微小RNA-324-5p在颈动脉粥样硬化患者血清中的表达水平及预后评估价值分析

周涛龙 黄丽芳 袁 昊 李艳芳

（珠海市慢性病防治中心，广东 珠海 519000）

颈动脉粥样硬化是因细胞、细胞外基质及胆固醇聚集而引起动脉壁硬化、增厚诱发的一种疾病，免疫细胞、血源性炎症因子、血管平滑肌细胞及血管内皮细胞是颈动脉粥样硬化病变的几个主要组成部分[1]。现阶段，大量临床研究已经阐明了诱发颈动脉粥样硬化的发病机制，由于受动脉壁上滞留的脂蛋白修饰和氧化作用影响，导致血管发生慢性炎症，单核细胞及T细胞均被吸引至血管壁上，单核细胞随后迁移到血管内膜上并转化为巨噬细胞，然后将脂蛋白吸收后形成泡沫细胞，同时增厚的动脉内膜导致产生脂肪条纹，而脂肪条纹最后会发展形成粥样斑块[2-3]。虽然在明确该类发病机制的基础上采取了针对性治疗方案，对患者疾病预后有了明显改善，但颈动脉粥样硬化与心血管代谢紊乱依然是主要的发病和致死原因。因此，迫切需要探索新的诊断方法和寻找更敏感的血清标志物来检测、预防、治疗颈动脉粥样硬化。微小RNA是一种非编码的内源性小RNA分子，是调控细胞黏附、迁移、增殖、转移、侵袭及炎症反应的重要因子，可调控多种疾病的病理发展过程[4]。本研究观察微小RNA-324-5p在颈动脉粥样硬化患者血清中的表达水平及预后评估价值，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

纳入2020年6月至2021年6月本院收治的80例经实时荧光定量PCR检测颈动脉超声确诊的颈动脉粥样硬化患者（实验组）及经实时荧光定量PCR检测明确的80例健康者（对照组）为研究对象。排除脑中风、心脏病、心绞痛、心力衰竭、高血压、糖尿病、肝肾功能不全、短暂性缺血事件、风湿性免疫疾病、癌症及其他心血管疾病患者，所有受试者对本研究知情同意。

1.2 方法

所有受试者禁食一晚后集中采集外周静脉血，分离血清后备用。将TRIzol添加入受试者血清中提取总RNA，按说明书操作说明将RNA逆转为cDNA。使用SYBR green I Master Mix试剂盒在实时PCR系统上实施荧光定量PCR反应，将U6作为反应过程中内参，用2△△Ct方法对微小RNA-324-5p的相对表达量进行计算。

1.3 观察指标

比较两组微小RNA-324-5p在颈动脉粥样硬化患者血清中的表达水平；分析微小RNA-324-5p的表达量与CIMT值相关性及其预后评估价值。所有受试者均进行为期4年随访，在固定时间点记录受试者心血管终点事件，包括心肌梗死、卒中、急性心衰、短暂性脑缺血发作、冠状动脉介入治疗、不稳定性心绞痛、周围血管介入等导致的住院及死亡。

1.4 统计学分析

2 结 果

2.1 比较两组的一般资料

两组性别、年龄、体质量指数比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

表1 两组一般资料对比（±s）

表1 两组一般资料对比（±s）

组别对照组实验组χ2/t值P值例数（n）80 80男32 34女48 46年龄（岁）55.17±2.41 55.39±2.62 0.553 0.581体质量指数（kg/m2）26.87±2.06 26.54±2.25 0.968 0.335性别0.103 0.748

2.2 比较两组微小RNA-324-5p表达水平

实验组微小RNA-324-5p在颈动脉粥样硬化患者血清中的相对表达量为（1.37±0.32），对照组相对表达量为（1.59±0.74），实验组微小RNA-324-5p表达水平明显低于对照组，差异有统计学意义（t=2.441，P=0.016）。

2.3 颈动脉粥样硬化患者RNA-324-5p表达水平与CIMT值相关性分析

本研究中颈动脉粥样硬化患者的CIMT平均值是（0.924±0.241）mm，Spearman相关性系数分析结果显示，微小RNA-324-5p在CIMT值相对较低的颈动脉粥样硬化患者中表达，并且微小RNA-324-5p的表达量与CIMT值呈负相关，差异有统计学意义（P＜0.001）。见图1。

图1 颈动脉粥样硬化患者RNA-324-5p表达水平与CIMT值相关性

2.4 微小RNA-324-5p在颈动脉粥样硬化患者总体生存率中的预后评估价值分析

单因素和多因素Cox回归分析结果显示，微小RNA-324-5p是颈动脉粥样硬化的独立预后因子，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 颈动脉粥样硬化患者单因素和多因素Cox回归分析

3 讨论

微小RNA-324-5p在17p染色体之上，该基因在髓母细胞瘤、肝癌等不同类型癌症中具有异常重要的调控作用。当心肌缺血再灌注损伤后，患者的微小RNA-324-5p表达水平会随之有所降低，微小RNA-324-5p水平调控会对线粒体凋亡、分裂及心肌梗死产生影响，具体机制是MTFR1/微小RNA-324-5p/NFAT4为一个信号轴，共同参与心肌细胞凋亡及线粒体裂变的调节[5-6]。且有研究指出，在二尖瓣狭窄、心力衰竭、扩张型心肌病、缺血性心肌病中微小RNA-324-5p及RNA-199a-3p表达处于失调状态[7]。本研究中，实验组微小RNA-324-5p在颈动脉粥样硬化患者血清中的表达水平明显低于对照组（P＜0.05），这与颈动脉粥样硬化的并发症缺血性心肌病及心力衰竭的表达水平一致。

CIMT能够借助颈动脉超声在患者体内实施精准测定，是临床诊断评估颈动脉粥样硬化可靠而简便的亚临床指标。相关流行病学资料表明，CIMT值变化与未来是否发生心血管事件之间具有显著相关性，且CIMT值提升已经被证实是颈动脉粥样硬化发病的敏感标志物[8]。本研究通过检测受试者CIMT值发现，Spearman相关性系数分析结果显示，微小RNA-324-5p在CIMT值相对较低的颈动脉粥样硬化患者中表达，并且微小RNA-324-5p的表达量与CIMT值呈负相关（P＜0.05）。研究提示微小RNA-324-5p低表达是诊断颈动脉粥样硬化新的潜在标志物。另外，本研究对受试者进行随访并通过多因素的Cox回归分析，结果显示微小RNA-324-5p是颈动脉粥样硬化的独立预后因子（P＜0.05）。研究提示微小RNA-324-5p低表达的颈动脉粥样硬化患者发生不良心血管事件的概率更高，可辅助用于评估患者的预后恢复情况。

综上所述，颈动脉粥样硬化患者存在微小RNA-324-5p低表达，可作为临床诊断的潜在血清标志物，且微小RNA-324-5p低表达与患者预后不良密切相关。