熟较好；若亲鱼后腹部小而硬，卵巢轮廓不明显，生殖孔不红润，则表明性腺成熟度不够；若亲鱼腹部过于松软，无弹性，则表明亲鱼性腺已退化。对成熟较好的催产亲鱼用药剂量不能太大，否则易导致早产。人工催产的方法要科学合理，成熟较好的亲鱼用一次注射的方法，成熟不好的要分两次注射的方法，注射的部位及深度要准确，太深会伤害鱼体，太浅则会导致药物流失而催产失败。催产的时间掌握要准确，过早会使亲鱼早产而精卵成熟度不好，过晚则会使精卵过熟，在最佳的时间给亲鱼注射催产药物才能使亲鱼能够产出优质的精卵。催产药物要求即配即用不能放置太久，防止变质。

加强孵化期间的管理。及时清排池中的污物保证其良好的孵化环境；清除池面的死卵防止因死卵或卵皮包裹而引起的受精卵缺氧死亡；杀灭敌害生物，使敌害能够得到有效的预防和控制。

4.3 药物种类的选择

首先是对多巴胺的选择。多巴胺的抑制作用在某些鱼类是很强的，如金鱼，鲤鱼等，如果不注射多巴胺拮抗剂PIM和DOM，LHRH-A或其它的促性腺激素释放激素GnRH类似物，对促使促性腺激素释放的剂量依存反应就不能表现出来。其次是对HCG的选择，HCG的选择与性腺发育程度密切相关，对于性腺发育成熟度高的个体可以少用或不用，而对性腺发育较差的个体，可适当增加用量，但是因为HCG有较强的副作用，过高的剂量会导致亲鱼的死亡。